Millicell^® 的 ECM 塗層協議

在膜和塑料表面塗上細胞外基質 (ECM) 可促進細胞附著和單層形成。我們開發了四種在 Millicell^®-CM 插片上使用 ECMs 的方案。它們也適用於共培殖實驗中，在塑膠飼料盤上培殖細胞。

膠原蛋白 1 型塗層

材料

• Millicell^®插入物和板。
• 70%乙醇
• 大鼠尾膠原蛋白，1 型，約 3 mg/mL（Millipore cat.no. 08-115）
• 無菌移液管注射器和吸頭

註：也可使用在 0.01 N HCl 或醋酸中稀釋的適當濃度的替代膠原蛋白來源（I 型）。

方法

1. 以 1:4 的比例將膠原蛋白稀釋在 70% 的乙醇中（1 份膠原蛋白和 3 份 70% 的乙醇），渦旋直到膠原蛋白被溶解。
2. 收集適當數量的 Millicell^® 插片或平板。
3. 使用無菌移液注射器，將適量的膠原蛋白/乙醇混合物加入到每個孔中。
4. 輕輕搖動細胞培養板，直到膠原蛋白/乙醇混合物均勻地覆蓋在插入物的內部。將細胞培養板蓋敞開，讓空氣流動，防止冷凝。注意：雖然乾燥通常需要 3 小時到一夜的時間，但建議過夜乾燥。
5. 以適當的細胞密度（例如 MDCK 細胞：約 5×10⁴ 至 5×10⁵ cells/cm²）接種 Millicell^® 插片。

塗層 Millicell^® 裝置的體積

* 可在任何 Millicell® 膜上使用 *Matrigel 是 Becton, Dickinson and Company 的註冊商標

(24孔)	(12孔)	(MIllicell 24)	(MIllicell 96)
Collagen (Collagen/Ethanol mix)	50 µL	150 µL<	400 µL	100 µL	25 µL
Fibronectin* (Fibronectin/DMEM mix)	100 µL	300 µL	700 µL	200 µL	50 µL
Laminin* (Laminin/DMEM mix)	100 µL	300 µL	700 µL	200 µL	50 µL
Matrigel* (Matrigel/H2O solution)	100 µL<	100微升	300微升	700微升	200微升	50微升

纖維連接素塗層

材料

• Millicell^®插入物和平板。
• 無菌移液管注射器和吸頭

人纖維連接素，1 mg/mL（目錄編號：08-102）重組。

方法

1. 在無血清 DMEM 中以 1:10 稀釋纖維連接素（1 份纖維連接素加入 9 份 DMEM），攪拌至纖維連接素溶解。
2. 收集適當數量的 Millicell^® 插片或平板。
3. 使用無菌移液注射器，向每個孔中加入適當容量的纖維連接素/DMEM 混合物。
4. 輕輕搖動細胞培養板，直到纖維連接素/DMEM混合物均勻地覆蓋在Millicell^®-CM插入物上。將細胞培養板蓋敞開，讓空氣流動，防止冷凝。註：雖然乾燥通常需要 3 小時，但建議乾燥過夜
5. 在 Millicell^® 插入適當密度的細胞（例如 MDCK 細胞：約 5×10⁴ 至 5×10⁵ cells/cm²）。

層析蛋白塗層

材料

• Millicell^®插入物和平板。
• 無菌移液管注射器和吸頭

層析蛋白，1 mg/mL。

方法

1. 在 DMEM 中以 1:10 稀釋 Laminin（1 份 Laminin 加入 9 份 DMEM），渦旋直到 Laminin 溶解。
2. 收集適當數量的 Millicell^® 插片或平板。
3. 使用無菌移液注射器，向每個孔中加入適當容量的片蛋白/DMEM混合物。
4. 輕輕搖動細胞培養板，直到片蛋白/DMEM混合物均勻地覆蓋在Millicell^®插片上。將細胞培養板蓋子打開，讓空氣流動，防止冷凝。注意：雖然乾燥通常需要 3 小時至一夜，但建議過夜乾燥。
5. 以適當的細胞密度（例如 MDCK 細胞：約 5×10⁴ 至 5×10⁵ cells/cm²）種入 Millicell^® 插片。

Matrigel塗層

材料

• Millicell^®插入物和平板。
• 無菌移液管注射器和吸頭

方法

1. 按照製造商的說明稀釋 Matrigel。
2. 收集適當數量的 Millicell^® 插片或平板。
3. 使用無菌移液注射器，將適量的 Matrigel 混合物加入每個孔中。
4. 輕輕搖動細胞培養板，直到 Matrigel 溶液均勻地覆蓋在 Millicell^® 插片上。將細胞培養板蓋敞開，讓空氣流動，防止冷凝。注意：雖然乾燥通常需要 3 小時到一夜的時間，但建議過夜乾燥。
5. 使用適當的細胞密度（例如 MDCK 細胞：約 5×10⁴ 至 5×10⁵ cells/cm²）種植 Millicell^®-CM 插片。