TRANSRTRO

トランスクリプターリバーストランスクリプターゼ

• UNSPSCコード: 41106313
• NACRES: NA.21

特性

• リコンビナント: expressed in E. coli
• 品質水準: 100
• アッセイ: ≥90% (SDS-PAGE)
• 形状: liquid
• 使用法: sufficient for 25 reactions; sufficient for 50 reactions; sufficient for 500 reactions
• 比活性: 0.05 U/mg
• 特徴: dNTPs included: no; hotstart: no
• メーカー／製品名: Roche
• 包装: pkg of 200 reactions (03531287001); pkg of 25 reactions (03531317001); pkg of 50 reactions (03531295001)
• テクニック: RT-PCR: suitable; RT-qPCR: suitable
• 色: colorless
• pH: 7.2
• 溶解性: water: miscible
• 適合性: suitable for molecular biology
• UniProtアクセッション番号: Q9JG39
• アプリケーション: genomic analysis; life science and biopharma
• 検出方法: probe-based
• その他の活性: DNase activity, none detected; Nicking activity, none detected; RNase activity, none detected
• 保管温度: −20°C (−15°C to −25°C)

詳細

詳細

ヒト免疫不全ウィルスタイプ1のようなレトロウィルス（HIV-1）では、リバーストランスクリプターゼ（RT）はコア酵素です。HIV-1 RT は66 kDaおよび51 kDa（p66およびp51）の2つのサブユニットから作られています。HERV-Kファミリーのヒト内生レトロウィルスはリバーストランスクリプターゼ（RT）酵素をコードします。

最大14kbのRNAフラグメントの強力な転写のための組換えリバーストランスクリプターゼが、サーマルサイクラーおよびリアルタイムPCR装置での二段階RT-PCRで使用されます。

アプリケーション

トランスクリプターリバーストランスクリプターゼは、次の用途のために、従来のサーマルサイクルおよびリアルタイムPCR装置を使用して（LightCycler^®装置など）さまざまな供給源からRNA（mRNA、全RNA、ウイルスRNAおよびin vitro転写RNA）を転写するように設計されています。

• 増幅反応に使用するために第一鎖cDNAを合成
• GC-リッチRNAテンプレートのRT-PCR
• cDNA合成中のCy3、Cy5、DIGビオチンおよびアミノアリルによる標識
• mRNAの5′および3′末端のRACEによる回収およびクローニング
• 大きいインサートによるcDNAライブラリの生成
• ジデオキシDNAシーケンシング
• RNAシーケンシング
• DNAフラグメントの3′末端標識
• ゲノムフットプリント法に用いる一本鎖プローブの生成
• ヒトパピローマウイルスE6、皮質組織、線条体組織、ベッカー型筋ジストロフィー患者から得た筋生検組織、卵母細胞から得たmiRNAステムループ、ヒト大脳微小血管内皮細胞（hCMVEC）からのRNAの逆転写

生物化学的／生理学的作用

ヒト免疫不全ウィルスタイプ1のリバーストランスクリプターゼ（HIV-1 RT）は、宿主細胞染色体に組み込まれた二本鎖の直鎖状DNA中への単鎖ウィルスRNAの触媒的転換に不可欠です。

特徴および利点

• 二段階RT-PCRで高い感度が達成できます。

トランスクリプターリバーストランスクリプターゼは、従来のサーマルサイクラーおよびリアルタイムPCR装置（例えば、ライトサイクラー^®インストルメント）で使用されています。

• 最大14kbの完全長転写物がより多く得られます。

大きいインサートを有するcDNAライブラリを作製することができます。

• 難しいテンプレートを逆転写します。

この酵素は高い温度でよく機能し、それによってRNAの二次構造（例えば、GC-リッチなRNAテンプレート）に打ち勝ち、最適反応条件を促進します。

• 効率的にcDNAを標識化します。

Cy3-、Cy5-、DIG-、ビオチン-、またはアミノアリル-標識ヌクレオチドがcDNA合成時に組み込まれます。

構成

• トランスクリプターリバーストランスクリプターゼ、保存緩衝液中
• トランスクリプターRT緩衝液、5倍濃縮

品質

トランスクリプターリバーストランスクリプターゼの各ロットは規定を設けてRT-PCRで機能テストされています：

• ヒト骨格筋の全RNAからスタートし、従来のサーマルサイクラーを用いてヒトジストロフィン遺伝子由来の10 kbのフラグメントを検出します。
• ライトサイクラー^®インストルメントを用い、in vitro転写ヒトPBGD RNAの5 x 10²～5 x 10⁶個のコピーを検出します。結果は固定の交差ポイントおよび固定の蛍光強度で定義されます。

調製ノート

容積活性：20 U/µL。
長い、希少な、あるいは困難なRNAターゲットの転写
トランスクリプターリバーストランスクリプターゼ は、以下のRT - PCRに推奨されます：

• 長いターゲット（最大14 kbのRNAテンプレートの希少なターゲットを転写することができるため）
• 希少なターゲット（感度が高いため）
• GCリッチのターゲット（最高+65^oCの高温で操作することができ広範囲な二次構造と関連する問題を排除できるため）

多くの応用のための標識化
トランスクリプターリバーストランスクリプターゼはさらに、 多様な修飾ヌクレオチド（Cy3-、Cy5-、DIG-、ビオチン-、あるいはアミノアリル-標識dNTPなど）を受容するため、標識cDNAの調製にも推奨されます。
反応の要件
トランスクリプターはssRNAおよびssDNAテンプレートを受容し、転写のためのプライマーを必要とします。

保管および安定性

凍結と融解の繰り返しは避けてください。

その他情報

生命科学研究専用です。診断手順には使用しません。

法的情報

LightCycler is a registered trademark of Roche

安全性情報

• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): does not flash
• 引火点(℃): does not flash