羅氏 PCR 試劑和 PCR 規程

• Roche常規和熱啟動PCR試劑選擇指南高保真、難解模板和長PCR擴增的Roche PCR試劑選擇指南
  
  
• FastStart™ Taq DNA Polymerase 及主混合物
• FastStart™ 高保真 PCR 系統
• Expand™ High Fidelity PCR System 和 Expand™ High Fidelity^PLUS PCR System
• Pwo SuperYield DNA Polymerase
• GC-RICH PCR System for Difficult Template PCR
• Expand™ Long Range, dNTPack
• 優化PCR的產品

 

Roche PCR 試劑常規和熱啟動 PCR 選擇指南

PCR 應用多工/測序
您選擇的酶：	Taq DNA Polymerase	FastStart™ Taq DNA Polymerase	FastStart™高保真 PCR 系統
經驗	一致性	特異性	準確性
顯子大小	高達 3 kb	高達 3 kb	高達 5 kb
特異性
Robustness
精確度對比。Taq	1倍	1倍	4倍
防止攜帶	是	是
單位/50 μL	1。25	2	2。5
分子克隆	TA克隆	TA克隆
酵素	Taq DNA   Polymerase,   5 U/μL Taq DNA聚合酶nbsp; 1 U/μL	快速啟動™ (FastStart™)Taq DNA聚合酶, 5 U/μL	FastStart™   High Fidelity   PCR System
Enzyme, GMP Grade	Taq DNA  ；聚合酶，  GMP級，  5 U/μL		<
dNTPack	Taq DNA  ；聚合酶, dNTPack, 5 U/μL Taq DNA聚合酶nbsp; dNTPack, 1 U/μL	快速啟動聚合酶(FastStart)FastStart™   Taq DNA   Polymerase,   dNTPack,   5 U/μL	FastStart™   Taq DNA   Polymerase,   dNTPack,   5 U/μL FastStart™   High Fidelity   PCR System, dNTPack 。
混合母液	PCR 母液	快速啟動™(FastStart™)  PCR Master

Roche PCR 試劑選擇指南，適用於高保真、難以模板和長時間 PCR 擴增

* 需要防止攜帶和 6 倍更高的保真度？選擇 Expand™ High FidelityPLUS PCR 系統。** 對於 20-35 kb 大小的擴增子，請選擇 Expand™ 20 kbPLUS PCR System。

高保真	您的選擇酶：	擴展™ 高保真 PCR系統	Pwo SuperYield DNA Polymerase	GC-RICH PCR System	Expand™ Long Range
經驗	穩健性	保真度	可靠度	多變性
Amplicon Size	高達 5 kb	高達 3 kb	高達 5 kb	5~25kb**
特異性
Robustness
精確度對比。Taq	3x	18x	3x	3x
防止遺傳	否	否	否
單位/50 μl	2。6	2.5	2	3。5
分子克隆	TA克隆	鈍端克隆	TA克隆優於鈍端克隆	TA克隆
Expand™ High   FidelityPLUS   PCR System	Pwo SuperYield DNA 聚合酶	GC-RICH PCR System。
dNTPack	擴展™高   保真度   PCR系統,  ；dNTPack 擴展™高   保真度PLUS PCR   System, dNTPack	Pwo SuperYield   DNA   聚合酶,   dNTPack	GC-RICH PCR   System,   dNTPack	Expand™   Long Range,   dNTPack
Master Mix	Pwo Master

尖端科學不應該為了經濟而妥協。自 PCR 技術問世以來，羅氏一直提供 PCR 試劑的黃金標準。我們先進的分離、純化和製造技術不僅能確保您獲得最清晰、最可靠的結果，還能提供方便且經濟實惠的產品，以符合任何實驗室的預算。

• 可靠性 -在批次與批次之間、試管與試管之間、實驗與實驗之間，都能達到您應得的結果。
• 效能 -結合優質的酵素與PCR等級的核苷酸，以方便的dNTP包裝，提高靈敏度與產量。
• 一致性 -使用只需添加引物和模板的混合母液，最大化實驗性能。

PCR 級核苷酸可確保最佳效能。

PCR 的成功在很大程度上取決於您對酵素和核苷酸的選擇。羅氏 PCR 酵素以方便的 dNTP 包裝提供，其中包括不含添加劑的鈉鹽核苷酸預混合溶液。這些經過功能測試的 PCR 級核苷酸是透過酵素合成製成，並經由獨特的程序純化，是提高 PCR 結果品質的理想助力。

• 純度 -根據化學合成核苷酸製劑的現行典型品質程序，選擇不含修正碱基、四磷酸鹽或焦磷酸鹽污染物的核苷酸，以提高您 PCR 的靈敏度。
• 穩定性 -使用以最佳 pH 值供應的 dNTPs，延長保存期限並提高反應穩定性，以達到最大產量。

Taq DNA Polymerase 和標準 PCR 協定

經濟實惠的 PCR 具有強大的擴增功能，對模板的要求極低。

Roche Taq DNA Polymerase 是在 GMP 條件下生產的，這種高度純化的酵素通過了多項嚴格的功能性和純度測試，確保每批產品都能得到可靠、一致的結果。如需其他資訊，請參閱我們的  標準 PCR 協議。

• 獲得可靠、可重複的結果 且批次與批次之間具有高度一致性
• 省去每個新批次的測試 - 我們為您做
• 結合dUTP納入與Uracil-DNA糖基化酶，以防止PCR交叉污染

圖 1. 批次與批次之間的一致性可確保結果的可重複性。測試了五個不同批次的 Taq DNA Polymerase 擴增 0.5 kb lambda DNA 片段的能力。每批接受測試的 Roche Taq DNA Polymerase 都能獲得可靠、一致的結果。

Taq DNA Polymerase, GMP Grade 屬於高效能、經驗證的擴大酵素系列，並採用經過評估的生產、品管及灌裝程序製造而成。

Amplicon Size	準確性 vs. Taq	分子克隆
高達 3 kb				1x	是	1.25	TA克隆

Product	SKU	Pack Size
Taq DNA Polymerase | ；酵素 + 緩衝液
5 U/μL	11 146 173 001	500 U 用於最多 1,000 個 20 μL 終容量的反應，每個反應含有 0.5 U Taq DNA Polymerase
	11 418 432 001	1,000 U (4 × 250 U)，用於最多 2,000 個最終容量為 20 μL 的反應，每個反應含有 0.5 Taq DNA Polymerase
	11 596 594 001	2,500 U (10 × 250 U)，用於最多 5,000 個最終容量為 20 μL 的反應，每個反應含有 0.5 U Taq DNA Polymerase
	11 435 094 001	5,000 U (20 × 250 U)，用於最多 10,000 個最終容量為 20 μL 的反應，每個反應含有 0.5 U Taq DNA Polymerase
1 U/μL	11 647 687 001	1,000 U (4 × 250 U)，用於最多 2,000 個最終容量為 20 μL 的反應，每個反應含有 0.5 U Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase, dNTPack | Enzyme + Buffer + dNTP Set
5 U/μL	04 728 866 001	100U用於最多200個最終容量為20 μL的反應，每個反應含有0.5 U Taq DNA Polymerase
	04 728 874 001	500 U (2 × 250 U)，用於最多 1,000 個最終容量為 20 μL 的反應，每個反應含有 0.5 U Taq DNA Polymerase
	04 728 882 001	1,000 U (4 × 250 U)，用於最多 2,000 個最終容量為 20 μL 的反應，每個反應含有 0.5 U Taq DNA Polymerase
	04 728 904 001	2,500 U (10 × 250 U)，用於最多5,000個最終容量為20 μL的反應，每個反應含有0.5 U Taq DNA Polymerase
	04 728 858 001	5,000 U (20 × 250 U)，用於最多 10,000 個最終容量為 20 μL 的反應，每個反應含有 0.5 U Taq DNA Polymerase
1 U/μL	04 738 225 001	250 U，用於最多 500 個最終容量為 20 μL 的反應，每個反應含有 0.5 U Taq DNA Polymerase
	04 738 241 001	1,000 U (4 × 250 U)，用於最多 2,000 個最終容量為 20 μL 的反應，每個反應含有 0.5 U Taq DNA Polymerase
PCR Master | Ready-to-use Formulation; Enzyme, Buffer, dNTPs
	11 636 103 001	1 個試劑盒最多可進行 200 個 PCR 反應，最終反應容量為 50 μL，每個反應包含 2.5 U Taq DNA Polymerase

FastStart™ Taq DNA Polymerase and Master Mix

選擇研究人員信賴的聚合酶，就像使用 qPCR 和 LightCycler^® Systems 一樣。

FastStart™ Taq DNA 聚合酶 是一種經化學改良的重組 Taq DNA 聚合酶的恒溫形式。

• 獲得更高的特異性、靈敏度和產率。熱啟動 PCR 可提高 PCR 性能，使 PCR 設定更加容易。
• 使用方便的機器人設定。完整的反應混合物在室溫下可穩定 24 小時。
• 防止 PCR 攜帶。 結合 dUTP 併合 Uracil-DNA Glycosylase 防止 PCR 交叉污染。

圖 4. 人紅細胞生成素基因在 3-300 ng cDNA 立即 (E0) 和室溫下反應設定 24 小時 (E24) 後的擴增。

Amplicon Size	準確性 vs. Taq	分子克隆
高達 3 kb				1x	是	2 µL	TA克隆

Product	SKU	Pack Size<
FastStart™ Taq DNA Polymerase | 酵素 + 緩衝液
5 U/μL<	12 032 929 001	500 U (2 × 250 U)，最多 250 個 50 μL 的反應。L final volume, each containing 2 U FastStart Taq DNA Polymerase
	12 032 937 001	1,000 U (4 × 250 U) for up to 500 reactions of 50 μL 的最終容量，每個反應包含 2 U FastStart Taq DNA Polymerase
	12 032 945 001	2,500 U (10 × 250 U)。
	12 032 945 001	12 032 945 001	12 032 953 001	FastStart™ Taq DNA Polymerase, dNTPack | Enzyme + Buffer + dNTP Set
5 U/μL	04 738 314 001	100 U，用於最多 50 μL 的 50 個反應。
	04 738 357 001	500 U (2 × 250 U)。	04 738 357 001	04 738 381 001	04 738 403 001<	2,500 U (10 × 250 U)，用於最多 1,250 個最終容量為 50 μL 的反應，每個反應含有 2 U FastStart Taq DNA Polymerase
	04 738 420 001	5,000 U (20 × 250 U)，用於最多 2,500 個 50 μL 終極容量的反應，每個反應含有 2 U FastStart Taq DNA Polymerase<
	FastStart™ PCR 母液 | 即用型配方；酵素、緩衝液、dNTP
		04 710 436 001	2 × 1.25 mL，用於最多 250 個最終反應容量為 20 μL 的反應
04 710 444 001		8 × 1.25 mL，最多可容納 1,000 個最終反應容量為 20 μL 的反應
04 710 452 001		10 × 5 mL，用於最多 5,000 個最終反應容量為 20 μL 的反應

FastStart™ High Fidelity PCR System

多工和測序 在複雜的端點 PCR 應用（如多工或測序）中，嚴格的熱啟動和更高的保真度是關鍵。選擇 FastStart™ High Fidelity PCR System 以更高的保真度進行複用和測序所需的高達 5 kb 的複雜熱啟動 PCR。與標準 Taq DNA 聚合酶和 FastStart™ Taq DNA 聚合酶相比，其準確度高達六倍。

• 以快速、高品質的結果達到優異的多工性能
• 體驗比 Taq 和 FastStart™ Taq DNA 聚合酶高六倍的保真度
• 在擴增困難模板時使用隨附的 PCR 添加劑 (DMSO)

圖 5. 18-plex (74 bp - 470 bp) PCR 的敏感性測試。將 18 組多重引物應用於不同濃度的人類基因組 DNA。

Amplicon Size	準確性 vs. Taq	分子克隆
高達 5 kb				6x	是	2.5	TA克隆

Product	SKU	Pack Size
FastStart™ High Fidelity PCR System | Enzyme + Buffer<
	03 553 400 001	500 U (2 × 250 U)，用於最多 200 個最終容量為 50 μL 的反應，每個反應包含 2.5 U FastStart Taq DNA Polymerase
	03 553 361 001	2,500 U (10 × 250 U)，用於最多 1,000 個最終容量為 50 μL 的反應，每個反應含有 2.5 U FastStart Taq DNA Polymerase
FastStart™ High Fidelity PCR System, dNTPack | Ready-to-use Formulation；酶，緩衝液，dNTPs
	04 738 284 001	125 U，用於最多 50 個最終容量為 50 μL 的反應，每個反應包含 2.5 U FastStart Taq DNA Polymerase
	04 738 292 001	500 U (2 × 250 U)，用於最多 200 個最終容量為 50 μL 的反應，每個反應含有 2.5 U FastStart

Expand™ High Fidelity PCR System 和 Expand™ High FidelityPLUS PCR System

Expand™ High Fidelity PCR 試劑 ；由 Taq DNA Polymerase 和具有校對活性的聚合酶混合組成，可進行強大的 PCR。選擇 Expand™ High Fidelity^PLUS PCR系統 進行高達5 kb的穩健PCR，並防止PCR攜帶。

檢測以前檢測不到的擴增产物，避免假陰性。

從少量模板 DNA 成功獲得 PCR 結果 。

 Expand™ High Fidelity^PLUS PCR System 是穩健的高保真應用的理想選擇，例如用放射性或非放射性修飾的核苷酸克隆和標記 DNA 片段。此外，結合 dUTP 與尿嘧啶-DNA 糖基化酵素，可防止 PCR 交叉污染。

圖 6. Expand™ High FidelityPlus PCR 系統與四種市售聚合酶混合物的比較。按照各製造商的建議條件，使用不同數量 (ng) 的人類基因組 DNA 來擴增組織纖維蛋白原活化素 (tPA) 基因的 4.8 kb 片段。Expand High FidelityPLUS PCR System 可以產生最佳的特異性、靈敏度和產量，即使只有 1 ng 的人類基因組 DNA 也不例外。

Supplier A: Taq DNA polymerase (deleted at N-terminus), a proofreading polymerase, and a hot start antibody的混合物。
供應商B和D： Taq DNA聚合酶和校對聚合酶的混合物。
供應商C： Taq DNA聚合酶、校對聚合酶和增強因子的混合物。

Amplicon Size	準確性 vs. Taq	分子克隆
高達 5 kb				3x	否*	2.6	TA克隆

Product	SKU	Pack Size
Expand™ High Fidelity PCR System | Enzyme + Buffer<
	11 732 641 001	100U用於最多40個最終容量為50 μL的反應，每個反應含有2.6 U 的混合酶
	11 732 650 001	500 U (2 × 250 U)，用于多达 200 个最终体积为 50 μL 的反应，每个反应含有 2.6 U 的混合酶
	11 759 078 001	2,500 U (10 × 250 U)，用於最多 1,000 個最終容量為 50 μL 的反應，每個反應含有 2.6 U 混合酶
Expand™ High Fidelity PCR, dNTPack | Enzyme + Buffer + dNTP Set
	04 738 250 001	100 U，用於最多 40 個最終容量為 50 μL 的反應，每個反應包含 2.6 U 混合酶
	04 738 268 001	500 U (2 × 250 U)，用於最多 200 個最終容量為 50 μL 的反應，每個反應含有 2.6 U 混合酶
	04 738 276 001	2,500 U (10 × 250 U)，用於最多 1,000 個最終容量為 50 μL 的反應，每個反應含有 2.6 U 混合酶
High Fidelity PCR Master | Ready-to-use Formulation; Enzyme, Buffer, dNTPs
	12 140 314 001	1個試劑盒可供最多500個最終反應容量為20 μL的反應使用

Product	SKU	包裝尺寸
Expand™ High FidelityPLUS PCR System | Enzyme + Buffer
	03 300 226 001	500 U (2 × 250 U)，最多 500 個 20 μL 的反應。	03 300 234 001	2,500U（10 × 250 U），用於最多 2,500 個 20 μL 試劑量的反應。
	擴展™ 高保真 ?PLUS PCR System, dNTPack | Enzyme + Buffer + dNTP Set
	04 743 725 001	04 743 733 001	500 U (2 × 250 U)，用於多達 500 個最終容量為 20 μL 的反應，每個反應含有 1 U 混合酶

Pwo SuperYield DNA Polymerase

在序列準確性非常重要而又不犧牲產量的應用中，需要高保真 PCR。使用 Pwo SuperYield DNA Polymerase 可獲得高產量的PCR產物，且具有一致的高保真性。與校對反向轉錄酶結合時，可選擇最高的保真度，並避免序列錯誤、碱基交換和框架移位，例如在 Transcriptor 高保真 cDNA 合成套件中。

• 實現出色的保真度和高產量。 與 Taq DNA 聚合酶相比，保真度高出 18 倍，且無需進行優化。
• 使用困難的模板獲得高效能。 GC-RICH 解決方案可擴增富含 GC 的 DNA。
• 減少克隆的工作步驟。 直接在 Pwo SuperYield PCR mix 中執行酵素消化。

圖 7. 提高 RT-PCR 的準確性。結合校對反轉錄酶 Transcriptor High Fidelity Reverse Transcriptase (Roche) 與校對聚合酶 Pwo SuperYield DNA Polymerase (Roche) 進行擴增。數據與常用的 M-MuLV 反轉錄酶和 Taq DNA 聚合酶比較。使用 454 測序系統進行反轉錄及 25 個 PCR 週期後測定錯誤率。羅氏酵素的錯誤率是四個獨立實驗的平均值，其中至少有 3.1 × 106 個碱基被測序。對於 M-MuLV 反轉錄酶和 Taq DNA 聚合酶，則測序了 4.5 × 106 個碱基。準確度以誤差率-1 表示。

Amplicon Size	準確性 vs. Taq	分子克隆
高達 3 kb				18x	否	2.5	鈍端克隆

Product	SKU	Pack Size
Pwo Super Yield DNA Polymerase | Enzyme + Buffer
	04 340 850 001	500 U (2 × 250 U)用於最多200個最終容量為50 μL的反應，每個反應含有2.5 U Pwo SuperYield DNA Polymerase
Pwo Super Yield DNA Polymerase, dNTPack | 酵素 + 緩衝液 + dNTP Set<
	04 743750 001	100 U，用於最多40個最終容量為50 μL的反應，每個反應包含2.5 U Pwo SuperYield DNA Polymerase
Pwo Master | 即用型配方；酶，緩衝液，dNTPs
	03 789 403 001	2.5 ml (10 × 250 μL)，用於最多 100 個最終反應容量為 50 μL 的反應，每個反應含有 2.5 U Pwo SuperYield DNA Polymerase

GC-RICH PCR System for Difficult Template PCR

選擇GC-RICH PCR System，它是校對聚合酶和Taq DNA聚合酶的混合物，可強化其他聚合酶或其他聚合酶和添加劑混合物難以或無法擴增的模板。混合聚合酶的增強處理能力與獨特的 GC-RICH Resolution Solution 相結合，可提供卓越的性能。

• Amplify difficult templates, including GC-rich targets and repetitive sequences
• Use the supplied PCR Grade Water and optimized reagents, including the GC-RICH Resolution Solution
• Amplify DNA fragments up to 5 kb

圖 8.使用 GC-RICH PCR 系統成功擴增富含 GC 的模板。 使用 GC-RICH PCR System 或 Expand High Fidelity PCR System 在人類 ApoE 基因內擴增 264 bp 範本 (74% GC 含量)。

結果： GC-RICH PCR 系統使用 GC-RICH Resolution Solution 擴增富含 GC 的片段，特異性高，產率高。

Amplicon Size	準確性 vs. Taq	分子克隆
Up to 5 kb				3x	no	2	TA 克隆優於鈍端克隆

Product	SKU	Pack Size
GC-RICH PCR System | Enzyme + Buff<
USB 3.0及PCI Express Gen 3.0 支持 - 技嘉7系列主板充分运用PCI Express Gen 3.0技术。	100 U for up to 50 reactions of 50 μL final volume, each containing 2 U enzyme blend<
GC-RICH PCR系統GC-RICH PCR System, dNTPack | Enzyme + Buffer + dNTP Set
	04 743 784 001	100 U，用於最多 50 個最終容量為 50 μL 的反應，每個反應含有 2 U 混合酶

Expand™ Long Range, dNTPack

長模板 PCR 的先驅公司 Roche 的下一代系統值得信賴。選擇 Expand™ Long Range dNTPack 可從基因組 DNA 穩定地擴增 5 至 25 kb 的 PCR 產品。擴增超過 20 kb 的片段時，請使用 Expand™ 20 kb^PLUS PCR System。

• 以高特異性、高產率和更高的保真度持續擴增高達 25 kb 的長模板 
• 以方便靈活的試劑盒節省時間和資源。使用一種緩衝液來處理所有片段大小，並使用隨附的 DMSO 和 MgCl₂  溶液來微調您的反應。
• 用於所有長模板應用，僅獲得所需片段的高產率。
• 訂購具有成本效益的 dNTP 包 其中還包括預混合的 PCR 級核苷酸。

圖 9. 使用 Expand™ Long Range、dNTPack 擴增各種基因組模板

Amplicon Size	準確性 vs. Taq	分子克隆
5 至 25 kb				3x	否	3.5	TA克隆

Product	SKU	Pack Size
Expand™ Long Range, dNTPack | ；酵素 + 緩衝液 + dNTP 組合
	04 829 034 001	175 U，用於最多125個20 μL最終容量的反應，每個反應含有1.4 U 的混合酶
	04 829 042 001	700 U，用於最多 500 個最終容量為 20 μL 的反應，每個含有 1.4 U 的混合酶
	04 829 069 001	3,500 U (5 × 700 U)，用于多达 2,500 个最终体积为 20 μL 的反应，每个反应含有 1.4 U 混合酶

* 擴增子大小為 20-35 kb：選擇 Expand 20 kbPLUS PCR System。

Product	SKU	Pack Size
Expand™ 20 kbPLUS PCR System | 酵素 + 緩衝液
	11 811 002 001	200U用於最多40個50 μL最終容量的反應，每個反應含有5 U混合酶

用於 PCR 優化的產品

Product	SKU	Pack Size
PCR Optimization Kit	11 636 138 001	1 kit for up to 100 one-step or up to 50 two-step optimization assays of 100 μL final reaction volume
Uracil-DNA Glycosylase	11 444 646 001	100 U
烏拉昔爾-DNA糖基化酶，熱穩定	11 775 367 001	100 U
	11 775 375 001	500 U
T4基因32蛋白	10 972 983 001	100 µg
	10 972 991 001	500 µg
11 699 121 001	2 x 2 mL (2 × 1 mL 每種溶液)
不含 MgCl 的 PCR 緩衝液211 699 105 001	3 × 1 mL
11 699 113 001	3 × 1 mL
水，PCR級	03 315 843 001	03 315 932 001	03 315 959 001<	條裝 PCR 管及管帽<	11 667 009 001	125 條 (8 管/條)