Buněčné linie pro expresi rekombinantních proteinů

Tvorba rekombinantních proteinů v savčích a hmyzích buněčných liniích

Díky svým schopnostem syntézy proteinů se eukaryotické buněčné linie staly nezbytnými pro proces výroby rekombinantních proteinů. Jejich schopnost napomáhat komplexním posttranslačním modifikacím (glykosylace, fosforylace), skládání proteinů a sestavování molekul předčí jiné systémy.  Výroba rekombinantních proteinů začíná konstrukcí expresního vektoru a transfekcí do hostitelského systému, po níž následuje výběr buněk, klonování, screening a hodnocení. Aby výzkumní pracovníci vyrábějící rekombinantní proteiny splnili požadavky na kvalitu a škálovatelnost, potřebují nákladově efektivní a účinné expresní hostitele

Samčí buňky

Pro získání rekombinantních proteinů se správnými posttranslačními modifikacemi je často nutné použít samčí buňky. Rekombinantní proteiny ze savčích buněk našly uplatnění v terapii nemocí od cukrovky po rakovinu, čímž se změnilo prostředí zdravotní péče. Tento obrovský potenciál vedl ke zkoumání různých savčích systémů, které hostí a vylučují rekombinantní proteiny. V současné době se přednostně používají buňky vaječníků čínského křečka (CHO) a lidské embryonální ledviny (HEK 293), a to z důvodu:

• Vysoká hustota buněk v suspenzní kultuře a produkce vysokého výtěžku bílkovin
• Úspěšnější transfekce
• Přežívání v bezsérových médiích
• Různé kmeny dostupné pro cílenou integraci transgenů
• Využívají se pro transfekci v bezsérových médiích./li>
• Snížené riziko virové infekce

Optimální savčí buněčné linie se vybírají s ohledem na produktivitu, bioaktivitu, účel a fyzikálně-chemické vlastnosti proteinu, který je předmětem zájmu. Naše savčí buněčné linie podporují screening konstruktů v malém měřítku i rychlou výrobu proteinů v miligramovém měřítku.

Hmyzí buňky

Hmyzí expresní platformy, které se hojně využívají k produkci rekombinantních proteinů pro strukturní studie, jsou levné, škálovatelné a méně náročné než savčí buňky. Tyto buňky lze pěstovat ve vířivých nebo třepacích baňkách a nevyžadují atmosféru obohacenou o CO₂. Zavedené hmyzí buněčné linie mohou produkovat rekombinantní proteiny s vysokými výtěžky a vyžadují menší kultivační objemy.

Klíčové vlastnosti expresních platforem hmyzu

• Signální peptidy se štěpí stejně jako v systémech savců
• Disulfidové vazby vznikají v endoplazmatickém retikulu
• Pro proteolytické zpracování jsou k dispozici enzymy konvertující proteiny
• Složení membrán podobné savčím systémům

Média bez živočišných složek

Tradiční techniky kultivace buněk vyžadují živočišné sérum v koncentraci až 20 % celkového objemu kultury. Na základě obav z náhodných látek, které se někdy vyskytují v séru živočišného původu, se při výrobě rekombinantních proteinů pro terapeutické použití začala upřednostňovat média bez séra. Naše nabídka savčích buněčných linií zahrnuje linie, které lze kultivovat v médiích bez živočišných složek.