CLL1149

Komórki A549 GFP-CTNNB1 RFP-LMNB1

human male lung (Source Disease: Lung carcinoma)

• Kod UNSPSC: 41106514
• NACRES: NA.81

Właściwości

• Nazwa produktu: Komórki A549 GFP-CTNNB1 RFP-LMNB1,
• pochodzenie biologiczne: human male lung (Source Disease: Lung carcinoma)
• numer dostępu OMIM: 116806; 150340
• temp. przechowywania: −196°C
• informacje o genach: human ... CTNNB1(1499) , LMNB1(4001)

Opis

Opis ogólny

A549 GFP-CTNNB1 RFP-LMNB1 to komórki raka płuc pochodzące od 58-letniego mężczyzny rasy kaukaskiej, posiadające dwie różne modyfikacje ZFN tworzące dwa transgeny fluorescencyjne, z których każdy ulega ekspresji z ich endogennego locus genowego.

Ta linia komórkowa pochodzi z katalogu ATCC nr CCL-185.

Zastosowanie

Aby dowiedzieć się więcej, odwiedź stronę internetową Cellular Reporter Cell Line.

Produkt ten jest ludzką linią komórkową A549, w której genomowy gen CTNNB1 został endogennie wyznakowany epitopem 3XFLAG^™ połączonym z genem zielonego białka fluorescencyjnego (GFP), a gen LMNB1 został endogennie wyznakowany genem czerwonego białka fluorescencyjnego (RFP) przy użyciu technologii nukleazy palca cynkowego (ZFN) 4785. Integracja spowodowała endogenną ekspresję białek fuzyjnych, w których 3XFLAG-GFP jest przyłączony do N-końca CTNNB1, a RFP jest przyłączony do N-końca LMNB1. Obrazowanie fluorescencyjne pokazuje ekspresję CTNNB1 w całej komórce i ekspresję LMNB1 zlokalizowaną w jądrze. Po aktywacji LiCl/leptomycyną B lub ligandem Wnt3a proteoliza CTNNB1 jest zmniejszona, dzięki czemu można zaobserwować translokację do jądra, dzięki czemu linia komórkowa jest przydatna do badań przesiewowych o wysokiej zawartości w celu identyfikacji związków modulujących tę redystrybucję. Stabilna linia komórkowa została wyhodowana z pojedynczego klonu komórkowego. Regulacja genów CTNNB1 i LMNB1 oraz odpowiadająca im funkcja białka są zachowane w przeciwieństwie do linii komórkowych wykazujących nadekspresję z egzogennego promotora.

Działania biochem./fizjol.

β-katenina kodowana przez gen CTNNB1 jest wielofunkcyjnym białkiem. Ułatwia różnicowanie adhezji komórka-komórka i transformację błony nabłonkowej (EMT). Ponadto odgrywa istotną rolę w szlaku sygnałowym WNT. Mutacja w tym genie prowadzi do raka jelita grubego.[1] Jądrowy lamin B1 kodowany przez gen LMNB1 jest białkiem filamentu pośredniego otoczki jądrowej.[2] Białko wykazuje transkrypcyjną aktywność koregulacyjną i odgrywa kluczową rolę w replikacji DNA, starzeniu komórkowym i odpowiedzi na stres.[3] Nadekspresję genu zaobserwowano u pacjentów z rakiem wątrobowokomórkowym (HCC). W związku z tym LMNB1 może być wykorzystywany jako potencjalny biomarker dla HCC.[3]

Cechy i korzyści

Ukierunkowana integracja fluorescencyjnego znacznika 3XFLAG-GFP tuż za kodonem startowym ATG genu CTNNB1 na chromosomie 3p22.1 i fluorescencyjnego znacznika RFP tuż za kodonem startowym ATG genu LMNNB1 na chromosomie 5q23.2 w celu stworzenia linii komórkowej wykazującej stabilną ekspresję dwóch transgenów.

Komórki A549 są przylegające, a czas podwojenia wynosi około 22 godzin.

Jakość

Tested for Mycoplasma, sterility, post-freeze viability, short terminal repeat (STR) analysis for cell line identification, cytochrome oxidase I (COI) analysis for cell line species confirmation.

Uwaga dotycząca przygotowania

Podłoże należy wymieniać dwa do trzech razy w tygodniu.

Szybko rozmrozić fiolkę poprzez delikatne mieszanie w łaźni wodnej o temperaturze 37°C (~2 minuty), trzymając korek fiolki z dala od wody. Odkazić 70% etanolem, dodać 9 ml podłoża hodowlanego i odwirować 125 x g (5-7 minut). Ponownie zawiesić w kompletnym podłożu hodowlanym i inkubować w temperaturze 37°C w atmosferze 5% CO2.

Współczynnik podhodowli: ok. 1:3-1:8

Podstawowym podłożem dla tej linii komórek jest F12 Ham Medium, nr kat. Nr kat. N4888. Aby uzyskać kompletną pożywkę wzrostową, należy dodać następujące składniki do pożywki podstawowej: płodową surowicę bydlęcą, nr kat. Nr kat. F4135, do końcowego stężenia (v/v) 10% i L-glutaminę, Nr kat. Nr kat. G7513, w końcowym stężeniu 2 mM.

Pożywka do zamrażania komórek - DMSO 1X, Nr kat. Nr kat. C6164.

Informacje prawne

3xFLAG is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

CompoZr is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Oświadczenie o zrzeczeniu się odpowiedzialności

RESEARCH USE ONLY. This product is regulated in France when intended to be used for scientific purposes, including for import and export activities (Article L 1211-1 paragraph 2 of the Public Health Code). The purchaser (i.e. enduser) is required to obtain an import authorization from the France Ministry of Research referred in the Article L1245-5-1 II. of Public Health Code. By ordering this product, you are confirming that you have obtained the proper import authorization.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 10 - Combustible liquids
• Klasa zagrożenia wodnego (WGK): WGK 3
• Temperatura zapłonu (°F): 188.6 °F - closed cup
• Temperatura zapłonu (°C): 87 °C - closed cup