常見的細胞培養問題：沉澱物

文化中的沉澱物：概述

在排除污染的情況下，細胞培養基中的渾濁通常是由金屬、蛋白質和其他培養基成分的沉澱造成的。沉澱物可能對細胞健康有害，因為它們可能通過螯合等過程去除營養物和其他理想成分，從而改變培養基成分。沉澱物在顯微鏡下也可視為人工物質，因此可能會干擾依賴影像的檢測。

Purposeful precipitaton. 儘管沉澱物在細胞培養中通常是不可取的，但沉澱可被利用作為上清液中蛋白質的純化策略。例如，硫酸銨沉澱可用於從雜交瘤上清液或血清中純化抗體，此技術有時被稱為 「鹽析」。

沉澱的原因

• 溫度變化： 溫度是細胞培養中導致沉澱的主要原因之一。高分子量的血漿蛋白在暴露於極端溫度變化時，會從溶液中脫落。熱失活和冷凍/解凍循環可促進蛋白質變性和沉澱。
   
• 失水引起的濃度變化： 如果讓培養基蒸发，培養基成分（包括鹽分）的濃度會增加。晶體沉澱物可能特別容易在培養基表面形成。
   
• 鈣鹽： 當製備無血清媒體，成分的添加順序可能會導致不溶性分子的形成。鈣鹽尤其容易沉澱。例如，CaCl₂ 和 MgSO₄ 在溶液中會反應形成 CaSO₄ 結晶。
   
• 金屬補充劑： 銅、鐵和鋅金屬是細胞生長所必需的，也是無血清培養基的重要補充劑。缺乏其他血清成分會導致這些金屬在培養物中沉澱，為細胞創造有毒的環境。在氧化條件下，銅和鋅更容易沉澱。
   
• 污染： 培養物混濁可能是由於細菌或真菌污染（閱讀更多）。

排除細胞培養過程中的沉澱物

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Cause of Precipitation	解決方案
溫度	請參閱製造商的指引，以獲得最佳的儲存和處理培養基。避免重複冷凍/解凍循環。
鈣鹽	將 CaCl2 分別溶解於去離子水中，然後再逐次加入其他培養基成分。
濕度	確保培養瓶和平板沒有蒸發。
其他金屬	加入鐵結合蛋白轉铁蛋白可以防止培養物中的鐵沉澱。
污染	丟棄受污染的細胞並消毒培養罩。

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