使用 StrepTactin 高效 Sepharose^® 進行純化

StrepTactin 是一種特別設計的鏈霉親和素配體。Strep-tag II與固定化配體的結合力比與鏈霉親和素的結合力高出近100倍，因此StrepTactin Sepharose® 高效能是純化 Strep-tag II的理想選擇。sup>® High Performance 是純化 Strep-tag II 蛋白的理想選擇。

Sepharose^® High Performance 矩陣的小珠尺寸（平均 34 µm）可產生高分辨率分離、銳利的峰值以及濃縮的純化目標蛋白質。  StrepTactin Sepharose^® High Performance 可與多種添加劑相容，可耐受所有常用的水性緩衝液，並可使用 0.5 M NaOH 快速輕鬆地再生。請參閱 附錄 4 (StrepTactin Sepharose^® High Performance products 的特性)，以取得更多關於培養基特性的資訊。

柱包裝

請參閱隨產品提供的說明，或參閱 Appendix 6 (Column packing and preparation) for general guidelines for column packing.

样品制备

根据结合缓冲液的成分调整样品（见下文）。例如，使用結合緩衝液稀釋樣品，或使用脫鹽柱進行緩衝液交換，請參閱 

緩衝液製備

結合緩衝液：	100 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、1 mM EDTA、pH 8 或 PBS (20 mM 磷酸钠、280 mM NaCl、6 mM 氯化钾)、pH 7.4
2.5 mM desthiobiotin in binding buffer
Regeneration buffer:	0.5 M NaOH or 1 mM HABA (2-[4'-hydroxy-benzeneazo] benzoic acid) in binding buffer

請參閱 Appendix 4 (Characteristics of StrepTactin Sepharose^® High Performance products) 以瞭解有關再生培養基的詳細資訊。

用於緩衝液製備的水和化學品應該是高純度的。使用緩衝液前，請使用 0.22 µm 或 0.45 µm 過濾器過濾。

推薦流速

推薦流速為 150 cm/h。

1. 移除塞子，將色谱柱連接到系統。
2. 如果色谱柱存放在20%乙醇中，用至少5柱体积的蒸馏水或结合缓冲液冲洗乙醇，流速为50-100 cm/h。
3. 用至少5柱体积的结合缓冲液平衡色谱柱。
4. 使用預處理的樣品。
5. 使用 5 到 10 柱容量的結合緩衝液清洗，或直到洗出液中沒有任何物質出現。
6. 用約 6 個柱容量的洗脫緩衝液進行洗脫，洗脫的餾分可使用預先包裝的脫鹽柱進行緩衝液交換，請參閱 第 11 章 (脫鹽/緩衝交換和濃縮)。
7. 洗脱后，按照附录 4（StrepTactin Sepharose^® 高性能产品的特性）中描述的步骤再生色谱柱。

升級通常通過保持床層高度和流速 (cm/h) 不變，同時增加床層直徑和容積流速 (mL/min) 來實現。請參閱 Figure 7.4 (Purification using StrepTrap HP 1 mL and 5 mL) 為使用此培養基擴大規模的範例。

將 StrepTactin Sepharose^® High Performance 儲存在 20% 乙醇中，溫度為 2 °C 至 8 °C。儲存後，使用前請先用結合緩衝液平衡。