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Merck

奈米超濾

奈米粒子的純化和製造

奈米尺寸的微粒 (NPs) 已經發展成為生物影像、生物感應、標靶給藥和治療劑控釋的重要系統。在奈米材料製造過程中,奈米粒子的有效收集與製備至關重要。超濾 (UF) 已經廣泛用於合成後納米粒子的製備和純化(圖 1)。歷史上,過濾是使用加壓超濾裝置 (pUF) 進行的。離心超濾 (cUF) 技術的引入使納米粒子的製備和純化可以使用更小的體積。

超濾在奈米粒子製備和淨化中的應用。

圖 1.超濾在奈米粒子製備和淨化中的應用。

奈米顆粒可以用有機或無機材料、聚合物和金屬製成。2 磁性納米微粒、量子點、金屬納米微粒、矽納米微粒和聚合物納米微粒具有重要的生物醫學價值。3 許多納米微粒在製造後不能直接使用。水基配方可能含有未結合的藥物,需要去除。裂解液、體液、血清、緩衝液、媒質和其他試劑中的生物分子、化學物質和其他污染物可能需要進一步分離。有些會對周圍的生物環境造成有害影響。3 濃縮、富集、清洗和純化奈米粒子的可靠方法是必要的。

超滤技术在纳米粒子分离、纯化和浓缩中的应用

离心超滤装置可用于根据尺寸纯化、洗涤和浓缩纳米粒子。Amicon® Ultra和Centricon® Plus離心式超濾裝置,以及可同時進行清洗和濃縮的Amicon® Pro純化系統,可用於以下用途:

  • 奈米粒子分離與純化
  • 奈米粒子濃縮

對於較大容量樣品的壓力超濾 (pUF),Amicon® 攪拌池可與適當的 Ultracel® 過濾盤膜結合使用。Amicon® stirred cells 提供了一種溫和的超濾方法。

經過初級過濾後,納米粒子可進一步離心進行清洗和緩衝液交換,或重新濃縮。

納米粒子應用的膜選擇

超濾過程中分子的分離和濃縮是基於尺寸排阻。絕大多數生物分子的分子量都小於 500,000 Da,而奈米顆粒正好符合此類型。Amicon® Ultra離心式超濾單元、Centricon® Plus離心式超濾單元適用於較大容量,而Amicon® ;用於同時洗滌和濃縮的 Pro 純化系統,其過濾膜具有指定的標稱分子量限制 (NMWL),表示可截留 90% 微粒的粒度截斷點。這些過濾系統的膜 NMWL 分別為 3,000、10,000、30,000、50,000 和 100,000Da。為特定納米粒子尺寸和應用選擇合適的膜孔徑可能會引起混淆,已發表文章的調查(圖 2)可證明這一點。

按奈米粒子類型比較已公佈的膜尺寸。

圖 2.按納米粒子類型比較已公佈的膜尺寸。應根據納米粒子大小和應用(如從複合樣本中純化、濃縮、緩衝物交換、脫鹽)來選擇膜孔大小。

選擇超濾方法和膜孔徑時要考慮的因素:

  1. 奈米粒子大小:尺寸可以從公佈的資料來源估算,或者通過顯微鏡、激光衍射和動態光散射等測量技術估算。
  2. 溶液中主要分離目標的尺寸:蛋白質、抗體、藥物、化學品和其他需要分離的顆粒的大小將影響膜尺寸的選擇:處理量從≤0.5 mL 到 70 mL 都與離心超濾 (cUF) 裝置相容。

要保留納米粒子,濾膜的分子量截止值需要比納米粒子小(比納米粒子的分子量小約 2 倍),但又要大到足以允許較小的成分過濾。

表 1.根據奈米粒子尺寸選擇超濾膜 NMWL。

結論

離心超濾 (cUF) 和壓力超濾 (pUF) 在奈米粒子的純化和製備中扮演著重要的角色。納米粒子超濾的應用包括分離、濃縮、緩衝液交換、藥物監測,以及去除納米粒子製劑中的染料、酵素和未結合成分。許多著作都提到 Amicon®  和 Centricon® 離心式超濾裝置,以及用於壓力超濾的 Amicon® 攪拌池在奈米粒子和大分子純化和濃縮中的效用。由於雜質可能是離子、分子或微粒,因此最佳過濾器的選擇對產量、重複性結果和濾液品質有重大影響。Amicon® and Centricon® filter units contain an Ultracel® regenerated cellulose filter membrane, whose complex structure removes impurity from a sample that may affect critical biological and chemical determinations, downstream analysis, and assay performance.超濾技術可執行實驗室規模奈米粒子製備的分離、淨化及濃縮步驟。離心超濾 (cUF) 和壓力超濾 (pUF) 過程都提供了快速、簡單且有效的方法,將奈米材料從較小的成分和進入濾液的流體中分離出來。物理成分、尺寸和形狀是過濾器選擇時需要考慮的重要屬性。Amicon® 的產品組合提供了一系列用於奈米粒子淨化和生產的超濾膜裝置。

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參考資料

1.
Fang RH, Aryal S, Hu CJ, Zhang L. 2010. Quick Synthesis of Lipid?Polymer Hybrid Nanoparticles with Low Polydispersity Using a Single-Step Sonication Method. Langmuir. 26(22):16958-16962. https://doi.org/10.1021/la103576a
2.
Reddy LH, Arias JL, Nicolas J, Couvreur P. 2012. Magnetic Nanoparticles: Design and Characterization, Toxicity and Biocompatibility, Pharmaceutical and Biomedical Applications. Chem. Rev.. 112(11):5818-5878. https://doi.org/10.1021/cr300068p
3.
Weingart J, Vabbilisetty P, Sun X. 2013. Membrane mimetic surface functionalization of nanoparticles: Methods and applications. Advances in Colloid and Interface Science. 197-19868-84. https://doi.org/10.1016/j.cis.2013.04.003
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