T3924

Trypsin-EDTA-Lösung

1 ×, sterile; sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture, 0.5 g porcine trypsin and 0.2 g EDTA, 4Na per liter of Hanks′ Balanced Salt Solution with phenol red

• Synonym(e): Cell dissociation enzyme
• EC-Nummer: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• MDL-Nummer: MFCD00130286
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.78

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Porcine
• Sterilität: sterile; sterile-filtered
• Produktlinie: BioReagent
• Form: solution
• Mol-Gew.: 23.4 kDa
• Konzentration: 1 ×
• Methode(n): cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• Verunreinigungen: Porcine parvovirus, none detected (9 CFR)
• pH-Wert: 7.0-9.0
• Versandbedingung: dry ice
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Anwendung

Dieses Produkt wird typischerweise zum Ablösen adhärenter Zellen von einer Kulturoberfläche eingesetzt. Die zum Ablösen von Zellen von ihrem Substrat erforderliche Trypsinkonzentration hängt in erster Linie vom Zelltyp und dem Alter der Kultur ab.

Geeignet zur Verwendung bei der Herstellung von Einzelzellsuspensionen für die Sequenzierung.

Biochem./physiol. Wirkung

Trypsin spaltet Peptide auf der C-terminalen Seite von Lysin- und Argininresten. Die Hydrolyse dieser Reaktion wird verlangsamt, wenn sich auf einer der Seiten der Spaltstelle ein Säurerest befindet, und die Hydrolyse wird beendet, wenn sich auf der Carboxylseite der Spaltstelle ein Prolinrest befindet. Der optimale pH-Wert für die Trypsinaktivität liegt zwischen 7 und 9. Trypsin kann auch zur Spaltung von Ester- und Amidbindungen synthetischer Aminosäurederivate eingesetzt werden. EDTA wird Trypsinlösungen als Chelatbildner zugegeben, um Calcium- und Magnesiumionen zu neutralisieren, da diese die Peptidbindungen verdecken, auf die Trypsin wirkt. Durch Entfernung dieser Ionen wird die enzymatische Aktivität verstärkt.

Serinprotease-Inhibitoren wie DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF und Aprotinin hemmen Trypsin.

Komponenten

Trypsin besteht aus einem einsträngigen Polypeptid aus 223 Aminosäureresten und wird durch Entfernung des N-terminalen Hexapeptids von Trypsinogen produziert, das an der Lys-Ile-Peptidbindung abgespalten wird. Die Aminosäuresequenz ist durch 6 Disulfidbrücken quervernetzt. Dies ist die native Form von Trypsin, Beta-Trypsin. Beta-Trypsin kann durch Autolyse am Lys-Ser-Rest aufgespalten und so in Alpha-Trypsin umgewandelt werden. Trypsin gehört zur Familie der Serinproteasen.

Vorsicht

Dieses Produkt wird gefroren bei -10 bis -40 °C gelagert. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen sollte vermieden werden.

Angaben zur Herstellung

Dieses Produkt enthält Phenolrot. Da die Lieferung auf Trockeneis erfolgt, können sich erhebliche Kohlenstoffdioxidmengen in der Verpackung bilden. Wenn dieses CO₂ in die Lösung gelangt, kann der pH-Wert leicht sinken, was zu einer eher orange- statt rosafarbenen Färbung führen kann. Die orangefarbene Lösung kann weiterhin verwendet werden. Alternativ kann auch der pH-Wert mittels Natriumhydroxid angepasst werden. Wenn Zellen über einen langen Zeitraum bei zu hohen Trypsinkonzentrationen inkubiert werden, können Schäden an den Zellmembranen auftreten und die Zellen absterben. Zum Auflösen bzw. zum Verdünnen von Trypsin aus einer konzentrierten Lösung sollte eine gepufferte Salzlösung ohne Ca²⁺ oder Mg²⁺ verwendet werden.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable