蛋白質下拉技術

下拉試驗是為了確定兩個或兩個以上蛋白質的相互作用而設計的。使用親和下拉試驗時，″誘餌″蛋白會被標記，並透過共價附著或固定金屬親和層析（IMAC）等親和標記被捕捉到固定化配體（支持珠）上。常見的誘餌蛋白融合標籤包括谷胱甘肽 S-轉移酶（GST）和組氨酸標記蛋白。誘捕蛋白形成複合物，然後與蛋白源（如細胞或組織裂解液）培養。經由一系列的洗滌，所感興趣的蛋白質會從珠狀支架上洗出，並經由離心收集。親和下拉的純化和檢測方法與免疫共沉澱 (IP) 和 Co-IP 分析不同，它不是抗體與抗原的互作。在所有的 pull-down 方法中，純化的樣品通常會經由 SDS-PAGE、質譜分析及 western blot 檢測來做進一步的下游分析。

• 親和 GST 拉取應用<
• 共免疫沉淀

Affinity GST Pull-Down Applications

谷胱甘肽 S-轉移酶（GST）是一種 211 個氨基酸的蛋白質，存在於大多數生物中。在大腸桿菌蛋白質表達系統中，GST 常被整合到表達載體中，以產生融合標籤。GST-tag 是一種大型蛋白質標籤，約 26 kDa，可在細菌、酵母、哺乳類動物和昆蟲細胞中表達。當需要保護重組蛋白免受細胞內蛋白酶的裂解，以及需要增強被標記蛋白的溶解度時，GST-標記是非常有利的。此外，GST 蛋白提供了一個高親和性的標籤，讓您可以利用便宜的親和性樹脂，在溫和的洗脫條件下，輕鬆地進行純化和拉取實驗。

共免疫沉淀

下拉实验是验证共免疫沉淀结果的理想方法，也是鉴定未知蛋白质-蛋白质相互作用以及特定蛋白质活化状态的绝佳方法。與親和性下拉方法不同，IP 使用抗體與複雜生物樣本中的抗原結合並分離出抗原。

共免疫沉澱是指使用抗體與多蛋白複合物中的抗原結合。然後加入蛋白 A 或蛋白 G 媒介擷取複合物。蛋白 A/G 對於多株克隆和單株 IgG 型抗體的 Fc 區域有很高的親和力，使其成為純化蛋白質或相關蛋白複合物的關鍵成分。使用蛋白拉取方法是研究蛋白-蛋白互作網絡的重要工具；然而，具體方法的選擇將取決於研究人員的具體應用需求。