黑洞淬滅器™ (bhq™)

 

黑洞淬火劑™

兩種常用的淬火劑 TAMRA™ 和 DABYCL 限制了 qPCR 的最終靈敏度和靈活性。TAMRA 不是深色淬火劑，因此會因為其本身的原生螢光而導致整體背景增加。DABCYL 雖然是一種暗色淬火劑，但吸收足跡不足，與 480 nm 以上發光的報告染料重疊度很低（圖 2）。

圖 2. DABCYL-T9 的吸收光谱与常用报告物 6-FAM™、TET™ 和 JOE™ 的发射光谱。DABCYL 以 poly-T 吸光度 (260 nm) 標準化。RFU = 相對螢光單位。

儘管DABYCL在分子信標（具有成對報告器和淬火器的結構探針，利用靜態淬火）中運作良好，但其474 nm的吸收最大值使其低於 圖2中所示報告器的最大值，因此它是雙標記探針（具有分離報告器和淬火器的線性探針，利用FRET淬火）的不良選擇。

Black Hole Quencher™ 1 (BHQ™-1)（吸收最大值為 534 nm）的吸收波長比 DABCYL 高，可直接與 FAM、TET 和 JOE 的發射最大值疊加。這可顯著提高靜態和 FRET 淬滅效率，使其成為分子信標和雙標記探針的絕佳淬滅劑。如 圖 3所示，BHQ™-1、BHQ™-2 和 BHQ™-3 涵蓋了從 480 nm 到近紅外線的光譜，因此可以使用在此範圍內任何地方發光的探針。

圖 3. 三種 BHQ™ 變異體 (與 T-9 結合，並歸一於 260 nm 的 poly-T 吸光度) 的吸收光譜與常用報告器 6-FAM、TET、HEX™、Cyanine 3、TAMRA、ROX™、LC Red 640 和 Cyanine 5 的發射最大值。

與相應的 DABCYL 或 TAMRA 探針相比，BHQ™ 探針除了具有更好的光譜重疊性之外，還具有更高的信噪比（圖 4）。

圖 4. 信噪比 (S:N) 的計算方法是將 25mer 在有五倍過量的完全互補靶序列存在時的螢光信號除以探針本身的螢光強度。

最後，如 圖 5所示，BHQ™變體因可有效淬滅的報告物種增多，且幾乎沒有串聯，因此可輕鬆實現單管多重分析。這簡化了多重分析的設計、實施和詮釋。

圖 5. BHQ™ 變體的獨特特性允許靈活選擇光譜解析度高的報告器，可實現單管多路複用，幾乎不產生串擾。

總而言之，Black Hole Quencher™：

• 沒有原生螢光（發熱而非發光），因此背景螢光更低
• 信噪比增加，靈敏度更高
• 可選擇更多的報告器進行多重處理

材料

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