細胞結塊疑難排解

細胞結塊：概述

懸浮液中的細胞可能會因各種原因而彼此吸附並形成結塊。細胞結塊最常見的原因是細胞裂解後，培養液中存在游離 DNA 和細胞碎片。DNA 的黏性會使細胞和其他碎片聚集成大團塊。以下是造成細胞裂解及 DNA 釋出到培養基中的一些原因。

• 過度消化：過度使用蛋白分解酵素（如常用於細胞脫離的胰蛋白酶）處理會造成細胞結塊
• 環境壓力：機械力、重複的冷凍/解凍循環和其他環境應力可加速細胞死亡，其早期症狀可能是細胞與細胞之間的黏附。
• 組織分解：透過化學、機械或酵素方案從原生組織製備單細胞懸液，可能會導致某些細胞破裂。 膠原蛋白酶 從組織製作單細胞懸液時，通常需要膠原蛋白酶來消化細胞外基質。 查看解離劑這裡。
• 過度生長：當細胞達到匯合時，細胞裂解產生的細胞碎片和游離 DNA 會過度堆積。

疑難排解

細胞結塊會減少獲得關鍵營養的機會，因此會妨礙細胞的整體生長。此外，細胞結塊還會影響需要乾淨製備單個細胞的下游檢測（例如流式細胞儀）。根據細胞結塊的根本原因，我們在下表中提出了預防的解決方案。

Cause of clumping	Solution
細胞裂解及DNA釋放	DNase I 可在組織分解及常規細胞培養過程中使用，以防止各種類型的細胞結塊。注意：DNase I 在二價離子 (Mg2+、Ca2+) 的存在下具有最大的活性
二價陽離子	螯合劑如 EDTA 可用於去除細胞培養基中的鈣。 不含血清、Ca2+/Mg2+的平衡鹽溶液 也可使用。
細胞密度	請參考 細胞系文獻 或公佈的特性，以了解通過前的建議細胞密度。
處理	小心處理細胞，造粒時使用適當的離心機設定。
支原体污染	丢弃污染的细胞，消毒培养罩和细胞培养箱。 Follow good laboratory practices to avoid contamination.

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Accutase	Trypsin	DNAse I <
Collagenase	Dissociation Media	Ca2+, Mg2+-free Media<
Trypsin-EDTA Solution	胰蛋白酶-EDTA 溶液。Benzonase Nuclease	Look-out Mycoplasma Detection Kit