11277073910
Roche
Mistura de marcação de RNA DIG
sufficient for 20 reactions, solution
Sinônimo(s):
Marcação de ácidos nucleicos
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About This Item
Código UNSPSC:
41105500
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Formulário
solution
Nível de qualidade
uso
sufficient for 20 reactions
embalagem
pkg of 40 μL
fabricante/nome comercial
Roche
Impurezas
Ribonuclease, none detected (up to 20 µl using MSII-RNA)
cor
colorless
solubilidade
water: miscible
temperatura de armazenamento
−20°C
Descrição geral
Eficiência da marcação: Aproximadamente 10 μg de RNA de comprimento total marcado com digoxigenina são transcritos a partir de 1 μg de molde de DNA linear.
Tempo de ensaio: 135 minutos
Materiais da amostra
DNA de plasmídeo linearizado:
O DNA a ser transcrito é clonado no sítio de poli-ligação de um vetor de transcrição apropriado que contém o poli-ligante, um promotor de RNA polimerase para SP6, T7 ou T3. Para a síntese de transcritos pela técnica de “run-off”, o plasmídeo é linearizado por uma enzima de restrição. Enzimas de restrição capazes de criar alças (“overhangs”) 5′ devem ser usadas; alças (“overhangs”) 3′ devem ser evitadas. O molde de DNA linearizado deve ser purificado por extração com fenol-clorofórmio e precipitação com etanol para evitar a contaminação com RNases. Para a técnica de transcrição ′run around′, usa-se DNA de plasmídeo circular.
Produto de PCR:
O fragmentos de PCR que contêm sequências promotoras de RNA polimerase também podem ser usados como moldes para transcrição. Recomenda-se purificar o fragmento de PCR com coluna de purificação HighPure antes da transcrição.
Tempo de ensaio: 135 minutos
Materiais da amostra
DNA de plasmídeo linearizado:
O DNA a ser transcrito é clonado no sítio de poli-ligação de um vetor de transcrição apropriado que contém o poli-ligante, um promotor de RNA polimerase para SP6, T7 ou T3. Para a síntese de transcritos pela técnica de “run-off”, o plasmídeo é linearizado por uma enzima de restrição. Enzimas de restrição capazes de criar alças (“overhangs”) 5′ devem ser usadas; alças (“overhangs”) 3′ devem ser evitadas. O molde de DNA linearizado deve ser purificado por extração com fenol-clorofórmio e precipitação com etanol para evitar a contaminação com RNases. Para a técnica de transcrição ′run around′, usa-se DNA de plasmídeo circular.
Produto de PCR:
O fragmentos de PCR que contêm sequências promotoras de RNA polimerase também podem ser usados como moldes para transcrição. Recomenda-se purificar o fragmento de PCR com coluna de purificação HighPure antes da transcrição.
Sondas de RNA de fita simples com marcador DIG de comprimento definido são gerados por transcrição in vitro. O DIG-11-UTP é incorporado por RNA polimerases para SP6, T7 e T3 aproximadamente a cada 20º a 25º nucleotídeo do transcrito em condições padrão. A mistura de marcação de RNA com DIG é projetada especificamente para uso com RNA polimerases para SP6, T7 e T3, que são fornecidos com um tampão de transcrição otimizado.
Mistura de RNA conveniente para marcação de RNA com digoxigenina-11-UTP.
Conteúdo
Solução 10x com: 10 mM de ATP, CTP, GTP (cada), 6,5 mM de UTP, 3,5 mM de DIG-11-UTP.
Mistura de RNA conveniente para marcação de RNA com digoxigenina-11-UTP.
Conteúdo
Solução 10x com: 10 mM de ATP, CTP, GTP (cada), 6,5 mM de UTP, 3,5 mM de DIG-11-UTP.
Especificidade
Inativação térmica: Pare a reação com a adição de 2 μl 0,2 M de EDTA (pH 8,0).
Aplicação
Marcação de RNA com digoxigenina-11-UTP por transcrição in vitro com RNA polimerases para SP6, T7 e T3. O RNA marcado com DIG é usado em diversas técnicas de hibridização:
- Northern blot
- Southern blot
- Dot blot
- Hibridização de colônia ou placa
- Experimentos de proteção de RNase
- Cromossomos, células e cortes de tecido in situ
Características e benefícios
A mistura de marcação de RNA com DIG é projetada especialmente para uso com RNA polimerases para SP6, T7 e T3 da Roche, que são fornecidos com um tampão de transcrição otimizado.
Qualidade
Testado quanto à função no kit de marcação de RNA com DIG e no kit de detecção de ácidos nucleicos com DIG.
Outras notas
Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.
Palavra indicadora
Warning
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Acute Tox. 4 Oral
Código de classe de armazenamento
12 - Non Combustible Liquids
Classe de risco de água (WGK)
WGK 1
Ponto de fulgor (°F)
does not flash
Ponto de fulgor (°C)
does not flash
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Artigos
Digoxigenin (DIG) labeling methods and kits for DNA and RNA DIG probes, random primed DNA labeling, nick translation labeling, 5’ and 3’ oligonucleotide end-labeling.
Protocolos
Determine the labeling efficiency in terms of μg (expected yield of a standard labeling reaction is 20 μg of DIG labeled RNA per μg linearized template DNA after the DIG RNA labeling reaction).
Nossa equipe de cientistas tem experiência em todas as áreas de pesquisa, incluindo Life Sciences, ciência de materiais, síntese química, cromatografia, química analítica e muitas outras.
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