RT-qPCR - 定量反轉錄 PCR

RT-qPCR，或稱定量反轉錄 PCR，結合了反轉錄和定量 PCR 或即時 PCR 的效果來擴增和檢測特定目標。RT-qPCR 有多種應用，包括量化基因表達水平、驗證 RNA 干擾 (RNAi)、  以及偵測病毒等病原體。在這種技術中，產生用於測量 DNA 數量的螢光信號的常見方法是使用水解探針（如 TaqMan^® 探針）或雙鏈 DNA 結合染料（如 SYBR^® Green 染料）。

什麼是 RT-qPCR？

定量反轉錄 PCR (RT-qPCR) 涉及到 RNA 的檢測和定量。此過程透過逆轉錄酶將總 RNA 或 mRNA 逆向轉錄為互補 DNA (cDNA)，接著使用稱為定量 PCR (qPCR) 或即時 PCR 的技術擴增和檢測此 cDNA 的特定目標。在此 PCR 過程中的每個週期，都會使用各種螢光化學方法即時測量 DNA 的數量。產生螢光信號的最常見方法是使用水解探針（如 TaqMan^® 探針）或雙鏈 DNA 結合染料（如 SYBR^® Green 染料）。

螢光化學品的選擇取決於各種因素，如應用、成本，以及檢測是單重檢測還是多重檢測。DNA 結合染料是單一、低通量檢測的首選，因為它們更容易設計、設定時間較短，而且更具成本效益。

有關 qPCR 的更多資訊，請參閱我們的 qPCR 的應用

RT-qPCR 有多種應用。RT-qPCR 技術可用於：

• 量化基因表達水平
• 驗證 RNAi 以研究選擇性基因的功能喪失
• 偵測病原體，如病毒，以診斷傳染病
• 偵測基因改造生物 (GMO)

一步式 RT-qPCR vs 兩步式 RT-qPCR

RT-qPCR 可採用一步式或兩步式檢測。在選擇合適的 RT-qPCR 方法時，必須考慮成本、應用和檢測類型等各種因素。

圖 1. 一步式 RT-qPCR 工作流程與兩步式 RT-qPCR 工作流程的比較圖。

單步 RT-qPCR

在單步 RT-qPCR 中，反轉錄或 cDNA 合成和 qPCR 是在單管中進行的，使用序列特異性引物來擴增特定目標。基因改造的逆轉錄酶通常用於一步法檢測，因為它們可以耐受序列特異性引物退火所需的較高溫度。在對同一基因進行重複定量時，尤其是在高通量和診斷應用中，一步法檢測是首選。選擇一步法檢測的另一個考慮因素是 RNA 的品質和稀缺性。

兩步式 RT-qPCR

在兩步式 RT-qPCR 中，反轉錄和 qPCR 反應分別在具有不同緩衝液和試劑的獨立試管中進行。隨機六聚體、oligo-dT 引物和/或基因特異性引物可用於兩步法檢測。使用獨立的緩衝液和試劑可以更靈活地選擇逆轉錄酶和 PCR 試劑，有更多的選擇來優化和提高困難模板的擴增效率。第一步合成的 cDNA 較為穩定，可進一步濃縮和/或純化，儲存以備未來使用，或用於同一樣本中多個基因的定量分析。

表 1. 用於一步式和兩步式 RT-qPCR 分析的主要特徵和引物。

Assay Type	Primers used	主要特點
一步式 RT-qPCR	序列特異性引物
兩步 RT-qPCR	Oligo (dT) 引物、隨機六聚体和/或序列特異性引物	可靈活地分別優化 RT 和 PCR 反應 允許從單一 RNA/RT 樣本進行多重 PCR，無須多重複用 更多 RT 引物的選擇 可儲存穩定的 cDNA 供日後使用

在我們的 qPCR 產品 ® Green 型應用。

我們的產品可輕鬆融入您的 PCR 工作流程，並提供多種可靠的產品，適用於一步式 RT-qPCR 實驗 - 您不會做出錯誤的選擇。發現 KiCqStart^® 產品 並找到針對您的儀器最佳化的ReadyMix™主混合物或探索我們的 JumpStart™選項 可根據您的實驗需求進行優化的套件。若要使用序列特異性螢光探針進行高通量、快速循環、一步式 RNA 定量，請選擇 KAPA PROBE FAST 通用試劑盒。自信地選擇我們的任何 RT-qPCR 產品，而不會降低品質。

One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ KiCqStart^®。 -  與所有主要 qPCR 儀器相容

我們的 KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ 試劑具有嚴格的熱啟動機制，可提供更高的特異性，其配方對樣品中的 PCR 抑制劑具有高度耐受性。這些高靈敏度的即用型主混合物設計方便，包含 qPCR 或 RT-qPCR 所需的所有基本成分。只需加入引物、探針和水即可完成雞尾酒分析。本產品是快速或傳統 qPC 的理想選擇

。

Cat. No.	產品名稱	特點
KCQS07<	KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™	適用於Bio-Rad®、Cepheid®、Eppendorf®、Illumina®、Corbett®和Roche®  儀器
KCQS08<	KiCqStart® 一步探針RT-qPCR ReadyMix™, Low ROX™	適用於Applied Biosystems® (ABI)和Stratagene® 儀器
KCQS09	KiCqStart® 一步探針RT-qPCR ReadyMix™, ROX	適用於Applied Biosystems® (ABI)儀器

在我們的 Full Instrument Compatibility Chart or discover our Custom qPCR Probes。

JumpStart™ Taq ReadyMix™ - 可針對所有主要 qPCR 儀器進行最佳化

我們的 JumpStart™Taq ReadyMix™ RT-qPCR 產品結合了 Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase (M-MLV RT) 和我們的 JumpStart™ 抗體失活 Taq 聚合酶的優點。穩健的 M-MLV RT 即使在溫度較高的情況下，也能透過困難的次級結構進行轉錄，而我們的 JumpStart™ Taq 聚合酶則提供比標準 Taq 聚合酶更高的特異性和靈敏度。

結帳時使用代碼 SGX，RT-qPCR ReadyMix™ (QR0200)可節省 20%。

Cat. No.	產品名稱	特點
QR0100	SYBR® Green RT-qPCR	特異性高，污染風險低，易於重複
QR0200	RT-qPCR ReadyMix™ (綠色RT-qPCR ReadyMix)適用於探針型應用	高特異性、低污染風險、易於重複性

KAPA PROBE FAST - 與所有基於螢光探針的技術相容

KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix 通用試劑盒是以 RNA 為模板進行即時 PCR 的靈敏且方便的解決方案。該試劑盒專為使用序列特異性螢光探針進行高通量、快速循環、一步式 RNA 定量而設計。它與所有以螢光探針為基礎的技術相容，包括雜交探針（如螢光共振能量轉移 (FRET) 探針）、水解探針（如 TaqMan^® 探針）和位移探針（如分子信標）、

本试剂盒是一种即用型鸡尾酒，包含除引物、探针和模板以外的所有成分，用于快速循环、基于探针的实时 PCR。該試劑盒包含 KAPA PROBE FAST qPCR Master Mix、ROX High 和 ROX Low 參考染料、KAPA RT Mix 和 dUTP。

Cat. No.	產品名稱	特點
KK4752	KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix (2X) Universal Kit	使用序列特異性螢光探針進行高通量、快速循環、一步式RNA定量分析

ABScript II 一步式 RT-qPCR 探針試劑盒 - 與所有主要 qPCR 儀器相容

本試劑盒中的 ABScript II 反轉錄酶可提供可靠的 RNA 反轉錄。反轉錄後，Taq 聚合酶的熱啟動版本會在 95 °C 下啟動，ABScript II 反轉錄酶也會同時失活。在順序 PCR 反應中，Taq 聚合酶的 5′-3′ 外切酶活性會裂解雜交探針，將報告物與淬滅劑分離，釋放螢光信號。

ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit 是一種即用型試劑盒，可在單管中進行反轉錄和隨後基於探針的 qPCR。該試劑盒的靈活格式包括兩個獨立的 50X 濃度的 ROX（被動參照）染料，可根據特定 qPCR 儀器的要求添加。

Cat. No.	產品名稱	特點
RK20407<	ABScript II 單步 RT-qPCR 探針套件	分析低輸入 RNA 樣本，低污染風險

僅供研究使用。

兩步式 RT-qPCR 產品提供更高的彈性

我們提供進行反轉錄所需的所有試劑，然後在不同的試管中對合成的 cDNA 進行 PCR 分析，以提供您實驗中更高的彈性。您可以放心地將我們的兩步 RT-qPCR 產品整合到您的 PCR 工作流程中，而不會降低靈活性。

cDNA 合成試劑盒和混合物

為滿足您的反轉錄需求，請選擇各種類型的酵素和多種包裝方式。所有這些產品都包含第一條鏈合成所需的試劑，並提供包含單獨試劑的試劑盒以進行最佳化，或提供完整的混合物以進行快速方便的第一條鏈合成。

Cat. No.	產品名稱	特點
STR1	Enhanced Avian First-Strand Synthesis Kit	高度純化的eAMV-RT -在高溫下轉錄困難的次級結構 偵測低豐度mRNA
11483188001	RT-PCR用第一鏈cDNA合成套件	包含AMV RT，與M-MuLV RT相比具有更高的耐熱性。
RDRT	ReadyScript™cDNA合成混合物	靈敏且易於使用的兩步RT-PCR解決方案 ReadyScript™是由RNase H...(RNase H...)酵素所製成。酵素為 RNase H (+) 改性的 M-MuLV RT
11117831001	cDNA 合成套組	優化的單管程序，可從總 RNA 或 mRNA 合成長達 3 kb 的雙鏈 cDNA
THIFICDNARO	Transcriptor高保真cDNA合成試劑盒	優化兩步RT-PCR
5893151001	Transcriptor通用cDNA母液	方便快速的cDNA合成和即時PCR分析解決方案< 無論您使用的是哪一種 PCR 儀器，這款以兩瓶形式提供的母液都能充分發揮您的 qRT-PCR 分析的潛力

RT 酵素 - 反轉錄酶

從我們的 RT 酵素系列中選擇適合您 RNA 複雜度的酵素。我們的產品包括標準的禽骨髓母細胞病病毒 (AMV) 和 Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV) 反轉錄酶，以及具有更高靈敏度的增強型反轉錄酶。

Cat. No.	產品名稱	特點
A4464	增強型禽用逆轉錄酶	對低豐度mRNA的靈敏度更高 最適合轉錄困難的次級結構的酵素
ERT-RO	Expand™ Reverse Transcriptase	轉錄 cDNA 片段高達 13.5 kb 可使用 cDNA 或單鏈 DNA
M1302	M-MLV 反轉錄酶	使用單鏈 RNA、DNA 或 RNA-DNA 混合物 產生第一鏈cDNA高達7 kb
10109118001	反轉錄酶AMV
11062603001	反向轉錄酶 M-MuLV
TRANSRTRO	Transcriptor逆轉錄酶	在兩步 RT-PCR 中實現高靈敏度。Transcriptor Reverse Transcriptase 可用於傳統熱循環儀和即時 PCR 儀器 (例如 LightCycler® 儀器)。 反轉錄困難的範本。該酶在升高的溫度下工作良好，從而克服了 RNA 的次級結構（例如富含 GC 的 RNA 模板），並有助於最佳反應條件。

在 RT-PCR / RT-qPCR 疑難排解頁面中探索更多關於 RT-qPCR 疑難排解的資訊。

qPCR試劑盒

這些ReadyMix^TM 產品包含qPCR所需的所有元件。

Probe based qPCR

Probe based qPCR 依靠序列特異性檢測所需的 PCR 產品。與檢測所有雙鏈 DNA 的 SYBR^® Green 型 qPCR 方法不同，探針型 qPCR 利用螢光標記的目標特異性探針來提高特異性和靈敏度。此外，還提供多種螢光染料，因此可使用多種引物同時擴增許多序列。

Cat. No.	產品名稱	特點
D6442	JumpStart™ Taq ReadyMix™ 用於高通量定量PCR	適用於使用螢光探針檢測的高通量定量 PCR 方法 JumpStart™(JumpStart™)Taq 可防止非特異性擴增，並增加目標產量
D7440	JumpStart™ Taq ReadyMix™ 用於定量PCR
L6669	LuminoCt® qPCR ReadyMix™	適用於快速探針式定量 PCR <
FSTMPMMRO	快速啟動 TaqMan Probe Master	使用於除 LightCycler® ；儀器 可從兩種配方中選擇 - 一種含有 ROX 參考染料，另一種不含 ROX 含有 dUTP，可防止攜帶污染
FSUPMMRO	快速啟動通用探針母體 (Rox)	在使用通用探針庫探針或任何其他水解探針的檢測中獲得靈敏、特異的結果 在使用通用探針庫探針或任何其他水解探針的檢測中獲得靈敏、特異的結果 可擴增 500 bp 長的片段，包括富含 GC 或 AT 的片段 含有 dUTP 以防止攜帶污染
PFUKB	KAPA PROBE FAST qPCR Master Mix, 通用型	相容於所有以螢光探針為基礎的技術，包括雜交探針 (如.g.,FRET）、水解探針（例如 TaqMan® 探針）和位移探針（例如分子信標）。

SYBR^® Green Based qPCR

SYBR^® Green-based qPCR

SYBR^® Green I 是一種常用的螢光 DNA 結合染料，可結合所有雙鏈 DNA。透過測量整個週期的螢光增加量來監控檢測。SYBR^® Green I 的激發和發射最大值分別為 494 nm 和 521 nm。加入熱啟動介導的 Taq 聚合酶，如 JumpStart™ Taq，可大大提高我們以 SYBR^® Green 為基礎的 qPCR 檢測的特異性。

Cat. No.	產品名稱	特點
KCQS02	KiCqStart® SYBR® Green qPCR	適用於Applied Biosystems® (ABI) 儀器<
KCQS01	KiCqStart® SYBR® Green qPCR ReadyMix™ Low ROX™	適用於Applied Biosystems® (ABI)及Stratagene® 儀器
KCQS00	KiCqStart® SYBR® Green qPCR ReadyMix™	適用於Bio-Rad®, Cepheid®, Eppendorf®, Illumina®、Corbett® 和 Roche® systems
KCQS03	KiCqStart® SYBR® GreenqPCR ReadyMix™ iQ™	含螢光素用於Bio-Rad®?
S4438	SYBR® Green JumpStart™ Taq ReadyMix™	對於定量PCR，MgCI2 在緩衝液中
S5193	SYBR® Green JumpStart™ Taq ；ReadyMix™	用於定量 PCR，不含 MgCl2 在緩衝液中 <
S9194	SYBR® Green JumpStart™ Taq ReadyMix™ 用於高通量 qPCR	SYBR 綠色qPCR試劑，內含被動參考染料
S1816	SYBR® Green JumpStart™ ；Taq ReadyMix™ 用於定量 PCR	毛細管配方 SYBR® ；綠色 qPCR 試劑，適用於 Roche LightCycler® 毛細管系統
SFUKB	KAPA SYBR® FAST qPCR Master Mix, Universal<	持續檢測低拷貝和困難的目標 僅需 40 分鐘即可完成即時 PCR 運行
FSUSGMMRO	快速啟動通用SYBR® 綠色母體 (Rox)	含有 dUTP 以防止攜帶污染
L6544	LuminoCt® SYBR® Green qPCR ReadyMix™	® Green定量PCR，可在短短25分鐘內得到檢測結果 含一小瓶獨立的ROX 可在短短25分鐘內得到檢測結果。 幾乎不需要優化檢測參數

這段短片將介紹更多有關 SYBR^® Green-based qPCR 的資訊。

以 microRNA 為基礎的 RT-qPCR

® 產品線尋找您所需的 microRNA 反轉錄產品。

MystiCq^® MicroRNA RT-qPCR SystemR

MystiCq® microRNA 試劑提供完整的 SYBR® Green RT-qPCR 工作流程，只需三個步驟即可量化表達：

1. 分離
2. cDNA合成
3. 擴增量化

在我們的 MystiCq^® 產品頁面中發現更多關於 MystiCq^®  工作流程的資訊。這些產品的特色：

• 超過 1,400 個預先設計並經過濕實驗室測試的引物對，只針對成熟的 microRNAs
• 轉換所有 microRNAs，可從單一樣本中獲得幾乎無限的讀數
• 選擇三種不同的產品來分離 microRNA

 

q用於 SARS-CoV-2 研究的 PCR 分析設計和試劑

我們致力於為研究人員提供可靠的資源和工具，以支援對抗 COVID-19 (SARS-CoV-2) 的工作。為了回應社會對 SARS-CoV-2 特異性試劑和方案的需求，我們的科學家評估了用於 SARS-CoV-2 目標檢測的基於 RNA 的一步式 RT-qPCR 試劑盒。

實驗設計和方法

本實驗旨在確定我們的 One-Step RT-qPCR 試劑盒能否檢測 SARS-CoV-2。檢測依據 CDC 的 SARS-CoV-2 檢測規範進行，以合成的 SARS-Cov-2 RNA 為模板，稀釋成 10⁵、10⁴、10³、10² 和 10 份。測試樣本包含模板、各試劑盒的試劑、N1 和 N2 (N, nucleocapsid gene) 的目標特異性 DNA 引物 /TaqMan^® 探針組。每次檢測也包括 NTC（無模板對照）樣本。

Primer Target	F Primer 5'-3'	R Primer, 5'-3'	探針	引物 大小
GACCCCAAAATCAGCGAAAT	TCTGGTTACTGCCAGTTGAATCTG<	5'-FAM-ACC CCG CAT TAC GTT TGG TGG ACC-BHQ1-3'	71 bp
N2	TTACAAACATTGGCCGCAAA<	GCGCGACATTCCGAAGAA	5'-FAM-ACA ATT TGC CCC CAG CGC TTC AG-BHQ1-3'	67 bp

表 2. 專為特異性檢測 SARS-CoV-2 而設計的引物和探針組 (N1 和 N2 檢測)。僅供研究使用。

檢測結果

A: N1 檢測

B：N2 分析

圖 2. 利用定量 RT-PCR ReadyMix™ (Cat. No. QR200) 進行引物目標 N1 (圖 A) 和 N2 (圖 B) 的 SARS-CoV-2 檢測。

圖2中的SARS-CoV-2檢測N1（圖A）和N2（圖B）是以合成的SARS-CoV-2 RNA為模板，使用Quantitative RT-PCR ReadyMix™ (Cat. No.  QR200)進行的。這兩種檢測方法都顯示其靈敏度可檢測到低至 10² copies 的模板。在 NTC 樣本中沒有觀察到擴增

A: N1 分析

。

B：N2 分析

圖 3. 使用 KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ (Cat. No. KCQS07) 進行引物目標 N1 (圖 A) 和 N2 (圖 B) 的 SARS-CoV-2 檢測分析。

圖3中的SARS-CoV-2檢測N1（圖A）和N2（圖B）是使用KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ (Cat. No. KCQS07進行的。No. KCQS07）進行，並以合成的 SARS-CoV-2 RNA 為模板。這兩種檢測方法都顯示其靈敏度可檢測到低至 10 個拷貝的模板。在 NTC 樣本中沒有觀察到擴增。

B：N2 分析

圖 4. 使用 KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix (2X) Universal Kit (Cat. No. KK4752) 對引物目標 N1 (圖 A) 和 N2 (圖 B) 進行 SARS-CoV-2 檢測。

圖4中的SARS-CoV-2檢測N1（圖A）和N2（圖B）是使用KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix (2X) Universal Kit (Cat. No.  KK4752) 進行的。KK4752）進行。這兩種檢測方法都顯示出靈敏度，可檢測到低至 10² 拷貝的模板。在 NTC 樣本中沒有觀察到擴增。

B：N2 分析

圖 5. 利用 ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit (Cat. No. RK20407) 進行引物目標 N1 (圖 A) 和 N2 (圖 B) 的 SARS-CoV-2 檢測。

圖 5中的 SARS-CoV-2 檢測 N1（圖 A）和 N2（圖 B）是使用 ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit (Cat. No.  RK20407) 進行的。RK20407）以合成的 SARS-CoV-2 RNA 為模板進行。這兩種檢測方法都顯示其靈敏度可檢測到低至 10 個拷貝的模板。

結論

上述結果顯示我們的一步式 RT-qPCR 試劑和試劑盒是 SARS-CoV-2 研究中檢測 SARS-CoV-2 目標的理想選擇。根據這些資料，使用 One-Step RT-qPCR 試劑的檢測可以檢測到低至 100 個拷貝的 RNA 模板，或在某些情況下，低至 10 個拷貝的 RNA 模板。

僅供研究使用。

本技術文章中提供的未公開數據來自內部研究。

如需更多有關 SARS-CoV-2 檢測的 RT-qPCR 產品資訊，請造訪 Sigma-Aldrich.com/covid19

TRI Reagent^® for Total RNA Isolation

TRI Reagent^® ；是從人類、動物、植物、酵母、細菌和病毒來源的樣本中快速、經濟、有效地分離總 RNA 或同時分離 RNA、DNA 和蛋白質的理想選擇。

本產品是硫氰酸胍和苯酚在單相溶液中的混合物，可在均質化或裂解組織樣本時有效溶解 DNA、RNA 和蛋白質。加入氯仿或 1-bromo-3-chloropropane 離心後，混合物會分離成三相：含 RNA 的水相、含 DNA 的間相以及含蛋白質的有機相。分離三相後，即可分離各成分。一毫升的 TRI Reagent^® 足以從 50-100 毫克的組織、5-10 ´ 106 個細胞或 10 cm² 單層生長細胞的培養皿表面分離 RNA、DNA 和蛋白質。

這是分離總 RNA 最有效的方法之一，從新鮮組織或細胞開始，只需 1 小時即可完成。此程序對於分離長度為 0.1-15 kb 的各類 RNA 分子非常有效。所得到的 RNA 是完整的，幾乎沒有污染 DNA 和蛋白質。它可用於 Northern 印圖、mRNA 分離、 體外 轉譯、RNase 保護試驗、克隆和 PCR。

TRI Reagent^® has been widely used in the inactivation of viruses and extraction of viral RNA for detection of SARS-CoV-2 by RT-qPCR assays in several research studies.^1,2,3 它已被證明是在-80⁰C下長時間分離和儲存mi-RNA的理想選擇。⁴ 它已被用於提取貓和犬冠狀病毒的RNA，並進一步用於RT-PCR檢測。^5,6 它也被用來從感染 SARS-CoV 的 Vero 細胞中分離出細胞質 RNA。

Cat. No.	產品名稱	特點
T9424<	TRI試劑®	用於處理組織、單層培養的細胞或細胞團

僅供研究使用。不適用於診斷程序。

參考資料

1. Dimke H, Larsen SL, Skov MN, Larsen H, Hartmeyer GN, Moeller JB. Phenol-chloroform-based RNA purification for detection of SARS-CoV-2 by RT-qPCR: comparison with automated systems. https://doi.org/10.1101/2020.05.26.20099440

2. Alhamlan F, Alqahtani A, Bakheet D, Bohol M, Althawadi S, Mutabagani M, Almaghrabi R, Obeid D. Development and Validation of Two In-house, Low-Cost SARS-CoV-2 Detection Assays. https://doi.org/10.1101/2020.05.18.20105510

3. Toptan T, Hoehl S, Westhaus S, Bojkova D, Berger A, Rotter B, Hoffmeier K, Cinatl J, Ciesek S, Widera M. Optimized qRT-PCR Approach for the Detection of Intra- and Extra-Cellular SARS-CoV-2 RNAs. IJMS. 21(12):4396. https://doi.org/10.3390/ijms21124396

4. Mraz M, Malinova K, Mayer J, Pospisilova S. 2009. MicroRNA isolation and stability in stored RNA samples. Biochemical and Biophysical Research Communications. 390(1):1-4. https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2009.09.061

5. Gunn-Moore DA, Gruffydd-Jones TJ, Harbour DA. 1998. Detection of feline coronaviruses by culture and reverse transcriptase-polymerase chain reaction of blood samples from healthy cats and cats with clinical feline infectious peritonitis. Veterinary Microbiology. 62(3):193-205. https://doi.org/10.1016/s0378-1135(98)00210-7

6. Erles K, Toomey C, Brooks HW, Brownlie J. 2003. Detection of a group 2 coronavirus in dogs with canine infectious respiratory disease. Virology. 310(2):216-223. https://doi.org/10.1016/s0042-6822(03)00160-0

7. Darnell ME, Subbarao K, Feinstone SM, Taylor DR. 2004. Inactivation of the coronavirus that induces severe acute respiratory syndrome, SARS-CoV. Journal of Virological Methods. 121(1):85-91. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2004.06.006

* 本文為預印本，尚未經過同儕評審。它報告的是尚未評估的新醫學研究，因此不應該用來指導臨床實踐。