T4049

Trypsin-EDTA-Lösung

0.25%, sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture, 2.5 g porcine trypsin and 0.2 g EDTA, 4Na per liter of Hanks′ Balanced Salt Solution with phenol red

• Synonym(e): Cocoonase, Tryptar, Tryptase
• EC-Nummer: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• MDL-Nummer: MFCD00130286
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.75

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Porcine
• Qualitätsniveau: 400
• Sterilität: sterile-filtered
• Produktlinie: BioReagent
• Form: solution
• Mol-Gew.: 23.4 kDa
• Konzentration: 0.25%
• Methode(n): cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• Verunreinigungen: Porcine parvovirus, none detected (9 CFR)
• pH-Wert: 7.0-7.6
• Versandbedingung: dry ice
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Trypsin besteht aus einem einsträngigen Polypeptid aus 223 Aminosäureresten und entsteht durch Entfernung des N-terminalen Hexapeptids von Trypsinogen nach Spaltung einer Lys-Ile-Peptidbindung. Die Aminosäuresequenz ist durch 6 Disulfidbrücken vernetzt. Dies ist die native Form von Trypsin, Beta-Trypsin. Beta-Trypsin kann durch Autolyse am Lys-Ser-Rest aufgespalten und so in Alpha-Trypsin umgewandelt werden. Trypsin gehört zur Familie der Serinproteasen.

Anwendung

Anwendungsgebiete von Trypsin-EDTA-Lösung:

• Zum Ablösen von humanen Kolorektalkrebszellen HT29, die in RPMI 1640 mit 10 % fötalem Kälberserum kultiviert wurden, zur Bestimmung der relativen Zellhäufigkeit in hochkonzentrierten Proben.
• Zum Trypsinieren der transient transfizierten humanen Embryonierenzelllinie tcA-201.
• Zur enzymatischen Ablösung von am Gerüst haftenden Mausfibroblasten (Zelllinie L929) während der Zellkultur zum Beurteilen des Einflusses verschiedener modifizierter Behandlungen von Vliesgerüsten und Fasern aus Poly(L/D)lactid 96/4.
• Zum Dissoziieren von Zellen vom Kulturgefäß für die durchflusszytometrische Analyse.

Geeignet zur Verwendung bei der Herstellung von Einzelzellsuspensionen für die Sequenzierung.

Dieses Produkt wird typischerweise zum Ablösen adhärenter Zellen von einer Kulturoberfläche eingesetzt. Die zum Ablösen von Zellen von ihrem Substrat erforderliche Trypsinkonzentration hängt in erster Linie vom Zelltyp und dem Alter der Kultur ab.

Biochem./physiol. Wirkung

Trypsin spaltet Peptide auf der C-terminalen Seite von Lysin- und Argininresten. Die Hydrolyse dieser Reaktion wird verlangsamt, wenn sich auf einer der Seiten der Spaltstelle ein Säurerest befindet, und die Hydrolyse wird beendet, wenn sich auf der Carboxylseite der Spaltstelle ein Prolinrest befindet. Der optimale pH-Wert für die Trypsinaktivität liegt zwischen 7 und 9. Trypsin kann auch zur Spaltung von Ester- und Amidbindungen synthetischer Aminosäurederivate eingesetzt werden. EDTA wird Trypsinlösungen als Chelatbildner zugegeben, um Calcium- und Magnesiumionen zu neutralisieren, da diese die Peptidbindungen verdecken, auf die Trypsin wirkt. Durch Entfernung dieser Ionen wird die enzymatische Aktivität verstärkt.

Serinprotease-Inhibitoren wie DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF und Aprotinin hemmen Trypsin.

Komponenten

Trypsin-Lösung (2,5 g/l Trypsin vom Schwein und 0,2 g/l EDTA•4Na in Ausgeglichener Salzlösung nach Hanks mit Phenolrot, 1X, zellkulturgetestet)

Vorsicht

Dieses Produkt wird tiefgefroren bei einer Temperatur von -10 bis -40 °C gelagert. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden.

Angaben zur Herstellung

Dieses Produkt enthält Phenolrot. Da der Versand auf Trockeneis erfolgt, kann sich in der Verpackung eine erhebliche Menge Kohlenstoffdioxid bilden. Dieses CO₂ kann in die Lösung übergehen und den pH-Wert leicht senken, was anstelle eines rosigen Farbtons einen orangen Farbton zur Folge hat. Die orange Lösung ist ebenso zur Verwendung geeignet, alternativ kann der pH-Wert mit Natronlauge angepasst werden. Wenn Zellen über einen längeren Zeitraum mit zu hoher Trypsinkonzentration inkubiert werden, kann dies die Zellmembranen schädigen und zum Zelltod führen. Zum Auflösen bzw. Verdünnen von Trypsin sollte eine gepufferte Salzlösung ohne Ca²⁺ oder Mg²⁺ genutzt werden.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable