R6513
Ribonucleasi A
for molecular biology, ≥70 Kunitz units/mg protein, lyophilized
Sinonimo/i:
RNasi A, RNasi a, Ribonucleasi pancreatica, Ribonucleato 3′-pirimidinooligonucleotidoidrolasi
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About This Item
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Grado
for molecular biology
Livello qualitativo
Forma fisica
lyophilized
Attività specifica
≥70 Kunitz units/mg protein
PM
13.7 kDa
~13,700
Attività estranea
Exonuclease and endonuclease, none detected
NICKase and DNase, none detected
Temperatura di conservazione
−20°C
InChI
1S/C9H14N4O3/c10-2-1-8(14)13-7(9(15)16)3-6-4-11-5-12-6/h4-5,7H,1-3,10H2,(H,11,12)(H,13,14)(H,15,16)
CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N
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Descrizione generale
La RNasi A è un polipeptide a catena singola contenente 124 amminoacidi legati da quattro ponti disolfuro. Contrariamente alla RNasi B, la RNasi A non è una glicoproteina. Può essere inibita dall′alchilazione della His12 e della His119 che si trovano nel sito attivo dell′enzima. I sali di potassio e di sodio sono attivatori della RNasi A.
La RNasi A è una endoribonucleasi che attacca il 3′OHfosfato di un nucleotide pirimidinico. La sequenza pG-pG-pC-pA-pG verrà scissa per ottenere pG-pG-pCp e A-pG. L′attività massima si osserva con l′RNA a singolo filamento.
La ribonucleasi A (RNasi A) è una endoribonucleasi che scinde i legami fosfodiesterici dell′RNA a singolo filamento dopo i nucleotidi pirimidinici. Attacca l′estremità 3′ fosfato (per esempio pG-pG-pC-pA-pG verrà scissa per ottenere pG-pG-pCp e A-pG). L′attività massima si osserva con l′RNA a singolo filamento. La RNasi A è un polipeptide a singola catena che contiene 4 ponti disolfuro. A differenza della RNasi B, non è una glicoproteina. Le ribonucleasi non idrolizzano il DNA, dal momento che quest′ultimo non possiede i gruppi 2′-OH essenziali per la formazione degli intermedi ciclici. La RNasi A può anche idrolizzare l′RNA da campioni proteici. La RNasi A può essere inibita dall′alchilazione di His12 e His119 e attivata da sali di potassio e di sodio. La RNasi è inibita alla presenza di ioni di metalli pesanti. La RNasi è anche inibita in modo competitivo dal DNA.
Applicazioni
- La RNasi A è usata per rimuovere l′RNA dalle preparazioni di DNA plasmidico e genomico e dai campioni proteici.
- La RNasi A è usata anche nell′analisi delle sequenze di RNA e nei saggi di protezione.
- La RNasi A è stata usata come strumento per la progettazione computerizzata di farmaci.
- La RNasi A supporta l′analisi delle sequenze di RNA.
- La RNasi A idrolizza l′RNA contenuto nei campioni proteici.
- La purificazione del DNA è supportata dalla RNasi A.
La ribonucleasi A da pancreas bovino è stata usata:
- per la purificazione di DNA plasmidico
- per digerire l′RNA a doppio filamento, evitandone la colorazione, durante la colorazione del nucleo
- in tecniche di immunoperossidasi e immunofluorescenza
- per trattare le cellule prima della citometria a flusso
- come componente del tampone di lavaggio di sezioni di tessuto FFPE post-ibridazione in situ
- per trattare le cellule durante la preparazione di estratti di proteine periferiche di membrana
- saggi di protezione da RNasi
- rimozione di RNA legato in modo non specifico
- analisi di sequenze di RNA
- idrolisi dell′RNA contenuto in campioni proteici
Caratteristiche e vantaggi
La nostra ribonucleasi A, RNasi A, a elevata stabilità, è adatta per la rimozione dell′RNA, il sequenziamento dell′RNA e la purificazione del DNA.
Risultati analitici
Proteina determinata da E.
Altre note
Gli attivatori della RNasi A includono i sali di potassio e di sodio. La RNasi A può essere inibita dall′alchilazione di His12 o His119.
Un′applicazione importante della RNasi A è la rimozione dell′RNA dalle preparazioni di DNA plasmidico. Per questa applicazione si usa una RNasi A priva di DNasi con una concentrazione finale di 10 μg/mL.
La bollitura delle soluzioni madre di questa RNasi A per inattivare la DNasi residua non è necessaria e può causare la precipitazione dell′RNasi e la possibile perdita dell′attività enzimatica. Se una soluzione di RNasi A viene riscaldata a pH neutro, se ne provoca la precipitazione. Se riscaldata a un pH inferiore, può verificarsi una precipitazione parziale a causa di impurezze proteiche presenti.
La bollitura delle soluzioni madre di questa RNasi A per inattivare la DNasi residua non è necessaria e può causare la precipitazione dell′RNasi e la possibile perdita dell′attività enzimatica. Se una soluzione di RNasi A viene riscaldata a pH neutro, se ne provoca la precipitazione. Se riscaldata a un pH inferiore, può verificarsi una precipitazione parziale a causa di impurezze proteiche presenti.
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Inibitore
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Avvertenze
Danger
Indicazioni di pericolo
Consigli di prudenza
Classi di pericolo
Resp. Sens. 1
Codice della classe di stoccaggio
11 - Combustible Solids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 3
Punto d’infiammabilità (°F)
Not applicable
Punto d’infiammabilità (°C)
Not applicable
Dispositivi di protezione individuale
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
Certificati d'analisi (COA)
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Protocolli
This procedure may be used for determination of Ribonuclease A (RNase A) activity.
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