qPCR 如何運作

即時 PCR 也稱為定量或 qPCR，可確定特定週期內 PCR 產物的實際存在量。通過在 PCR 反應中使用螢光報告，此過程能夠測量 qPCR 分析中 DNA 的生成。qPCR 有兩種方法： SYBR Green and probe-based。

SYBR Green-based qPCR

SYBR Green qPCR 可監測任何雙鏈 DNA 序列的擴增。它不需要探針，因此降低了檢測設置和運行成本。

SYBR Green qPCR 視頻轉錄

即時 PCR 也稱為定量或 qPCR, 確定特定週期內 PCR 產品的實際數量。透過在 PCR 反應中使用螢光 報告，這個過程允許您在 qPCR 檢測中測量 DNA 的產生。 

在 SYBR Green qPCR 反應中，您有模板，其中包含您感興趣的目標序列。您還需要引物、dNTPs 和 DNA 聚合酶。SYBR Green I 染料通常包含在含有 DNA 聚合酶的反应混合物中。

变性 是 PCR 反应的第一步。熱循環器加熱到大約 95 degrees Celsius 的溫度，使雙鏈 DNA 螺旋熔解開來，變成兩個單鏈 DNA 範本。

在退火 步驟中，溫度會降到攝氏 45-65 degrees Celsius 之間，單股引物會附著到目標序列的適當末端。

最後，在延伸步驟中，溫度會稍微上升到攝氏65-75 度。

SYBR Green I binds all newly synthesized double-stranded DNA complexes and fluorescence.隨著 PCR 循環的繼續，螢光會累積，並在每個 PCR 循環結束時測量。測量 SYBR Green I 產生的高於背景水平的螢光強度（ Cq 值），用於量化新產生的雙鏈 DNA 的數量。

重複變性、退火和延伸循環約 35-40 次後，您就可以開始分析了。Cq值可用於量化DNA的起始量、建立基因表達研究的標準曲線或其他分析。

SYBR Green qPCR 是監控任何雙鏈DNA序列擴增的絕佳選擇。它不需要探針，因此降低了檢測設置和運行成本。此外，多種染料可與單一擴增分子結合，從而提高檢測擴增产物的靈敏度。

儀器相容性對於 qPCR來說至關重要。請務必為您的儀器選擇合適的產品。此外， qPCR 方法的保真度、速度和方便程度各不相同。我們建議您使用 PCR 選擇指南和我們的技術支援團隊來選擇適合您的產品。

qPCR

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基於探針的 qPCR 允許特異性雜交。探針式 qPCR 的目標性質可降低背景，並消除假陽性的存在。您也可以用不同的、可區分的報告染料標記探針，以便在一個反應管中擴增兩個不同的序列。

基於探針的 qPCR 視頻轉錄

即時 PCR 也稱為定量或 qPCR， 確定在一個給定週期存在的 PCR 產品的實際數量。透過在 PCR 反應中使用螢光 報告，此流程可讓您測量 qPCR 分析中的 DNA 產生量。 

在探針型 qPCR 反應中，您有自己的模板，其中包含您感興趣的目標序列。您還需要引物、dNTPs 和您選擇的 DNA 聚合酶。此外，您還需要一個 探針 標有報告分子和淬滅分子。通常探針是作為獨立的客製化產品出售的，因為它們對目標序列具有特異性。

變性 是 PCR 反應的第一步。熱循環器加熱到大約 95 degrees Celsius 的溫度，使雙鏈 DNA 螺旋熔解開來，變成兩個單鏈 DNA 範本。

在退堿步驟中，溫度降到 45-65 degrees Celsius 之間，單鏈引物附著到目標序列的適當末端。

最後，在 延伸期間，溫度會稍微上升到攝氏65-75 度 。 在此階段， DNA 聚合酶會延伸序列特異性引物，並加入與 DNA 模板互補的核苷酸。

隨著 PCR 循環的繼續， 螢光 不斷累積，並在每個 PCR 循環結束時進行測量。測量報告分子產生的高於背景水平的螢光強度（Cq 值），並用於量化新產生的雙鏈 DNA 鏈的數量。

在變性、退火和延伸循環約 35-40 次之後，您就可以開始分析了。Cq 值可用於定量 DNA 的起始量、建立基因表達研究的標準曲線或其他分析。

基於探針的 qPCR 是特異性雜交、無假陽性以及在一個反應管中擴增兩個不同序列的絕佳選擇。

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