11175025910
Roche
Kit de marcação de RNA com DIG (SP6/T7)
sufficient for 2 x 10 labeling reactions, kit of 1 (12 components), suitable for hybridization, suitable for Southern blotting
Sinônimo(s):
Sistema DIG, rotulagem de rna
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About This Item
Código UNSPSC:
41105500
Produtos recomendados
uso
sufficient for 2 x 10 labeling reactions
Nível de qualidade
embalagem
kit of 1 (12 components)
fabricante/nome comercial
Roche
características do produto alternativo mais ecológico
Designing Safer Chemicals
Learn more about the Principles of Green Chemistry.
sustainability
Greener Alternative Product
técnica(s)
Northern blotting: suitable
Southern blotting: suitable
hybridization: suitable
categoria alternativa mais ecológica
, Aligned
temperatura de armazenamento
−20°C
Descrição geral
Tempo de ensaio: 145 minutos
Materiais da amostra
O kit de marcação de RNA com DIG produz sondas de RNA de fita simples marcadas com DIG de comprimento conhecido. A RNA polimerase para SP6 ou para T7 transcreve essas sondas in vitro a partir de um molde de DNA (na presença de digoxigenina-UTP).
Marcação de RNA por transcrição in vitro
O DNA a ser transcrito é clonado no sítio de poli-ligação de vetores de transcrição apropriados (p.ex., pSPT 18 ou 19), contendo promotores de RNA polimerases para SP6 e T7. O molde de DNA adjacente é linearizado em um sítio adequado, e as RNA polimerases são usadas para produzir transcritos por “run off”. A DIG-UTP é incorporada ao transcrito. Cada 20º a 25º nucleotídeo do RNA recém-sintetizado é uma DIG-UTP. Dado que a concentração de nucleotídeos não se torna limitante na reação padrão de transcrição, essa reação pode gerar grandes quantidades de RNA marcado.
Materiais da amostra
- DNA de plasmídeo linearizado
- Produto de PCR
O kit de marcação de RNA com DIG produz sondas de RNA de fita simples marcadas com DIG de comprimento conhecido. A RNA polimerase para SP6 ou para T7 transcreve essas sondas in vitro a partir de um molde de DNA (na presença de digoxigenina-UTP).
Marcação de RNA por transcrição in vitro
O DNA a ser transcrito é clonado no sítio de poli-ligação de vetores de transcrição apropriados (p.ex., pSPT 18 ou 19), contendo promotores de RNA polimerases para SP6 e T7. O molde de DNA adjacente é linearizado em um sítio adequado, e as RNA polimerases são usadas para produzir transcritos por “run off”. A DIG-UTP é incorporada ao transcrito. Cada 20º a 25º nucleotídeo do RNA recém-sintetizado é uma DIG-UTP. Dado que a concentração de nucleotídeos não se torna limitante na reação padrão de transcrição, essa reação pode gerar grandes quantidades de RNA marcado.
Estamos comprometidos em trazer para você produtos alternativos mais ecológicos, que aderem a um ou mais dos 12 princípios de química ecológica (The 12 Principles of Greener Chemistry). Este produto foi desenvolvido como um produto químico mais seguro. O sistema de DIG foi estabelecido como uma alternativa sensível e econômica ao uso de radioatividade para marcação e detecção de ácidos nucleicos. Existem várias publicações disponíveis que comprovam a versatilidade do sistema de DIG, de modo que o uso de radiomarcação não é mais a única opção para marcação de DNA para hibridização.
Kit de marcação de RNA com digoxigenina-UTP por transcrição in vitro com polimerases para SP6 e T7. Por esse método, são produzidas sondas de RNA de fita simples de comprimento conhecido, que podem ser usadas em diversas técnicas de hibridização.
Especificidade
Sensibilidade e especificidade
As sondas de RNA marcadas com DIG podem detectar genes de cópia única em apenas 1 μg de DNA de mamíferos nas seguintes condições de ensaio: A mistura de hibridização contém 20 a 100 ng de sonda marcada/ml, e a sonda ligada é detectada com fosfatase alcalina (FA) anti-DIG e visualizada com o substrato quimioluminescente CDP-Star.
Inativação térmica: Pare a reação com a adição de 2 μl de EDTA 0,2 M (pH 8,0).
As sondas de RNA marcadas com DIG podem detectar genes de cópia única em apenas 1 μg de DNA de mamíferos nas seguintes condições de ensaio: A mistura de hibridização contém 20 a 100 ng de sonda marcada/ml, e a sonda ligada é detectada com fosfatase alcalina (FA) anti-DIG e visualizada com o substrato quimioluminescente CDP-Star.
Inativação térmica: Pare a reação com a adição de 2 μl de EDTA 0,2 M (pH 8,0).
Aplicação
Marcação de RNA com DIG-11-UTP por transcrição in vitro com RNA polimerases para SP6 e T7. Os transcritos “run off” marcados com DIG são sintetizados com alta eficiência e podem ser usados em diversas técnicas de hibridização:
Observação: Dado que a ligação entre DIG e UTP é resistente a álcalis, o RNA marcado com DIG pode ser fragmentado por tratamento alcalino. Uma leve redução do tamanho da sonda de RNA marcada com DIG pode torná-la mais adequada para determinadas aplicações de hibridização in situ.
- Northern blot
- Southern blot
- Hibridizações in situ
- Hibridização de colônia ou placa
- Experimentos de proteção de RNase
Observação: Dado que a ligação entre DIG e UTP é resistente a álcalis, o RNA marcado com DIG pode ser fragmentado por tratamento alcalino. Uma leve redução do tamanho da sonda de RNA marcada com DIG pode torná-la mais adequada para determinadas aplicações de hibridização in situ.
Embalagem
1 kit contendo 12 componentes.
Qualidade
Princípio do teste: O molde de DNA a ser transcrito é clonado no sítio de poli-ligação de vetores de transcrição apropriados, que contém promotores de RNA polimerases para SP6 e/ou T7. Após a linearização em um sítio adequado, o RNA é transcrito na presença de DIG-UTP. Em condições normais, cerca de 10 μg de RNA de comprimento total marcado com DIG são transcritos a partir de 1 μg de molde.
Outras notas
Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.
Somente componentes do kit
Nº do produto
Descrição
- pSPT18 DNA 0.25 mg/ml
- pSPT19 DNA 0.25 mg/ml
- Control DNA 1, pSPT18-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
- Control DNA 2, pSPT19-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
- DIG-labeled Control RNA, DIG-labeled "antisense" neo RNA 100 ng/µl
- Unlabeled Control RNA, neo poly (A) "sense" RNA 200 µg/ml
- NTP Labeling Mixture 10x concentrated
- Transcription Buffer 10x concentrated
- DNase I, RNase-free 10 U/µl
- Protector RNase Inhibitor 20 U/µl
- SP6 RNA Polymerase 20 U/µl
- T7 RNA Polymerase 20 U/µl
Ver tudo (12)
Palavra indicadora
Warning
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Acute Tox. 4 Oral - Eye Irrit. 2 - Skin Sens. 1
Código de classe de armazenamento
12 - Non Combustible Liquids
Classe de risco de água (WGK)
WGK 2
Ponto de fulgor (°F)
does not flash
Ponto de fulgor (°C)
does not flash
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Artigos
Digoxigenin (DIG) labeling methods and kits for DNA and RNA DIG probes, random primed DNA labeling, nick translation labeling, 5’ and 3’ oligonucleotide end-labeling.
Protocolos
Determine the labeling efficiency in terms of μg (expected yield of a standard labeling reaction is 20 μg of DIG labeled RNA per μg linearized template DNA after the DIG RNA labeling reaction).
Nossa equipe de cientistas tem experiência em todas as áreas de pesquisa, incluindo Life Sciences, ciência de materiais, síntese química, cromatografia, química analítica e muitas outras.
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