Explantumok sterilizálása - Növényi szövettenyésztési protokoll

A növényi anyag felületi sterilizálása fontos lépés a növényi szövettenyésztési protokoll kialakításakor. A növényi szövettenyészetben általánosan használt fertőtlenítőszereket és a zöld kapszulák, a száraz magvak és az orchidea magvak fertőtlenítésének fertőtlenítési módszereit az alábbiakban részletezzük.

Növényi szövettenyészetben általánosan használt fertőtlenítőszerek

Determinálószer	Termékszám.	Koncentráció (%)	Expozíció (perc)
Kalcium-hipoklorit	211389	9-10	5-30
Nátrium-hipoklorit*	5-30
Nátrium-hipoklorit*	425044		0.5-5	5-30
Hidrogén-peroxid	H1009	3-12	5-15
Etilalkohol	E7148	70-95	0.1-5.0
ezüst-nitrát	S7276	1		5-30
Mercuriklorid	M1136	0.1-1,0	2-10
Benzalkónium-klorid	B1383	0.01-0,1	5-20

*A kereskedelmi forgalomban kapható fehérítő körülbelül 5% nátrium-hipokloritot tartalmaz, ezért 10-20%-os koncentrációban használható, ami 0,5-1,0% nátrium-hipokloritnak felel meg.

A fertőtlenítési eljárások a következő műveletekkel javíthatók:

• Az anyag 70%-os etil-alkoholos oldatba helyezése egy másik fertőtlenítő oldattal történő kezelés előtt. A kétlépcsős (két forrásból történő) sterilizálási eljárás alkalmazása bizonyos fajok esetében előnyösnek bizonyult.
• Nedvesítőszer, például TWEEN^® 20 vagy 80 (termékszámok. P1379 vagy P1754, illetve), adható a fertőtlenítőszerekhez a felületi feszültség csökkentése és a jobb felületi érintkezés lehetővé tétele érdekében.
• A sterilizálási eljárás vákuumban történő elvégzése. Ez a légbuborékok eltávolítását eredményezi, és hatékonyabb sterilizálási folyamatot biztosít.

Orchideamagok sterilizálása

Az orchideamagok nagyon kicsik, és alig tartalmaznak tápláléktartalékot. Egyetlen magkapszula 1 500-3 000 000 magot tartalmazhat. A mag in vitro vetése lehetővé teszi az éretlen magok (zöld hüvelyek) csíráztatását. A zöld kapszulákat sokkal könnyebb sterilizálni, mint az egyes magokat a kapszula felnyílása után. Lucke (1971) jelezte, hogy az orchideamag sterilizálható, amikor a kapszula körülbelül kétharmad részben érett. Az alábbiakban a különböző orchideafajok kapszuláinak becsült normál érési ideje szerepel.

Orchidea nemzetségek	Az érés ideje (hónapokban)
Bulbophyllum/i>	3
Calanthe	4
Cattleya	11
Coelogyne	13
	Cymbidium	10
Cypripedum	3.5
Dendrobium	12
Epidendrum	3.5
Laelia	9
Masdevallia	3.5
Miltonia	9
Odontoglossum	7
Paphiopedilum	10
Phalaenopsis	6
Stanhopea	7
Vanda	20

Zöld kapszula sterilizálása

1. 30 percig áztassa a kapszulát 100%-os fehérítőoldatban.
2. Mártja a kapszulát 95%-os alkoholba, és lángolja.
3. Aszeptikus körülmények között nyissa ki a kapszulát, és kaparja ki a magot.
4. Óvatosan rétegezze a magot a táptalaj felületére.

Száraz magvak sterilizálása

1. Vegye ki a magot, és helyezze egy kis lombikba vagy üvegbe, vagy tegye egy rövidített pipettába, amelynek egyik végét pamuttal lezárták. Zárja le a pipetta másik végét is vattával, miután a magot a pipettába helyezte.
2. Készítsen 5-10%-os kereskedelmi fehérítőt tartalmazó oldatot, amely néhány csepp TWEEN^® 20-t tartalmaz.
3. Adja a fehérítőoldatot a lombikba, vagy húzza fel az oldatot a pipettába. Forgassa meg a magot és a fehérítőt tartalmazó lombikot, vagy többször húzza be és szívja ki a pipettából a fehérítőoldatot.
4. Szterilizálja a magot 5-10 percig.
5. Vegye ki a fehérítőoldatot, és öblítse le a magot steril szövettenyésztésre alkalmas vízzel.
6. Tegye át a magot steril táptalajba.

.