使用 Centricon^® Plus-70 離心過濾裝置進行大容量濃縮

大容量離心過濾裝置是攪拌池超濾裝置的方便替代品，可從大量溶液中純化蛋白質。攪拌池過濾溫和、效率高，而且具有可拆卸的膜，具有最大的靈活性。然而，離心式超濾器也有自己的優點：

• 設備已預先組裝好，可立即使用
• 可處理 15 - 65 mL 的容量；
• 旋轉時間快 (幾分鐘)
• 無需重新填充儲存庫 (減少污染風險)<

以下方案是一個示例，展示了如何使用 Centricon^® Plus-70 離心過濾裝置 來純化和濃縮由人類高親和 IgE 受體的α和γ亞單體組成的融合蛋白。純化的α-γ融合蛋白再與Sepharose^® (GE)珠子結合，製成分離人類IgE抗體的親和柱。(Note: protocol courtesy of GKT School of Biomedical Sciences, London.)

方法

1. 將高親和IgE受體的α和γ亞單體組成轉換到小鼠骨髓瘤細胞株NS0中，並在蛋白質G柱上純化分泌的融合蛋白。
2. 使用 Centricon^® Plus-70離心過濾裝置 在3000 x g的擺動桶轉子中，將洗離的蛋白質從500-1000 mL濃縮到5-10 mL，時間為10分鐘（每個過濾單位60 mL）。
3. 在組織培養級無疊氮化鈉 PBS 中也使用相同的單位進行緩衝液交換。
4. 濃縮的樣品在無菌條件下使用 0.2 μm 孔徑的過濾器進行過濾消毒。

結果

根據分光光度分析，使用Centricon^® Plus-70裝置回收了18.8 mg/L的alpha-gamma融合蛋白（數據未顯示）。HPLC痕量分析揭示了人類Fc_εRI的α-γ融合成分的輪廓（見下圖）。

人類 FcɛRI 的 alpha-gamma 融合成分的 HPLC 圖譜

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