用於細胞培養的層壓素塗層協議

Laminin是細胞外基質多域三聚糖蛋白，是基底層的主要非膠原成分，支持黏附、增殖和分化。Laminin 由 A、B1 和 B2 兩條鏈組成，並透過許多二硫鍵連結。Laminin 有助於上皮細胞、血管內皮細胞、神經細胞、肌肉細胞和肝細胞等多種細胞類型的生長和分化。細胞培養的最佳濃度取決於細胞類型和特定應用。

閱讀

• 細胞培養的 Laminin 塗佈程序
• 用層壓素塗層表面時的常見問題

使用 Laminin 塗覆表面的重要注意事項

• 確保細胞健康且數量充足。
• 解凍後的未使用產品可按工作容量儲存於 -20 °C
• 表面覆蓋濃度可能因培養的細胞而異。建議進行方案優化，以確定細胞的最佳覆蓋濃度。建議濃度列於表 1。
• 塗佈後請勿過度乾燥培養板/蓋玻片，因為這會破壞層壓蛋白的結構，影響細胞的附著。
• 方案中的所有步驟都必須在無菌條件下進行。

用於細胞培養的層壓素塗層方案

1. 將層壓素在 2 - 8 °C 解凍；避免快速解凍以防止凝膠形成。
2. 在平衡鹽溶液中稀釋至所需濃度。溶液濃度取決於應用。典型的儲備濃度為 0.01%。
3. 以最小的容量覆蓋培養物表面。
4. 覆蓋整個區域後，移除多餘溶液。
5. 在引入細胞和培養基之前，至少晾乾 45 分鐘。

Laminin Coating Protocol for Neurospheres

1. 用 poly-L-lysine （Product No.P7280），濃度為 100 μg/mL。
2. 在室溫下培養 30 分鐘以上。
3. 蓋玻片用無菌水洗淨並晾乾。
4. 蓋玻片可在室溫下保存至準備使用（最多 1 個月）。
   然後在蓋玻片上塗上 30 - 50 μL 已加熱的層粘蛋白（50 μg/mL）。
5. 在加濕的 37 °C、5% CO₂ 培養箱中培養過夜，或在 37 °C下培養 30 分鐘。
6. 除去多餘的層粘蛋白，用 PBS 漂洗兩次。或者，用DME（50 μL）清洗兩次。
7. 根據需要將細胞加入蓋玻片/玻片並進行培養。

另外，也可以使用即用型的聚D-赖氨酸和層粘蛋白溶液來處理神經幹細胞。

表 1. 細胞附著的層壓蛋白

Product No.	Description	Coating Conc.	稀釋於
L2020	Laminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane	1-2 μg/cm2	L4544。	1-2 μg/cm2	11243217001	2-5 μg/cm2	L6274<	1-2 μg/cm2	無菌平衡鹽溶液
CC095-M	層疊蛋白，小鼠純化	2 μg/cm2	基本培養基 (不含血清)
CC145	Rat Laminin-5	1 μg/cm2	SCR127	13-15 μg/cm2	AG56P	1-2微克/厘米2	127-2.5	Poly-D-Lysine &; Laminin (2.5 mL)	0.25 mL/cm2	即用型
ECM103		即用型

使用層析蛋白塗層表面時常見的問題

哪種 ECM 蛋白質最適合我的細胞？

層黏蛋白和纖維連結素是廣泛使用的細胞外基質 (ECM) 蛋白；然而，為了獲得最佳效果，應透過實驗確定每個細胞系的理想 ECM。幹細胞在不同的分化階段，表面會表達不同的整合素。ECM 蛋白的選擇取決於您所研究的分化階段。

層疊蛋白產品的純度如何？

我們不確定層疊蛋白溶液的純度。進行 SDS-PAGE 凝膠分析，其圖案（三條帶）與過去的批次相當，以確保品質一致。

稀釋層壓素的最佳溶劑是什麼？

表 1 提供了與稀釋層壓蛋白相容的溶劑。

層粘蛋白可以重複使用嗎？

不建議重複使用層粘蛋白，因為層粘蛋白的無菌性、濃度和結構會發生變化。稀釋後未使用的層粘蛋白可在 2 - 8 °C 下保存 1 周。只要密封良好以防止污染和/或乾燥，覆有層壓蛋白的平板可在 2 - 8 °C 下保存 4 周。如果塗層材料表面出現變色或網狀形成，請勿使用本產品。

塗層時層壓蛋白的最佳濃度是多少？

表 1 建議了我們的層壓蛋白的塗層濃度。為獲得最佳效果，請針對您的特定細胞優化濃度。

研究神經分化的最佳 ECM 蛋白是什麼？

Laminin 或 fibronectin 與poly-L-lysine能很好地支持體外神經分化。有關誘導神經分化的詳細步驟，請參閱協議。