Postup maxiprepování plazmidů GenElute™ HP

Video: Postup maxiprepování plazmidů

Sada GenElute™ HP Plasmid Maxiprep nabízí jednoduchou, rychlou a nákladově efektivní metodu izolace plasmidové DNA z rekombinantních E. coli kultur. Získaná plazmidová DNA je připravena k okamžitému použití v navazujících aplikacích, jako je restrikční štěpení, ligace, sekvenování, PCR, transformace a transfekce.

• Objem kultury - 150 ml bakteriální kultury
• Výtěžnost - až 1,5 ml.2 mg yield of high-copy plasmid DNA
• Speed - From harvested bacterial culture to pure plasmid DNA in 30 minutes or less
• Flexible - Offers the flexibility of a vacuum or spin format, does not rely on gravity flow or ultracentrifugation
• Ekonomický - Nižší náklady na přípravu plus vyšší výtěžek na přípravu se rovná dvojnásobné úspoře

Kroky maxiprepování plazmidové DNA

1. Předepište 150 ml jednodenní kultury odstředěním.

2. Přidejte 12 ml resuspenzního roztoku.

3. Pipetujte nahoru a dolů nebo vortexujte, abyste zcela resuspendovali bakteriální pelet.

4. Přidejte 12 ml lyzačního pufru.

5. Nechte směs 5 minut odstát.

6. Pozorně 6-8krát invertujte. Nevrtejte.

7. Připravte si filtrační stříkačku.

8. Přidejte do směsi 12 ml neutralizačního roztoku.

9. Dobře invertujte 4-6krát.

10. Přidejte ke směsi 9 ml vazebného roztoku.

11. Invertujte 1-2krát.

12. Směs nalijte do válce filtrační stříkačky.

13. Lyzát nechte 5 minut odstát.

14. Přidejte 12 ml roztoku pro přípravu kolony do vazebné kolony a nechte ji projít.
    

15. Po 5minutové inkubaci vyloučte čirý lyzát do čerstvé sběrné zkumavky. Není nutné zbytkový lyzát protlačovat filtrační stříkačkou.

16. Vlijte lyzát do vazebné kolony a nechte jej projít.

17. Přidejte 12 ml promývacího roztoku 1 do vazebné kolony a nechte jej projít.

18. Přidejte 12 ml promývacího roztoku 2 do vazebné kolony a nechte jej projít.

19. Ponechte vakuum zapnuté po dobu 10 minut, aby se kolona vysušila. Pokud je kolonek maxiprep více než 6, sušte je alespoň 20 minut.

20. Přeneste vazebnou kolonku do čisté sběrné zkumavky.

21. Přidejte ke koloně 3 ml elučního roztoku a odstřeďujte 5 minut.

22. Plasmidová DNA je nyní přítomna v eluátu.