使用 Amicon^® 超離心過濾器進行尿液濃度分析

尿液中特定蛋白質的精確測量對診斷和管理疾病非常重要。然而，尿液蛋白質的濃度通常低於臨床檢測的檢測限。 Amicon^® Ultra-4 mL 10 kDa MWCO 裝置 可用於在臨床實驗室分析前濃縮尿液樣本。

方法

使用&nnbsp;Amicon^® Ultra-4毫升10 kDa MWCO過濾器。

1. 測定24小時尿液樣本中的總蛋白質。
2. 將4 mL尿液注入Amicon^® Ultra-4 mL裝置。
3. 以 3400 x g 離心 30-45 分鐘（直到獲得約 25-50 μL 濃縮樣本為止）。
4. 將移液管吸頭插入過濾器底部，抽取濃縮樣本。
5. 對濃縮物進行瓊脂糖電泳，定量測量輕鏈並識別其他蛋白質。確定輕鏈佔尿液中成分總數的百分比。然後將輕鏈的百分比乘以 24 小時總蛋白質濃度（克/24 小時容量）。
6. 對濃縮液進行免疫固定電泳，以識別輕鏈。

使用 Centricon® (C) 和 Amicon® Ultra (A) 離心濃縮裝置濃縮尿液樣本中的游離免疫球蛋白輕鏈 (Bence-Jones 蛋白質) 的電泳解析結果。每個泳道中 ~25 kDa 的深色條帶代表這些蛋白質。

其他注意事項

1. 免疫固定電泳也可在尿液濃縮物中看到正常的異質免疫球蛋白。這種「階梯效應」由微異質輕鏈組成。Bence-Jones 蛋白可能就在這個階梯中。
2. 如果抗原過量，則需要稀釋濃縮液，直到抗原（本瓊斯蛋白）和抗體達到平衡。

相關產品

1. Amicon^® Ultra 裝置也可用於濃縮血清、血漿和腦脊髓液，以進行類似的分析。瓊脂糖電泳檢測病患的游離輕鏈需要約 20 mg/mL 的濃度。免疫固定電泳的檢測靈敏度是瓊脂糖電泳的 10 倍。
2. 靜態濃縮器（Minicon^® 裝置） 也可用於濃縮尿液中的 Bence-Jones 蛋白。

鳴謝

本方案中使用Amicon^® Ultra裝置進行尿液濃縮的研究是由德州博蒙特Helena實驗室的Mark Merchant博士進行的。

參考資料

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2. Kahn SN. 1991. Dear Dr. [Bence] Jones... 37(9):1557-1558. https://doi.org/10.1093/clinchem/37.9.1557

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5. Christenson RH, Tucker JA, Allen E. 1985. Results of dipstick tests, visual inspection, microscopic examination of urine sediment, and microbiological cultures of urine compared for simplifying urinalysis.. 31(3):448-451. https://doi.org/10.1093/clinchem/31.3.448