shRNA 製程與圖表

什麼是shRNA？

向量式短髮夾 RNA (shRNA) 是一種 RNA 干擾 (RNAi) 技術，可用來研究未知基因的功能。RNAi 的工作原理是透過沉默基因功能來檢測受影響的過程。它透過鑑定基因與基因、基因與蛋白質之間的互作關係，用於生物通路的特性分析。It also helps advance our understanding of the molecular mechanisms underlying disease states

How shRNA Works

在實驗上，RNAi 可以使用合成的小干擾 RNA (siRNA) 二聚體來誘導，或使用從質粒向量或經慢病毒介導整合的基因組 DNA 表達的 shRNA 來誘導。shRNA 可透過質粒載體的脂質轉染或慢病毒顆粒的轉導傳遞至細胞。shRNA 序列被編碼在遞送的序列中，而 shRNA 在細胞核中的表達是由 RNA Pol III 促動子（包括 U6 或 H1）或 RNA Pol II 促動子（如 CMV）所驅動。

shRNA 會被內源的 Dicer 酵素所裂解，產生所需的 siRNA 二聚體，進而與 RISC 結合。當 shRNA 使用慢病毒載體遞送時，編碼 shRNA 的序列會整合到基因組中，而基因敲除的效果會傳給子細胞，讓基因持續沉默。

RNAi也可以由19-21個碱基對、帶有2個懸空核苷酸的合成siRNA誘導。一旦進入細胞，它們會直接與 RISC 結合。

shRNA 流程圖

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