Preparo de meios

Preparo de meios

Meios de cultura comerciais são fornecidos na forma desidratada ou em pó, em concentrado líquido ou como soluções de trabalho. Meios desidratados para culturas em caldo precisam ser preparados dissolvendo-os em água destilada e ajustando o pH final antes da esterilização. Meios em pó para culturas em ágar devem ser dissolvidos em água destilada, agitados, em seguida fervidos ou autoclavados, antes de serem despejados em placas de Petri estéreis usando técnicas assépticas. Meios de cultura fornecidos como concentrados líquidos devem ser diluídos de modo asséptico em água destilada, seu pH deve ser ajustado e devem ser dispensados em recipientes estéreis para armazenamento. Meios de cultura fornecidos como soluções de trabalho são prontos para uso após a adição de qualquer soro ou outros suplementos necessários, por filtração estéril e/ou em condições assépticas, e o aquecimento à temperatura apropriada para o crescimento celular.

Esterilização de meios de cultura

Meios de cultura preparados a partir de pós devem ser esterilizados por filtração, aquecimento ou autoclavagem antes do uso. Embora os meios líquidos sejam muitas vezes fornecidos estéreis e em concentração pronta para uso, recomenda-se filtração estéril, principalmente se soros ou outros suplementos tiverem que ser adicionados antes do uso. Após a esterilização, devem ser usadas técnicas assépticas ao manusear meios de cultura para evitar a contaminação cruzada ou o crescimento de microrganismos indesejados.

Suplementos para meios de cultura

Determinados suplementos necessários para o cultivo ou regulação celular são instáveis ou termolábeis, portanto devem ser adicionados pelo usuário ao meio de cultura basal termoesterilizado antes do uso. O soro, geralmente proveniente de fontes bovinas (FBS), é um suplemento comum usado em meios de cultura celular de animais. Hormônios, fatores de crescimento e moléculas de sinalização específicas podem ser necessários para o crescimento de determinados tipos celulares. Aditivos, como IPTG, são usados para induzir a expressão proteica. Antibióticos também podem ser adicionados aos meios de cultura para controlar o crescimento de contaminantes bacterianos e fúngicos, embora a contaminação possa ser bem controlada com o manuseio e armazenamento adequados dos meios.

Armazenamento e uso de meios de cultura

Meios de cultura comerciais e preparados na forma líquida, na forma de ágar despejado ou em soluções de trabalho são, em geral, armazenados a 4 °C no escuro para suprimir o crescimento de microrganismos oportunistas e para evitar a fotodegradação dos componentes dos meios de cultura. Antes da inoculação com culturas, os meios devem ser aquecidos à temperatura apropriada para o crescimento celular.