質粒 DNA 的反轉染

自動化應用於許多領域，以減少人工處理造成的變異，並在高通量檢測中獲得可重複的結果。高通量應用，例如基因敲除研究或靶點篩選，通常包括細胞轉染。在本研究中，測試了 X-tremeGENEHP 和 X-tremeGENE9 轉染試劑 (Roche) 與自動化轉染工作站 Biomek FX 的相容性。

圖 1. 分析自動化工作流程中的轉染效率。轉染後 24 和 48 小時測量效率，並以螢光細胞覆蓋面積與細胞覆蓋總面積的比率計算。 (A)使用 X-tremeGENEHP Reagent 轉染；(B)使用 X-tremeGENE9 Reagent 轉染。(C) 俯視圖顯示螢光，以及使用 X-tremeGENEHP Reagent 的自動化工作流程的重複性 (16 次重複)。

Automated Transfection - 使用 Biomek FX (Beckman Coulter) 自動工作站進行細胞播種和轉染。為了轉染，X-tremeGENE HP 和 X-tremeGENE 9 試劑 (Roche) 被預先稀釋在 Opti-MEM 中（稀釋因子：X-tremeGENE HP 試劑為 1:50，X-tremeGENE 9 試劑為 1:33）。EGFP-PC3.1 質粒在 Opti-MEM 中預先稀釋（1 μg/100 μL）。將等量的質粒稀釋液移入稀釋的轉染試劑中，混勻後孵育 30 min，形成轉染複合物。

Cell Culture and Reverse Transfection - HeLa cells (ATCC^® CCL-2™) were cultured in MEM, with the MEM with the CCL-2™.)在+37 °C、5% CO₂ 濕潤的氣氛下於T75培養瓶中以含補充劑的MEM培養至約70%的融合度。在轉染前不久用胰蛋白酶法收穫細胞，洗淨並重悬於新鮮培養基（1.2x105 cells/mL）中。

結果

轉染複合物的形成、細胞播種和轉染均使用自動工作站在 96 孔格式中成功進行。

轉染效率直接取決於轉染複合物的添加量。

我們發現轉染效率直接取決於轉染複合物的添加量。正如預期的那樣，複合物添加量越高，轉染效率越高，直到達到高原階段（圖 1）。

X-tremeGENE HP 和 9 轉染試劑與自動轉染方法完全兼容，並顯示出很高的重現性 (圖 1)。