抗體親和層析的脫鹽和緩衝液交換

一般注意事項

在實驗室規模下進行脫鹽是一種行之有效、簡單且快速的方法，可在單一步驟中快速去除低分子量雜質，同時將樣品轉移到所需的緩衝液中。

Cytiva 提供一系列預先包裝的層析柱和 96 孔過濾板，可手動使用、與層析系統一起使用或在高通量應用中使用（表 2.8）。這些產品含有Sephadex™ G-25，一種尺寸排阻層析（SEC，也稱為凝膠層析）介質，可有效去除分子量為5000的抗體中的低分子量物質。

在需要時，在純化步驟之前和/或之間使用脫鹽/緩衝物交換。

必要時，在純化步驟之前和/或之間使用脫鹽/緩衝器交換。請記住，每個額外的步驟都可能降低產率，而且脫鹽通常會稀釋樣品（離心方案不會稀釋樣品）。

從分子量為5000的蛋白質中去除鹽和其他低分子化合物。

表 2.8. 脫鹽/緩衝交換柱選擇指南

柱和 96 孔板	中	加載容量(mL)	稀釋容量(mL)	稀釋因子	操作
HiTrap®	Sephadex™ G-25 Superfine	0.25	1.0	4	注射器/泵/層析系統
		0.5	1.5	3	針筒/泵/色譜系統
		1.0	2.0	2	針筒/泵/層析系統
		1.5（最大值）	2.0	1。3	注射器/泵/層析系統
2× HiTrap® 脫鹽	Sephadex™ G-25 Superfine	3.0 (最大值)	4.0 至 5.0	1.3 至 1.7	注射器/泵/層析系統
3× HiTrap® 脫鹽	Sephadex™ G-25 Superfine	4.5 (最大值)	6.0 至 7.0	1.3 至 1.7	注射器/泵/層析系統
HiPrep™ 26/10 除鹽	Sephadex™ G-25 Fine	10	10 to 15	1.0 至 1.5	泵/層析系統
		15 (max.)	15至20	1.0至1.3	泵／層析系統
2x HiPrep™ 26/10 除鹽	Sephadex™ G-25 Fine	30（最多。)	30 至 40	1.0 至 1.3	泵/層析系統
3x HiPrep™ 26/10 除鹽	Sephadex™ G-25 Fine	45 (max.)	45至55	1.0 to 1.2	泵/層析系統
4x HiPrep™ 26/10 Desalting	Sephadex™ G-25 Fine	60 (max.)	60至70	1.0至1.2	泵/層析系統
PD SpinTrap™ G-25	Sephadex™ G-25 Medium	0.1 to 0.18	0.1 to 0.18	無稀釋	離心機
PD MultiTrap™ G-25	Sephadex™ G-25 Medium	0.07 to 0.13	0.07至0.13	無稀釋	離心機
PD MiniTrap™ G-25	Sephadex™ G-25 Medium	0.2 to 0.5 0.1 to 0.5	0.1 to 0.5 1.0	不稀釋 2	離心 重力FLow
PD MidiTrap™ G-25	Sephadex™ G-25 Medium	0.5 to 1.0 0.1 to 0.5	0.5 to 1.0 1.5	無稀釋 1.5	離心 重力流
PD-10 脫盐柱	Sephadex™ G-25 Medium	1.0 to 2.5 0.1 to 0.5	1.0 to 2.5 3.5	無稀釋 1 to 1.5	離心機 重力流

可處理的樣品量可達脫鹽柱總容量的 30%。分離速度快、容量大，即使是相對較大的樣品容量，也能在實驗室中快速、高效地處理。在使用普通水性緩衝液時，只要抗體濃度不超過約 70 mg/mL，且抗體在使用濃度下穩定可溶，則樣品濃度不會影響分離效果。

當脫鹽是第一個層析步驟時，樣品應先進行離心和/或過濾；建議採用離心和/或過濾。

如果需要揮發性緩衝液，請使用 100 mM 醋酸銨或 100 mM 碳酸氫銨。

與透析相比，脫鹽具有多項優點，透析通常是一種緩慢的技術，需要大量緩衝液，並有在處理過程中丟失材料的風險。

在實驗室規模中，如果樣品在篩選或離心後相當乾淨，則可省略緩衝液交換和脫鹽步驟。

有時可透過稀釋以降低離子強度、在 HIC 前加入硫酸銨或滴定以調整 pH 來避免緩衝交換。

小規模的樣品脫鹽法

對於樣品容量從 0.2 mL 至 2.5 mL，可以使用 PD-10 除盐柱、PD MidiTrap™ G-25 和 PD MiniTrap™ G-25 重力柱并行运行多个样品。這些重力柱有兩種不同的使用方式：一種是在實驗室工作台上手動使用；另一種是與標準離心機一起使用，並結合 Spin Adapter。

對於 100 至 180 µL 範圍內的較小樣品容量，可將多個樣品與微離心機或 PD MultiTrap™ G-25 96 孔板一起在 PD SpinTrap™ G-25 自旋柱上運行，使用離心法進行提取（圖 2.2）。

圖 2.2. (A) PD SpinTrap™ G-25 樣品製備。(B) PD MultiTrap™ G-25 樣品在機器人系統自動製備。(C 和 D) Spin Adapters 與 PD-10 Desalting Columns、PD MidiTrap™ G-25 和 PD MiniTrap™ G-25 在標準離心機中一起使用。

Desalting larger sample volumes using HiTrap^® and HiPrep™ columns

最多可串聯三根 HiTrap^® 脫鹽柱，以增加樣品容量，例如，兩根柱允許的樣品容量為 3 mL；三根柱允許的樣品容量為 4.5 mL (表 2.8)。

最多串联四根HiPrep™ 26/10脱盐柱，以增加样品体积容量，例如，两根柱允许的样品体积为30 mL；四根柱允许的样品体积为60 mL。

缓冲液制备

对于携带带电基团的物质，建议使用含有缓冲盐的洗脱液。建議鹽濃度至少為 150 mM，以防止可能與介質產生的離子互動。氯化鈉通常用於此目的。

鹽濃度超過 1 M 時，疏水性物質可能會被阻滯或與介質結合。在更高的鹽濃度下（1.5 M 硫酸銨），柱填料會縮小。

樣品準備

只要粘度與所用緩衝液的粘度相差不超過 1.5 倍，樣品濃度就不會影響分離效果。

樣品應完全溶解。

蛋白質的溶解度通常取決於 pH 值和/或離子強度（鹽濃度），因此交換緩衝液可能導致蛋白質沉澱。

以下部分的方案描述了使用不同格式的預包柱進行脫鹽和緩衝液交換的情況。

使用 HiTrap^® ®柱進行手動脫鹽

。

圖 2.3. HiTrap® 脫盐柱可使用注射器、泵或層析系統進行高效、易於執行的基團分離。

HiTrap^® Desalting是一種5 mL色譜柱（圖2.3），使用久經考驗的SEC培養基Sephadex™ G-25 Superfine。該培養基使用交聯葡聚糖珠，具有出色的解析度和高流速。球狀蛋白質的分離範圍介於 M_r 1 000 與 5 000 之間，排除極限約為 M_r 5 000。這可確保從分子量小於 M_r 1 000 的分子中分離出大於 M_r 5 000 的蛋白質/肽。

HiTrap^® Desalting可用於 pH 值在 2 到 13 之間的水溶液。預先包裝好的培養基在所有常用緩衝液、尿素 (8 M)、胍鹽酸 (6 M) 溶液以及所有非離子和離子洗滌劑中都很穩定。低級醇 (甲醇、乙醇、丙醇) 可以用在緩衝液或樣品中，但我們建議濃度保持在 25% v/v 以下。應避免長時間（數小時）暴露於 pH 值低於 2 或高於 13 的環境中，或暴露於氧化劑中。

當需要完全去除低分子量成分時，建議的樣品容量範圍為 0.1 至 1.5 mL。分離不受流速影響，流速範圍為 1 至 10 mL/min。建議的最大流速為 15 mL/min。使用注射器、泵或色譜系統即可輕鬆進行分離。

圖 2.4 顯示了使用 HiTrap^® Desalting 實現的典型脫鹽和緩衝液交換分離，並根據 UV 吸收和電導率的變化進行監測。

圖 2.4. 使用 HiTrap® Desalting 在 30 秒內完成高效率的脫鹽。

柱平衡

1. 將緩衝液注入注射器或泵管。取下塞子。為避免將空氣引入色譜柱，將色譜柱 「滴對滴 」連接至注射器（通過連接器）或泵管。
2. 移除色譜柱出口處的卡扣端。
3. 以 5 mL/min 的速度用 25 mL 緩衝液沖洗色譜柱，以完全去除含有 20% 乙醇*的儲存緩衝液。如果柱中殘留空氣，請使用脫氣緩衝液清洗，直到空氣消失。

* 使用 HiTrap^® 5 mL 色谱柱时，5 mL/min 相当于约 120 滴/分钟。

使用注射器手动脱盐

1. 要使用注射器操作色谱柱，请使用随附的连接器将注射器连接至色谱柱。
2. 校正色谱柱，参见前一页 色谱柱校正。
3. 使用 2 至 5 mL 注射器，以 1 至 10 mL/min 的流速注入样品。丟棄從色谱柱洗出的液體。如果樣品量少於 1.5 mL，換成緩衝液繼續進樣，直到洗出總量 1.5 mL。丢弃洗脱液。
4. 用从 表 2.9中选择的适当体积对蛋白质进行稀释。

使用一根HiTrap^® Desalting 5 mL色谱柱时，推荐的最大样品体积为1.5 mL，表2.9。, Table 2.8 for information on application of smaller sample volumes.

表 2.9. 使用注射器進行 HiTrap® 脫鹽的建議樣品和洗脫容量，以及典型產量和脫鹽樣品中剩餘鹽分的示例

Sample load (mL)	Add buffer (mL)	Elute and collect (mL)<	產率 (%)	剩餘鹽分 (%)	稀釋係數
0.25	1.25	1.0	> 95	0.0	4.0
0.50	1.0	1.5	> 95	< 0.1	3.0
1.00	0.5	2.0	> 95	< 0.2	2.0
1.50	0.0	2.0	> 95	< 0.2	1.3

色譜柱的空隙容積為 1.5 mL。高分子量成分在 1.5 至 4.5 mL 之間洗脫，視樣品容量而定。

某些類型的分子，如小的雜環或同環芳香族化合物（嘌呤、嘧啶、染料）會與 Sephadex™ 發生相互作用，因此洗脫時間會比預期的遲。在這種情況下，可以使用較大的樣品容量，但必須針對每種類型的污染化合物進行最佳化分離。

使用泵除盐

1. 平衡色谱柱：请参阅上一页的色谱柱平衡
2. 最多使用 1.5 mL 样品。用紫外監測器和/或電導監測器監測柱內流出的液體。保持流速在 1 至 10 mL/min。收集馏分。
3. 在使用下一个样品之前，用大约 10 mL 缓冲液稀释色谱柱。收集馏分。

在ÄKTAprime plus上使用HiTrap^®脫盐柱進行自動脫鈣

自動脫鈣

ÄKTAprime plus包含預編程的HiTrap^®脫鹽和HiPrep™脫鹽26/10柱模板。以下程序使用的是 HiTrap^® 脫盐 5 mL 色谱柱。

缓冲液制备
平衡缓冲液（端口 A1）：準備至少 500 mL 所需的緩衝液

用於準備緩衝液的水和化學品應為高純度。使用緩衝液前，請通過 0.45 µM 篩選器過濾。

樣品準備

通過 0.45 µM 篩選器篩選樣品。5 mL.

準備 ÄKTAprime plus

1. 將入口管從端口 A（端口閥）和端口 B（2 端口閥）放入緩衝液中。
2. 將三條棕色廢液管放入廢液瓶中。
3. 在注入閥（7 端口閥）上的端口 1 和 UV 流動池之間連接色柱。
4. 在分馏收集架上装满 18 mm 试管（最少 20 支），并将分馏臂上的白板对准第一支试管。
5. 在进样阀的 2 号和 6 号端口之间连接一个足够大的样品环。
   
   注意：如果需要 Superloop™，使用說明書中會提供其他資訊。輸入樣品容量，按OK開始模板。

一旦系統準備就緒，剩餘步驟（在下文選擇應用模板和啟動方法下）將自動執行。

選擇應用程式範本並啟動方法

1. 檢查與 PrimeView™ 的通訊。在螢幕右下角應顯示文字 Controlled By: prime。
2. 使用 arrow 和 OK 按鈕在功能表中瀏覽。按钮在菜单树中导航，直到找到 Desalting HiTrap^®脱盐。

3.輸入樣品容量，按 OK 開始模板。

圖2.5 显示了使用HiTrap^® 脱盐柱和ÄKTAprime plus色谱系统对正常大小的球状蛋白质进行脱盐的典型结果。圖中所示的結果也可預期用於抗體的緩衝液交換。紫外線和電導率痕跡使適當的脫鹽餾分得以匯集。

圖 2.5. 使用層析系統對正常大小的球狀蛋白進行典型的脫鹽。

Scaling up desalting from HiTrap^® to HiPrep™

对于分离样品体积大于 1.5 mL，或者要提高高、低分子量组分之间的分辨率，最多可串联三根HiTrap^® 脱盐柱（表 2.8）。对于注射器操作，表 2.8中建议的体积应按比例增加，并保持建议的流速。樣品的稀釋取決於樣品容量和串聯使用的色譜柱數量。可以獲得比表 2.8 中建議的更低的稀釋因子，但必須針對樣品量和串聯色谱柱數的每種組合優化洗滌量。

HiPrep™ 26/10 Desalting 采用 Sephadex™ G-25 Fine 填料。它可提供高分子量（M_r > 5 000）與低分子量物質（M_r < 1 000）的群組分離，每根柱的樣品容量為 15 mL，可進行可靠且可重複的脫鹽和緩衝液交換。可串聯使用兩到四根色譜柱（表 2.8），樣品容量為 30 到 60 mL（圖 2.6）。

圖 2.6. 60 mL 的樣品容量可在四根串聯的 HiPrep™ 26/10 脫鹽柱上運行。

Automated buffer exchange on HiPrep™ 26/10 Desalting with ÄKTAprime plus

Buffer preparation
Equilibration buffer (port A1)：20 mM 磷酸钠，150 mM 氯化钠，pH 7.0.準備至少 500 mL 洗脫液

樣品準備

用於緩衝液準備的水和化學品應為高純度。

使用前將緩衝液通過 0.45 µm 的過濾器過濾。

通過 0.45 µm 的過濾器過濾樣品。

1. 將 A 端口（8 端口閥）和 B 端口（2 端口閥）的入口管放入緩衝器中。
2. 將三個棕色廢液管放入廢液瓶中。
3. 在注入閥（7口閥）上的1號端口和UV流動池之間連接色譜柱。
4. 在分餾收集器架上裝滿18毫米的試管（最少25支），並將分餾臂上的白色板對著第一支試管定位。
5. 在注入閥上的2號端口和6號端口之間連接一個足夠大的樣品環路。
   
   注：如果需要 Superloop，產品說明書中會提供更多資訊。

一旦系統準備就緒，剩餘的步驟（在選擇應用範本和啟動前面描述的方法下）將會自動執行。

選擇應用程式範本並啟動方法

1. 檢查與 PrimeView 的通訊。螢幕右下角應顯示文字 Controlled By: prime 。
2. 使用 arrow 和 OK 按鈕在功能表樹中移動，直到找到 Controlled By: prime 。找到 DSesalting HiPrep™ Desalting。

3. 輸入樣品容量，然後按 OK 開始模板。

圖 2.7. 使用色譜系統對 BSA 進行典型的脫鹽處理。

使用 PD 脫鹽柱進行小規模脫鹽和緩衝液交換

PD-10 脫鹽柱、PD MidiTrap™ G-25、PD MiniTrap™ G-25、PD SpinTrap™ G-25 和 PD MultiTrap™ G-25 脫鹽柱以及 96 孔篩板預先包裝了 Sephadex™ G-25 Medium，用於高分子量（M_r > 5 000）物質和低分子量物質的組別分離。PD SpinTrap™ G-25 和 PD MultiTrap™ G-25 色谱柱和 96 孔板预装有 Sephadex™ G-25 Medium，可通过脱盐和缓冲液交换实现高分子量物质（M_r > 5 000）和低分子量物质（M_r < 1 000）的分组分离。

PD 產品可滿足蛋白質樣品或其他生物大分子在下游分析技術（如凝膠電泳、液相色譜 (LC)、液相色譜-質譜 (LC-MS) 和質譜 (MS) 等）前進行靈活、小規模製備的需求。此系列色譜柱和色譜板的樣品容量範圍從 70 µL 到 2.5 mL，並支援平行處理多個樣品。PD-10 脫盐柱、PD MidiTrap™ G-25 和 PD MiniTrap™ G-25 也經過優化，可進行離心處理，洗出的樣品不會被稀釋。

PD SpinTrap™ G-25

圖 2.8. PD SpinTrap™ G-25 色譜柱是一次性使用的色譜柱，用於分子量 > 5000 的生物大分子的快速脫析出和緩衝液交換。

PD SpinTrap™ G-25 是一種一次性使用的旋轉柱，專為使用標準微離心機  (圖 2.2 A 和 2.8)對 100 至 180 µL 樣品進行快速、重複性高的脫鹽和緩衝液交換而設計。這些色譜柱提供高度重複性的平行脫鹽/緩衝液交換和蛋白質樣品的清理，而無需樣品稀釋。

每包 PD SpinTrap™ G-25 包含預先包裝的色譜柱和收集管，可供 50 個製備品使用。

緩衝液
平衡緩衝液：適用於應用

除鹽程序

1. 渦旋懸浮培養基。鬆開螺旋蓋蓋子，使用塑料底蓋移除工具移除底部封口。
2.將柱放入適當大小的收集管中，以 800 × g 離心 1 分鐘，移除儲存溶液。
3. 加入 400 µL 平衡緩衝液進行平衡，800 × g 離心 1 分鐘。

為確保最佳結果，用 1.5 mL 平衡緩衝液平衡旋轉柱以完全去除儲存溶液至關重要。

4.用新的乾淨收集管更換用過的收集管以收集樣品。將 100 至 180 µL 樣品緩慢地加到預包柱的中間.
6.

若要對較大量的樣品進行脫鹽處理，請使用較大容量的PD清理產品或HiTrap^® 和HiPrep™柱，表2.8。

回收率取决于蛋白质或其他生物大分子的类型。通常，回收率在 70% 到 90% 之間。樣品的濃度可以提高回收率。在樣品完全吸收到柱床後再加入 40 µL 平衡緩衝液，可以提高樣品容量小於 140 µL 時的回收率。

圖 2.9. PD MultiTrap™ G-25 96 孔板可快速、高重複性地潔淨分子量 > 5000 的生物分子。

PD MultiTrap™ G-25 96 孔板專為蛋白質的高通量脫盐、緩衝液交換和清理而設計，孔與孔、板與板之間的重複性高（圖 2.9）。使用 96 孔板，可方便且可重複地平行運行多個樣品（圖 2.10）。PD MultiTrap™ G-25 可手動操作，也可使用機器人系統與離心機一起以自動模式操作，進行 70 至 130 µL 的脫盐或緩衝液交換。

孔內預先包裝了 Sephadex™ G-25 Medium，這是一種 SEC 媒介，可有效去除分子量為 5000 的生物大分子中的低分子量物質。

每包 PD MultiTrap™ G-25 包含四個預先包裝的 96 孔板，最多可對 384 個樣本進行脫鹽或緩衝液交換。方便的收集板（每包五個）可另購。

圖 2.10. 在 PD MultiTrap™ G-25 96 孔板上去除 BSA 中的氯化鈉，結果重現性極高。 平均脫盐能力為 93%，孔與孔之間的差異為 1%（相對標準差）。

離心程序

緩衝液
平衡緩衝液：適合應用

除鹽程序

1. 將板倒置輕輕搖動，使培養基懸浮。取下上下封口，將板放在收集板上。
2.以 800 × g 離心 1 分鐘，除去儲存液.
3.每孔加入 300 µL 平衡緩衝液進行平衡。以 800 × g 離心 1 分鐘。丟棄流出液，並更換收集板。

為確保最佳結果，用 1.5 mL 平衡緩衝液平衡每孔以完全去除儲存溶液至關重要。

4.用新的乾淨收集板取代用過的收集板，以收集樣品。將 70 到 130 µL 的樣品加到預先包裝好的孔的中間.
6.以 800 × g 離心 2 分鐘。

若要脫離更大量的樣品，請使用更大規模的 PD 清除產品或 HiTrap^® and HiPrep™ 色譜柱，表 2。8.

回收率取決於蛋白質或其他生物大分子的類型。通常，回收率在 70% 到 90% 之間。樣品的濃縮可以提高回收率。在樣品完全吸收到柱床後再加入 30 µL 平衡緩衝液，可以提高樣品容量小於 100 µL 時的回收率。

PD MiniTrap™ G-25

圖 2.11. PD MiniTrap™ G-25 是一種預包裝的色譜柱，用於淨化分子量 > 5000 的蛋白質，樣品容量最高可達 500 µL。

PD MiniTrap™ G-25 專為方便地對 100 至 500 µL 容量的蛋白質樣品進行脫鹽和緩衝液交換而設計（圖 2.11）。色譜柱經由 Sephadex™ G-25 Medium 預先包裝，Sephadex™ G-25 Medium 是一種 SEC 介質，可有效去除分子量為 5000 的蛋白質中的低分子量物質。

由於樣品容量增加，這些色譜柱是 PD SpinTrap™ G-25 色譜柱的絕佳替代品。

為了增加流動性，本產品有兩種可選的應用方案，使用重力或離心。重力法可簡單地平行清理多個樣品，而無需純化系統。

每包 PD MiniTrap™ G-25 包含 50 支预包装色谱柱和四个适配器，使用离心协议时需要这些东西。

重力協議

緩衝液

平衡緩衝液：適合應用

除鹽程序

1. 取下頂蓋，倒掉色譜柱儲存液。取下底蓋。
2.將平衡緩衝液注入色譜柱，讓平衡緩衝液完全進入填料床。

為了確保最佳結果，用8 mL平衡緩衝液平衡柱子以完全去除儲存液是非常關鍵的。

3.向柱子中加入100到500 µL的樣品。對於低於 500 µL 的樣品，在樣品完全進入填料床後，加入平衡緩衝液將容量調至 500 µL。讓樣品和平衡緩衝液完全進入填料床。
5.將收集樣品的試管放在色譜柱下，用 1 mL 緩衝液洗脫。

若要脫離較大量的樣品，請使用HiTrap^® 和HiPrep™色譜柱，表2.8.

回收率取決於蛋白質類型。通常，回收率在 70% 到 90% 之間。濃縮樣品可以提高回收率。與離心相比，使用重力流時回收率和脫鹽能力更高。

蛋白質脫鹽的典型結果如 圖 2.12所示。雖然圖中所示的是BSA，但使用PD MiniTrap™ G-25對抗體進行脫鈣也會得到類似的結果。

圖 2.12. 使用重力協議去除 BSA 中的氯化鈉。蛋白質回收率為 95%。

離心程序

緩衝液
平衡緩衝液：適合應用

除鹽程序

1. 取下頂蓋，倒出柱儲存液
2.使用鉗子移除頂部的過濾器。取下底蓋。將 PD MiniTrap™ G-25 放入 15 mL 收集管中，並將提供的色譜柱轉接器連接至收集管頂部。將平衡緩衝液注入色譜柱，讓平衡緩衝液完全進入填料床。
5.

為確保最佳結果，必須用 8 mL 平衡緩衝液平衡色譜柱（步驟 4 和 5），以完全去除儲存溶液。

6.將 200 至 500 µL 的樣品緩慢地加入填料床的中間.
7.將 PD MiniTrap™ G-25 放入新的 15 mL 收集管中.
8.

如需對較大的樣品量進行脫鹽，請使用 HiTrap^® 和 HiPrep™ 色譜柱，表 2。8.

回收率取決於蛋白質類型。通常，回收率在 70% 到 90% 之間。濃縮樣品可以提高回收率。與離心法相比，使用重力流的回收率和脫鹽能力更高。

PD MidiTrap™ G-25

圖 2.13. PD MidiTrap™ G-25 是一種預先包裝的色譜柱，用於淨化分子量 > 5000 的蛋白質，樣品容量最高可達 1 mL。

PD MidiTrap™ G-25 專為 0.5 至 1.0 mL 容量的蛋白質樣品（圖 2.13）方便地進行脫鹽和緩衝液交換而設計。色譜柱預先包裝有Sephadex™ G-25 Medium，這是一種SEC介質，可有效去除分子量為5000的蛋白質中的低分子量物質。

為了增加產品的靈活性，本產品有兩種應用方案可供選擇：重力法或離心法。重力協議可簡單地平行清理多個樣品，而無需純化系統。

每包 PD MidiTrap™ G-25 包含 50 支预包装色谱柱和四个适配器，使用离心协议时需要这些东西。

離心方案

緩衝液
平衡緩衝液：適合應用

除鹽程序

1. 取下頂蓋，倒掉色譜柱儲存液
2.使用鉗子移除頂部的過濾器。取下底蓋。將 PD MidiTrap™ G-25 放入 50 mL 收集管，並將提供的色譜柱轉接頭連接至收集管頂部。將平衡緩衝液注入色譜柱，讓平衡緩衝液完全進入填料床。
5.

為了確保最佳結果，用 15 mL 的平衡緩衝液平衡柱子（步驟 4 和 5）以完全去除儲存溶液是非常關鍵的

6.將 0.75 至 1.0 mL 的樣品緩慢地加入填料床的中間.
7.將 PD MidiTrap™ G-25 放入新的 50 mL 收集管中.
8.

如需對較大的樣品量進行脫鹽，請使用 HiTrap^® 和 HiPrep™ 色譜柱，表 2。8.

回收率取決於蛋白質類型。通常，回收率在 70% 到 90% 之間。濃縮樣品可以提高回收率。

一次性 PD-10 除盐柱

PD-10 除盐柱设计用于方便地对 1.0 至 2.5 mL 容量的蛋白质样品进行除盐和缓冲液交换。這些色譜柱使用 Sephadex™ G-25 Medium 預先包裝，Sephadex™ G-25 Medium 是一種 SEC 媒介，可有效去除分子量為 5000 的蛋白質中的低分子量物質。

由於樣品容量增大，這些色譜柱是 PD MidiTrap™ G-25 色譜柱的絕佳替代品。

為了提高靈活性，本產品有兩種可選的應用方案，使用重力或離心。重力協議可簡單地平行清理多個樣品，而無需純化系統。

每包 PD-10 脫盐柱包含 30 支预包装柱。為了簡化 PD-10 脫鹽柱與重力協議的使用，可使用 LabMate PD-10 緩衝液儲槽。

典型的分离如 图2.14所示。虽然图中显示的是典型的白蛋白脱盐，但这也是抗体脱盐的预期结果。

圖 2.14. 去除白蛋白溶液中的氯化鈉。用蒸餾水平衡 PD-10 除鹽柱。樣品包含溶解在 2.5 mL 500 mM 氯化鈉溶液中的人血清白蛋白 (25 mg)。在 3.5 mL 洗脱液中共回收了 23.8 mg 白蛋白，收率為 95.3%（箭頭間）。樣品在脫鹽前的初始總鹽含量為 2%。

重力協議

緩衝液
平衡緩衝液：適合應用

除鹽程序

1. 切掉底部尖端，取下頂蓋，倒掉多餘液體。
2. 如果有的话，将 LabMate 缓冲液贮存器安装在 PD-10 脱盐柱的顶部，然后将柱放入 PD-10 脱盐工作站。棄掉流出液（使用塑料盤收集流出液）。

為確保最佳結果，用 25 mL 平衡緩衝液平衡色譜柱以完全去除儲存溶液至關重要。如果樣品少於 2.5 mL，則加入緩衝液，直到總量達到 2.5 mL。

用 3.5 mL 緩衝液進行膨脹，並收集流出液。

對於較大容量的樣品進行脫鈣，請使用HiTrap^®和HiPrep™色譜柱，表2.8.

回收率取決於蛋白質類型。通常，回收率在 70% 到 90% 之間。濃縮樣品可以提高回收率。與離心相比，使用重力流的回收率和脫鹽能力更高。

離心方案

緩衝液
平衡緩衝液：適合應用

除鹽程序

1. 取下頂蓋，倒出柱儲存液
2.使用鉗子移除頂部的過濾器。取下底蓋。將 PD-10 脫盐柱放入 50 mL 收集管中，並將提供的柱轉接器連接至收集管頂部。向柱中注入平衡緩衝液，讓平衡緩衝液完全進入填料床。重複三次，每次丟棄流過的液體。

為確保最佳結果，必須用 25 mL 平衡緩衝液平衡色譜柱（步驟 4 和 5），以完全去除儲存溶液。

6.將 1.75 至 2.5 mL 樣品緩慢加入填料床的中間。將 PD-10 脫鹽柱放入新的 50 mL 收集管中.
8.

若要脫離較大量的樣品，請使用HiTrap^®和HiPrep™柱，表2.8.

回收率取決於蛋白質類型。通常，回收率在 70% 到 90% 之間。濃縮樣品可以提高回收率。與離心法相比，使用重力流的回收率和脫鹽能力更高。