PCR Master Mix

Reakční zkumavka PCR

Přečtěte si více informací

• Co je to PCR nebo RT-PCR Master Mix?
• Použití master mixu
• Komponenty master mixu
  
• Typy master směsí
• Obvyklá receptura PCR master směsi
• Standardní PCR master směsi
  
• Vysoce věrné PCR master směsi
• RT-PCR master směsi
• qPCR Master Mixes
• Doporučené produkty PCR Master Mixes

Co je to PCR nebo RT-PCR master mix?

Master mix PCR, někdy známý jako supermix nebo ready mix, je dávková směs činidel PCR v optimálních koncentracích, kterou lze připravit a rozdělit do mnoha zkumavek PCR nebo 96jamkových destiček PCR. Master mix obvykle obsahuje DNA polymerázu, dNTP, MgCl₂ a pufr. Použití master mixu snižuje pipetování a riziko kontaminace, je pohodlné, šetří čas a předchází možným chybám při míchání, což je ideální pro vysoce výkonné aplikace. 

Master mix umožňuje výzkumným pracovníkům nastavit kontroly a testovat různé koncentrace cílových DNA nebo RNA templátů, aniž by museli do každé reakční zkumavky nebo jamky destičky jednotlivě přidávat přesné množství enzymů, pufrů, kofaktorů (obvykle MgCl₂), vody a dNTP. Místo toho se jednou připraví velká směs obsahující všechna nebo většinu činidel pro PCR. Příslušné množství master mixu lze napipetovat do zkumavek nebo jamek destiček a zkombinovat s libovolnými složkami, které se v jednotlivých reakcích liší, jako jsou například templáty DNA nebo RNA nebo primery.

Reakce PCR velkého rozsahu mohou obsahovat 2 000 nebo více jednotlivých reakcí o objemu 25 μl až 50 μl. I v případě dávky 20 reakcí mohou výzkumní pracovníci ušetřit čas, omezit chyby při pipetování a zlepšit konzistenci pomocí master mixu. Tyto směsi zabraňují úplnému vynechání činidel v reakci, což v důsledku přináší falešně negativní výsledky.

Náš kalkulátor master směsí PCR vám pomůže naplánovat recepturu master směsi pro vlastní dávku reakcí PCR.

Použití master směsí PCR

Master směsi PCR se běžně používají v následujících aplikacích:

• Vysokokapacitní PCR
• Rutinní PCR

Mastermixy s DNA polymerázou s horkým startem jsou ideální pro následující aplikace:

• Multiplexová PCR
• Redukce dimerů primerů
• Pohodlné nastavení při okolní teplotě kompatibilní s automatizací

Laboratoře ve fázích předběžného zkoumání mohou měnit DNA nebo RNA templáty a zároveň spoléhat na pohodlí ostatních předem namíchaných komponent.

Komponenty směsi MasterPCR

• Enzym
• Pufr(y)
• Kofaktor - chlorid hořečnatý (MgCl₂), je nejběžnější. Někdy se u konkrétních enzymů používá MgSO₄ .
• dNTP
• Primery
• Šablona DNA (pokud budou všechny vzorky jednotné)
  
• Voda bez nukleázy nebo voda pro PCR

Typy master směsí

K dispozici je mnoho předpřipravených master směsí PCR, které pomáhají šetřit čas a vyhnout se chybám při měření a dávkování.

Většina komerčních master mixů PCR je určena pro určitý typ PCR, například pro horký start nebo kompatibilní pouze s určitými termocyklery. To platí zejména pro PCR v reálném čase (známou také jako kvantitativní PCR nebo qPCR), která se spoléhá na termocykler, jenž dokáže detekovat průběh reakce na základě odpovídajícího vývoje fluorescence z barviva obsaženého v master mixu.

Komerční master mixy přesto vyžadují před použitím určitou přípravu, i když jen pro přidání templátové DNA nebo RNA. Mohou navíc vyžadovat rozmrazení, zchlazení, zředění vodou vhodnou pro PCR a promíchání pipetou nebo odstředivkou. Ujistěte se, že jste vybrali správnou master směs, která vyhovuje vašim experimentálním potřebám a nastavení PCR.

Nabízíme mnoho master směsí pro PCR a PCR v reálném čase, které jsou validovány pro různé přístroje. Náš praktický průvodce výběrem směsi pro PCR vám pomůže určit vhodnou master směs nebo komponenty pro výrobu vlastní směsi. Vyprofilovali jsme také několik našich nejprodávanějších master mixů pro PCR podle stylu PCR:

• Standardní PCR
• Vysoce věrná PCR
• RT PCR
• qPCR

Obvyklý recept na PCR master mix

Základní recept na PCR master mix.

Objem	Komponent	Konečná koncentrace
5 µl	10X pufr PCR	1X
1 µl	dNTPs (10 mM)	200 µM
1 - 2 µL	Primár vpředu	Primár vpředu50 - 100 pmol
1 - 2 µl	Reverzní primer	50 - 100 pmol
0.5 - 1 µl	Taq DNA polymeráza (5U/µl)	2.5 - 5 U
1 - 5 µl	Templátová DNA
br>	1 - 200 ng
1 µL	MgCl2 (50 mM)	1 mM
Proměnná	Voda	Přidat do q.s. do 50 µl
50 µl	Celkový objem

Příprava komerční master směsi

Všimněte si, že tento typický recept se liší směs od směsi a podle konkrétního použití. Prostudujte si prosím poskytnutou literaturu k produktu pro přípravu konkrétní master směsi nebo hotové směsi.

Objem	Složka	Konečná koncentrace
25 µl	2X Master Mix	1X
1 µl	Forward primer	50 pmol
1 µl	reverzní primer	50 pmol
1 - 5 µl	Template DNA	1 - 200 ng
17 - 22 µl	Voda	Přidat do q.s. do 50 µl
50 µl	Celkový objem

Standardní PCR master směsi

ReadyMix™ Taq PCR Reaction Mix with MgCl₂

ReadyMix™ Taq PCR Reaction Mix je připravený roztok obsahující vše potřebné pro PCR reakci kromě specifických primerů a templátu. Směs obsahuje naši vysoce kvalitní Taq DNA polymerázu, 99 % čistých deoxynukleotidů a pufr ve 2× optimalizovaném reakčním koncentrátu.

Roche PCR Master

Master PCR od společnosti Roche obsahuje všechna činidla potřebná k provedení standardní PCR. Jediné, co je třeba přidat, je templátová DNA, primery a potřebné množství vody.

REDTaq^® Reakční směs ReadyMix™ PCR

.Tato směs kombinuje výkon a výhody naší REDTaq^® DNA polymerázy s pohodlím reakční směsi ReadyMix™ PCR. REDTaq^® ReadyMix™ je směs připravená k použití, která obsahuje Taq DNA polymerázu, 99 % čistých deoxynukleotidů, reakční pufr a inertní červené barvivo v 2X koncentrátu.

Vysoce věrné PCR Master směsi

Roche High-fidelity PCR Master

Vyberte si praktický High-fidelity PCR Master, dvakrát koncentrovanou směs připravenou k použití, která kombinuje systém Expand High Fidelity PCR s dNTPs PCR kvality, MgCl₂ a optimalizovaný reakční pufr.

Millipore KOD Hot Start Master Mix

Jedná se o 2× směs připravenou k použití, která obsahuje polymerázu KOD Hot Start DNA, dvě monoklonální protilátky, ultračisté deoxynukleotidy a reakční pufr s MgSO₄. Tato směs je optimalizována pro pohodlnou vysoce věrnou PCR.

RT-PCR Master Mixes

Sada pro syntézu cDNA s vysokou věrností Roche Transcriptor je navržena pro reverzní transkripci RNA se zvýšenou věrností ve srovnání s jinými reverzními transkriptázami. Souprava obsahuje Transcriptor High Fidelity reverzní transkriptázu, směs rekombinantní reverzní transkriptázy a korekturu zprostředkujícího enzymu optimalizovanou pro dvoukrokovou RT-PCR.

SYBR^® Green Quantitative RT-qPCR Kit poskytuje vysoce citlivou metodu pro kvantitativní analýzu genové exprese. Naše QRT-PCR ReadyMix™ kombinuje výhody M-MLV RT a JumpStart Taq v pohodlné hotové směsi.

KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ činidlo je vysoce citlivá master směs připravená k použití pro kvantitativní PCR s reverzní transkripcí (RT-qPCR) templátů RNA s použitím chemie pro detekci hybridizačních sond, jako je TaqMan.sup>® 5'-hydrolýzní sondy na systémech PCR v reálném čase (pro výběr vhodného činidla pro váš přístroj viz část o kompatibilitě přístrojů).

MystiCq^® microRNA cDNA Synthesis Mix obsahuje všechny složky potřebné k převodu zralých mikroRNA na cDNA templáty pro qPCR. Tato souprava má oddělené kroky polyadenylace a reverzní transkripce, což umožňuje v případě potřeby optimalizovat protokol.

Master směsi pro qPCR v reálném čase

Master qPCR založený na sondách

K dispozici jsou Mastery sond TaqMan® FastStartMastery sond TaqMan®/a> od společnosti Roche je 2× koncentrovaná master směs připravená k použití, která obsahuje všechna činidla (kromě primerů, sondy a templátu) potřebná pro provádění kvantitativních testů detekce DNA v reálném čase, včetně qPCR a dvoukrokové qRT-PCR, ve formátu detekce hydrolyzovanou sondou.

Roche EagleTaq Universal Master Mix (ROX) je 2× koncentrovaná master směs PCR připravená k použití, která obsahuje všechna činidla (kromě primerů, sond a templátu) potřebná k provádění kvantitativních reakcí PCR v reálném čase ve formátu hydrolýzní sondy. Obsahuje speciální referenční barvivo ROX, díky čemuž je vhodná pro všechny přístroje pracující v reálném čase, na kterých je pro kvantitativní analýzu zapotřebí referenční barvivo ROX.

SYBR^® Green PCR

SYBR^® green master mixes jsou vhodné pro PCR v reálném čase. Používají asymetrické kyaninové barvivo. Naší nejoblíbenější SYBR^® zelenou směsí je Roche's FastStart SYBR^® Green. FastStart SYBR^® Green Master je směs činidel připravená k použití, která zjednodušuje přípravu reakcí pro qPCR a dvoukrokovou qRT-PCR s použitím interkalačního barviva SYBR^® Green I pro detekci a analýzu DNA.

Reagencie KiCqStart^® qPCR ReadyMix™

KiCqStart qPCR Reagents

KiCqStart qPCR ReadyMix™sup>® qPCR ReadyMix™ master mixes jsou dodávány připravené k použití v koncentrovaném formátu. Obsahují pufr, stabilizátory a Taq s horkým startem. Použijte je v rychlých nebo konvenčních cyklických protokolech na jakémkoli termálním cykleru. Vyberte si z SYBR^® zelených nebo směsí založených na sondách .

KiCqStart^® SYBR^® zelená qPCR ReadyMix™ master mix je kompatibilní se systémy Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Illumina, Corbett a Roche. Složky obsahují 2× reakční pufr obsahující optimalizované koncentrace MgCl₂, dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP), KiCqStart^® Taq DNA polymerázy, SYBR^® zelené barvivo a stabilizátory.

Low ROX™ pracuje s Low ROX™ pro přístroje ABI a Stratagene.

Reagencie LuminoCt™ qPCR

Na základě vysoce optimalizované chemie ReadyMix™, reagencie LuminoCt™ qPCR poskytují nepřekonatelnou rychlost analýzy bez obětování přesnosti, preciznosti nebo citlivosti. A co je nejlepší, činidla LuminoCt™ bezproblémově spolupracují s většinou qPCR přístrojů, takže optimalizace reakčních podmínek je omezena na naprosté minimum. Uživatelé si často mohou jednoduše vybrat sadu, sestavit test a začít. Vytváření nejlepších možných dat qPCR nebylo nikdy rychlejší a jednodušší.

Přístroj LuminoCt™ SYBR^® Green qPCR ReadyMix™ reagencie je navržena tak, aby poskytovala nepřekonatelnou rychlost stanovení bez obětování přesnosti, preciznosti nebo citlivosti. Rozsáhlá konstrukce a validace chemie ReadyMix™ prakticky eliminovala potřebu optimalizace, pokud se činidlo LuminoCt™ používá ve spojení se správně navrženými primery. Začlenění protilátky JumpStart™ Taq do činidla ReadyMix™ eliminuje aktivitu polymerázy při okolních teplotách, aniž by způsobovalo problémy s výkonem spojené s chemicky modifikovanou protilátkou Taq s horkým startem.

Sada LuminoCt™ qPCR ReadyMix™ je určena k provádění testů qPCR založených na sondách na běžně dostupných přístrojových platformách reálného času. Reagencie ReadyMix™ vyžaduje přidání referenčního barviva (dodaného v soupravě), pokud se používá na přístrojích reálného času, které vyžadují pasivní referenční barvivo ROX pro normalizaci qPCR testů.

Doporučené produkty Master Mix

.