Kontrola kvality a zajištění kvality oligonukleotidů
KONTROLA KVALITY
Naše schopnost zaručit výkonnost přímo souvisí s naší komplexní znalostí chemie oligonukleotidů a platforem syntézy, našimi analytickými systémy a zkušenostmi s vývojem metod.
Náš závazek kvality
Kvalita je nedílnou součástí našeho výrobního procesu, jak je zdůrazněno na obrázku 1. Všechny oligonukleotidy analyzujeme pomocí hmotnostní spektrometrie. K ověření specifikací lze použít i doplňkové techniky, jako je chromatografie a elektroforéza. Naše značné investice do nejmodernějšího analytického vybavení poskytují špičkové nástroje pro vývoj a monitorování našich procesů. Náš pečlivý výběr softwarových nástrojů pro integraci píků, dekonvoluci křivek a zpracování signálu zaručuje, že získaná data budou smysluplná, užitečná a praktická.
Mít správné nástroje je jen polovina řešení - náš tým analytických chemiků, molekulárních biologů a vědců zabývajících se nukleovými kyselinami je to, co nás skutečně odlišuje. Naše týmy spolupracují na vytváření analytických metod, které podporují vývoj produktů a obchodní požadavky našich zákazníků.
Obrázek 1.Kontrola kvality se používá v celém výrobním procesu.
Výchozí materiály & Chemie
Kritické suroviny pocházejí zevnitř a zahrnují: fosforamidity, nosiče pro syntézu na pevné fázi, činidla a rozpouštědla. Po obdržení kritických surovin se provádí vstupní kontrola kvality, která může zahrnovat analýzu obsahu vody (Karl Fischerova titrace), identifikaci fosforamiditů, ověření pevných nosičů a přijetí na základě certifikátu analýzy. Součástí našeho systému řízení kvality je navíc přísný program kvalifikace dodavatelů, který nám umožňuje řídit vztahy s dodavateli a jejich výkonnost.
Chemické protokoly byly optimalizovány tak, aby byla zajištěna >99,0% účinnost spojení pro každý přídavek nukleotidu během syntézy. Protokoly jsou finančně vyladěny pro syntézu krátkých (<35 mer) i dlouhých (>110 mer) oligonukleotidů. Syntéza oligonukleotidů se provádí za použití zavedené fosforamiditové chemie. Rutinně zkoumáme nové chemikálie, včetně ochranných skupin, aktivátorů a podpůrných prostředků syntézy, abychom neustále zlepšovali kvalitu oligonukleotidů a rozšiřovali portfolio produktů.
Instrumentace &; Syntéza
Náš vlastní tým inženýrů zahrnuje mechanické, elektrické a softwarové odborníky, kteří navrhují a kvalifikují naše vlastní zařízení pro syntézu a zpracování. Přístroje jsou kvalifikovány prostřednictvím zavedeného procesu přezkoumání návrhu a také programů kvalifikace instalace, provozní kvalifikace a procesní kvalifikace (IQ/OQ/PQ). Rozsáhlý program preventivní a prognostické údržby přístrojů zajišťuje optimální výkon, konzistenci a spolehlivost. Náš systém LIMS nepřetržitě monitoruje průběh každého oligonukleotidu v reálném čase a neshodné produkty jsou označeny pro karanténu.
Ověřování identity sekvence pomocí hmotnostní spektrometrie
Mass Spectrometry (MS) je technologií volby pro analýzu oligonukleotidů. Ve spojení s kvalifikací procesu syntézy zajišťuje, že byla syntetizována správná sekvence. Kromě toho umožňuje citlivou detekci nízkých hladin těchto vedlejších produktů:
- Trunkační sekvence (vzniklé neúplným spojením, tj. N-1, 2 atd.), někdy nazývané "shortmery"
- Deleční sekvence (vzniklé selháním cappingu uprostřed syntézy), rovněž nazývané shortmery
- Depurinace (nežádoucí hydrolytické odštěpení adeninu a guaninu z příslušných [ribo] nukleosidů)
- Neúplné odstranění ochranných skupin, např.např. benzoyl na adeninu
- Adukty akrylonitrilu (vznikající při deprotekci)
Každý oligonukleotid je důkladně charakterizován pomocí MS, aby se zajistilo, že tyto vedlejší produkty jsou pod přijatelnou hranicí, protože mohou negativně ovlivnit výkonnost, i když byla syntetizována správná sekvence.
K dosažení našeho závazku 100% kontroly kvality se používají dva typy MS: MALDI-TOF MS (matricová laserová desorpce/ionizace v čase letu) a ESI-MS (ionizace elektrosprejem). Každý typ má své výhody a nevýhody. Naše různá výrobní pracoviště používají buď jeden, nebo oba typy přístrojů v závislosti na povaze převážně syntetizovaných sekvencí.
Ověřování čistoty pomocí analytické HPLC
MALDI-TOF MS a ESI-MS mohou poskytnout kvalitativní posouzení čistoty, zatímco kvantitativní posouzení poskytují RP-HPLC (reverzní vysokoúčinná kapalinová chromatografie), IE-HPLC (iontově výměnná vysokoúčinná kapalinová chromatografie) a UPLC (ultraúčinná kapalinová chromatografie). Použitá metoda závisí na povaze oligonukleotidu a také na konečných specifikacích.
Kvantifikace pomocí UV spektroskopie
An u každého oligonukleotidu se provede odečet absorbance při vlnové délce 260 nm a kvantifikace. Kvůli přesnosti se provede několik měření pomocí automatického spektrofotometru vybaveného korekcí délky dráhy. Extinkční koeficient - vypočtený standardní průmyslovou metodou "nejbližšího souseda" - a Beerův-Lambertův zákon umožňují převést údaj absorbance na veličinu.
Analýza duplexů siRNA
Všechny simplexy siRNA se analyzují pomocí MS. Kromě toho mohou naše různá výrobní pracoviště k analýze duplexů používat PAGE (polyakrylamidovou gelovou elektroforézu) v závislosti na povaze sekvencí.
Vlastní formáty
Jelikož se automatizace stále dostává do popředí zájmu mnoha laboratoří, představuje dodávání oligonukleotidů ve vlastních formátech, jako jsou 96- a 384jamkové destičky, větší výzvu pro zajištění konzistentní kvality. Formát produktu, jako jsou specifické destičky, koncentrace a míchání dopředných a zpětných primerů, vyžaduje podrobné specifikace. Pro ověření přesnosti u vlastních formátů jsou zavedena další opatření pro kontrolu kvality .
Finální kontrola
Všechny výrobky jsou před zabalením podrobeny finální vizuální kontrole. Kontroly poskytují finální záruku, že finální výrobky jsou ve správných formátech, správně označené a připravené k okamžitému použití.
Zajištění kvality
Základem našich výrobních procesů je robustní Systém řízení kvality (QMS), který řídí dodržování našich následujících registrací kvality:
- ISO 9001:2015 pro výrobu oligonukleotidů pro výzkum
- ISO 13485:2016 pro výrobu oligonukleotidů pro diagnostiku
- ISO 14001:2015 pro efektivní environmentální řízení
Tato kultura kvality je integrována do všech aspektů našeho podnikání. Klíčové součásti našeho systému řízení kvality zahrnují:
- Certifikáty analýzy
- Kontrola dokumentů
- Oznamování změn
- Řízení dodavatelů
- Obchodní dohody
- Korigativní a preventivní opatření
Každá složka je hnacím motorem pro zajištění kvality a pro její ověření běžně pořádáme přísné audity registrátorů, interní audity a audity zákazníků.
Závěr
Pro provádění kontroly kvality oligonukleotidů je k dispozici několik analytických technik, včetně 100% hmotnostní spektrometrie.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?