Kapa Biosystems Taq DNA Polymerase 和 PCR 套件

Taq DNA 聚合酶用於 DNA 提取和擴增的 PCR 試劑和試劑盒

DNA 提取和擴增是分子生物學工作流程中的關鍵步驟，通常需要純化的高品質 DNA。Kapa Biosystems 提供強大的 DNA 聚合酶試劑和 PCR 試劑組合，用於提取和擴增各種哺乳動物和植物基因材料。我們的 Kapa Biosystems 試劑和試劑盒結合了革命性的恒溫聚合酶，可提高靈敏度和特異性，為您的下一個發現提供多種應用。

閱讀更多

• KAPA Taq DNA Polymerase
• KAPA2G Fast Multiplex
• KAPA2G Robust DNA Polymerase
• KAPA小鼠基因分型
KAPA Express Extract
• KAPA3G植物PCR試劑盒

相關產品

抱歉，發生意外錯誤。

Network error: Failed to fetch

KAPA Taq DNA Polymerase

高品質、高性能的常規 PCR。

KAPA Taq DNA Polymerase is based on the single-subunit, wild type Taq DNA polymerase of the thermophilic bacterium Thermus aquaticus.KAPA Taq 和 KAPA Taq HotStart DNA Polymerase 具有 5'-3「 聚合酶和 5」-3「 外切酶活性，但無 3」-5' 外切酶校對活性。該酵素的錯誤率約為每 2.2 x 10⁵ 核苷酸整合 1 個錯誤。

KAPA Taq DNA Polymerase 試劑盒非常適用於：

• 標準PCR
• DNA標記
• DNA測序
• 需要高品質、耐熱DNA聚合酶的眾多應用

優點包括

• 提高靈敏度、特異性和產量
• 新穎的緩衝液配方有助於特異引物退火，從而提高特異產物的產量

優點包括

圖 1. 以 100 ng、10 ng、1 ng 或 100 pg 人類基因組 DNA 為模板，擴增 CCR5 基因的 500 bp 片段。與競爭性的 HotStart 產品相比，KAPA Taq HotStart 具有更高的靈敏度、特異性和產率。所有反應均使用製造商建議的方案進行。

圖 2. 使用 KAPA Taq 或 KAPA Taq HotStart 從支原體 DNA 擴增 270 bp 的擴增片段。使用 10 倍模板稀釋系列從 1 ng DNA 開始測試靈敏度。

KAPA2G FAST MULTIPLEX

高速、高性能多重 PCR。

KAPA2G快速多重PCR試劑盒 含有通過定向進化過程衍生的第二代（2G）酶。KAPA2G FAST HotStart DNA Polymerase 是一種抗體介導的熱啟動配方，專為更高的處理能力和速度而設計，提供比野生型 Taq DNA 聚合酶更快的延伸率。除了速度之外，KAPA2G Fast 比競爭對手的酵素提供更高的產量和靈敏度，適用於高度多重 PCR。*

KAPA2G FAST Multiplex 提供：

• 所有擴增子的均勻表現
• 成功多重 PCR 難度高、富含 GC 的目標
• PCR 循環時間縮短達 60%
• 延長時間低至 15 秒
• 高速而不影響性能
• 使用主混合物配方進行最小化優化

圖 3 . *反應（25 μL）含 1X PCR Master Mix（KAPA 和 Competitor Q）或 1X PCR Buffer、3 mM MgCl2、每種 dNTP 0.2 mM 及 1 U hot start Taq DNA Polymerase（自製多重試劑，含 Competitor I）。人類基因組 DNA 用作模板（每個反應 250 - 2 ng），引物每條 0.2 μM。根據製造商的建議進行循環（30 個循環）。

圖 4. *由於擴增偏差（擴增子長度、次級結構和引物效率的差異所導致），要在複雜的多重分析中達到所有擴增子的均勻代表性是一項挑戰。反應（25 μL）包含 1X PCR Master Mix（KAPA 和 Competitor Q）或 1X PCR Buffer、3 mM MgCl2、每種 dNTP 0.2 mM 和 1 U hot-start Taq DNA Polymerase（home brew multiplex reagents，含 Competitor I）。人類基因組 DNA 用作模板（每個反應 250 - 2 ng），引物的提供量為每個 0.2 μM。根據製造商的建議進行循環（30 個循環）。

圖 5. 使用 KAPA2G 快速多重 PCR 試劑盒進行快速多重 PCR。使用野生型 Taq 進行多重 PCR 通常需要較長的退火和延伸時間，以便多重中的所有引物都能退火和延伸。使用 KAPA2G 快速多重 PCR 試劑盒和競爭者 Q 多重 PCR 試劑盒（包含野生型 Taq DNA 聚合酶）進行 4-plex、8-plex 和 12-plex 多重 PCR（30 個循環，根據製造商建議設置）所需的總 PCR 循環時間如圖所示。使用 KAPA2G 快速多重 PCR 試劑盒可節省 40 - 60% 的時間。

圖 6. 使用野生型 Taq 成功進行多重 PCR 只限於能以同等效率擴增的簡單目標。工程化 KAPA2G Fast DNA Polymerase 改良的處理能力可對廣泛的困難靶點進行均勻的多重 PCR。反應（25 μL）含有 1X PCR Master Mix（KAPA 和 Competitor Q）或 1X PCR Buffer、3 mM MgCl2、每種 dNTP 0.2 mM 和 1 U hot start Taq DNA Polymerase（home brew multiplex reagents，含 Competitor I）。人類基因組 DNA 用作模板（每個反應 250 - 2 ng），引物的提供量為每個 0.2 μM。所有反應均加入 DMSO (5%) 及 KAPA Enhancer 1 (1X)。根據製造商的建議進行循環反應 (30 cycles)。擴增子大小為 241 - 642 bp，GC 含量為 72.7 - 83.8%。

KAPA2G Robust DNA Polymerase

KAPA2G Robust DNA Polymerase was evolved to solve inconsistent amplification across a wide range of amplicon types (GC- and AT-rich).本產品可實現更高的加工性和特異性活性，從而轉化為強大的 PCR 性能、高靈敏度以及對常見抑制劑更高的耐受性。這款高效能試劑盒非常適合具有挑戰性的 PCR 應用和困難的樣本，無需使用多種酵素和方案進行優化。

KAPA2G Robust DNA Polymerase 提供：

• 需要更高的單位酵素產量的應用
• 集體 PCR
• 對抑制劑攜帶和粗糙樣品 pcr（例如、
• 使用 HotStart 或 Readymix 配方進行例行 PCR

高效擴增富含 GC 和 AT 的靶點：

• 在廣泛的富含 GC 和 AT 的模板中性能穩定
• 提高了 PCR 成功率

• 在廣泛的富含 GC 和 AT 的模板中性能穩定
• 提高了 PCR 成功率

圖 7. 本研究使用 96 組引物中的 72 組引物所得到的 PCR 結果，每組各取一半在 1% TBE-agarose 凝膠中電泳。按 GC 含量增加的順序載入擴增子，GC 含量最低的（27%，藍色）位於左上方，GC 含量最高的（84%，紅色）位於每張複合凝膠圖像的右下方。本研究選用的引物具有不同的引物長度、序列組成、理論熔解溫度及其他設計特徵。有些引物含有 5'-tails 以便使用 M13 或其他標準測序引物進行 PCR 後測序。 A. KAPA2G Robust HotStart ReadyMix 反应（25 μL）按照用户指南中的概述进行。B. Wild-type Taq 反应（25 μL，每个反应含 0.5 U Taq）在 Taq 反应缓冲液（1.5 mM MgCl2，1X）中进行，使用与 KAPA2G Robust 相同的最终引物和 dNTP 浓度。

所有反應均含有 25 ng 人類基因組 DNA。所有反應（KAPA2G Robust和Taq）中均含有5%的DMSO，以GC含量>70%的擴增子為目標。

增強了對常見 PCR 抑制劑的耐受性

• 從粗糙樣本中高效擴增
• 每單位酶的產率和靈敏度更高

圖 8. 使用 KAPA2G Robust HotStart PCR Kit 和野生型熱啟動 Taq 聚合酶，在四種常見 PCR 抑制劑存在的情況下，從 1 pg 質粒 DNA 中擴增 1.5 kb 片段。所有反應每 25 μL 含 0.5 個單位的酶。全程使用 KAPA2G Robust HotStart Buffer B，含有 SDS 的反應加入 KAPAEnhancer 1。使用 Eppendorf Mastercycler epgradient S 進行循環，所有酵素均使用標準 3 步循環譜（35 個循環），退火溫度為 64ºC，每個循環的延伸時間為 1.5 分鐘。

無與倫比的菌落 PCR 性能

• 大腸桿菌和酵母細胞直接 PCR 的產量更高，一致性更好

圖 9. 使用 KAPA2G Robust HotStart（上）或野生型 Taq（下）從四種常用的大腸桿菌菌株（DH5a、DH10B、JM109 或 BL21）擴增克隆的 2.7 kb 插入物。將菌落（生長在 LB-agar + Amp 平板上）直接重懸在單獨的 PCR 反應中（左圖），或先重懸在 PCR 級水中，然後再加入 PCR 反應混合物中（中圖）。對於隔夜培養物（在 LB + Amp 中製備），直接將 1 μ L 加入 PCR 混合物中（右）。

圖 10. 使用 KAPA2G Robust HotStart（上）或野生型 Taq（下）從三個常用的 S. cerevisiae 菌株（BY4742、FY23 和 W303）擴增 GSH1 基因的 2.5 kb（左）或 1.6 kb（右）片段。菌落（來自 YPD-agar 平板）或 YPD 過夜培養物首先用 NaOH 或 Zymolase（如所示）以 50 μ L 的容量裂解。

KAPA長效PCR系統

KAPA 長效PCR系統是由Taq DNA聚合酶和具有校對能力的工程化古DNA（B-家族）聚合酶混合而成。此雙酵素系統專為支援長程及/或靈敏 PCR 而設計，保真度比 Taq 聚合酶高 3 - 4 倍。在 hotstart 配方中，KAPA Long Range 與專利抗體結合，可在第一個變性步驟前使酵素失活，從而消除假性擴增產物，並提高反應效率和靈敏度。

KAPA Long Range PCR 試劑盒非常適用於：

• 長目標物的 PCR 擴增和/或使用低量模板 DNA 的 PCR
• 標準的中短程 PCR 擴增
• 製備用於連結到 3'-T-overhang 克隆載體的 PCR 產物

優點包括：

• 以高靈敏度和特異性擴增目標，最高可擴增 15 kb
• 以低輸入 DNA 獲得高產量
• 在競爭對手的長程系統失敗的情況下，表現出高產量、更高靈敏度和特異性*

圖 11. 以每 25 μL 50 ng、10 ng、2 ng、400 pg 開始擴增模板稀釋的人類基因組 DNA。擴增子的長度分別為 737 bp、1.3 kb、3.3 kb 和 4.5 kb。35 cycles, 72ºC 延伸溫度。

圖 12. 以每 25 μL 50 ng、10 ng、2 ng、400 pg 開始擴增模板稀釋的人類基因組 DNA。擴增子的長度分別為 7.5 kb、10.5 kb、13 kb 和 15 kb。35 cycles, 68ºC 延伸溫度。

圖 13. *每 25 μL 反應從 50 ng、10 ng、2 ng 及 400 pg 人類基因組 DNA 複製 4.5 kb 片段。泳道：(M) Marker，(1 - 4) KAPA Long Range HotStart，(5 - 8) Competitor T，(13 - 16) Competitor R。

KAPA小鼠基因分型

1小時內從尾巴到類型。

KAPA小鼠基因分型試劑盒 設計用於在1小時內從小鼠組織中可靠地提取和擴增DNA片段，而傳統方案需要≥1天。這些試劑盒包括 KAPA Express Extract 和 KAPA2G Fast Genotyping Mix（含染料），前者是一種新型的恒溫蛋白酶和緩衝液系統，可在 15 分鐘內從小鼠組織中提取出 PCR 準備好的 DNA，後者則含有經定向進化設計的 DNA 聚合酶，具有高處理性和極快的速度。

KAPA 小鼠基因分型試劑盒提供：

• 15分鐘提取，省去有機溶劑、pH中和和離心
• 45分鐘擴增，具有高處理性和極快的速度

優於粗提取方法和商業試劑盒

• 增加了週轉時間和特異性
• 降低了成本

圖 14 和 15。 與 Quanta 小鼠基因分型試劑盒相比，KAPA 小鼠基因分型試劑盒在多重 PCR 中表現出更高的靈敏度、產率和特異性。在退火溫度為 50°C 或 60°C 時進行反應，以證明在基因分型檢測中使用次優化退火溫度的影響。

提高產量、週轉時間和可靠性

• 最快 15 分鐘即可產生可進行 PCR 的 DNA
• 最少的處理，從而降低了樣品遺失或污染的風險
足夠用於多種檢測的模板；可輕鬆擴展以處理 96 孔格式的樣品
• 在廣泛的擴增片段長度和 GC 含量範圍內，快速可靠地擴增 DNA 片段

圖 16 和 17。 A) 比較了使用 KAPA 小鼠基因分型試劑盒、蛋白酶 K 和野生型 Taq，以及鹼性裂解和野生型 Taq 提取 DNA 和擴增所需的總時間。B) 使用 KAPA 小鼠基因分型試劑盒（1）產生的五個擴增子（312 - 915 bp）的結果與使用兩種常用方法（2 和 3）產生的結果進行比較。使用 KAPA 小鼠基因分型試劑盒，用快速（15 分鐘）、單管 KAPA Express Extract 系統製備小鼠尾部的 DNA 裂解液。使用含染料的 KAPA2G Fast HotStart ReadyMix 在 45 分鐘內完成擴增。相比之下，DNA 裂解液是用約 3.5 小時的蛋白酶 K 方案 (2) 或快速 (~2.5 小時) 鹼性裂解法 (3) 製備的。在這兩種情況下，都是使用野生型 Taq (1.5 小時循環方案) 進行擴增。使用 KAPA 小鼠基因分型試劑盒得到的結果與使用其他方法得到的結果相同或更好（更特異），其他方法（取決於使用的確切 DNA 提取協議）可能需要至少四倍的時間，或長達 1 天才能完成。

KAPA EXPRESS EXTRACT

快速高效的 DNA 提取

KAPA Express Extract 是一種新型的恒溫蛋白酶和緩衝液系統，可在短短 15 分鐘內提取 PCR 準備好的 DNA。DNA 萃取方便地在單管中進行，大大降低了樣本損失和污染的風險。KAPA Express Extract 與 KAPA2G Robust HotStart ReadyMix 的結合提供了一個高效能的解決方案，可快速提取 DNA 並進行一致的下游擴增。

KAPA Express Extract 提供：

• 快速提取方案，可在 15 分鐘內提取出 PCR 準備好的 DNA，以便對具有挑戰性的樣本類型進行一致的下游擴增
• 多功能、優化的試劑盒，可從各種樣本和組織類型（包括口腔拭子、毛囊、魚類組織和鳥類羽毛）中成功提取 DNA
• 單管反應可將污染風險降至最低
• 可從 "Guthrie "卡、FTA® Elute 卡和 FTA 卡中有效萃取

圖 18 和 19。 使用 KAPA Express Extract 從哺乳動物和魚類的不同樣本中提取 DNA。從每個萃取物中，直接使用 2 μL (不需量化) 進行 PCR，其中包含 KAPA2G Robust HotStart ReadyMix 和常用於物種鑑定的 ~650 bp cytochrome c oxidase I 基因片段的引物 (Ivanova, et al., 2007)。PCR 产物（10 μL）在 1% 琼脂糖凝胶中进行分析。凝膠上方顯示樣本來源與類型。使用外嵌套的 M13 引物（每 10 μL 測序反應 2 μL PCR 产物），將反應产物直接用於標準的 Sanger 測序反應。序列資料的品質很高，可以鑑定每個物種。下圖為 Seriola lalandi (Yellowtail amberjack) 組織的序列軌跡。

圖 20. 使用 KAPA Express Extract 從兩種不同的 FFPE 樣本中提取 DNA。每個萃取物都直接用於多重 PCR（無需量化），包含 KAPA2G Robust HotStart ReadyMix 及 EGFR 基因五個不同片段（293 bp - 1 kb）（對應於第 18 - 21 及 24 個外显子）的引物。結果與使用相同反應及週期條件但以 1 ng 純化人類基因組 DNA 為模板所得到的結果進行比較。除了來自較舊樣本的 1 kb 外顯子 24 片段外，FFPE DNA 提取物和純化基因組 DNA 的產率和反應效率都相當。樣本 1 所產生的 PCR 產物經 1:10 稀釋後，直接用於標準的 Sanger 測序反應。序列資料（底圖，樣本 1 外顯子 19 片段）的品質很高。從箭頭標示位置開始的混合序列證實存在 15-nt 的缺失，該缺失與收集樣本 1 的患者診斷出的非小细胞癌有關。

圖 21. 從不同類型的血液樣本中抽取 DNA 並進行擴增，以檢測 HLA-B*27 等位基因。使用 KAPA Express 提取液從 12 個人 EDTA 血液樣本中提取 DNA（上圖）。每份萃取物 2 μL 直接加入含有 KAPA2G Robust HotStart ReadyMix 和兩組引物的 25 μL PCR 中。內部對照引物組針對β球蛋白基因的429 bp片段，而第二組引物組則以序列特異性的方式針對HLA-B*27位點的141 bp片段。12 人中有 2 人與強直性脊椎炎相關的 HLA-B*27 等位基因測試呈陽性反應。C- 和 C+ 線分別代表 HLA-B*27 陰性和陽性對照（以 1 ng 純化的人類基因組 DNA 為模板）。DNA 是從 "Guthrie "卡、FTA 卡或 FTA Elute 卡（底圖）中抽取的，這些卡上點染了經確定為 HLA-B*27 陽性 (+) 或陰性 (-) 的人的血液。DNA萃取和擴增條件及對照（C-和C+）與上圖相同。

KAPA3G PLANT PCR KITS

KAPA3G植物PCR試劑盒 的設計是利用純化的DNA或粗提煉的DNA來進行植物來源DNA的PCR。該試劑盒含有 KAPA3G DNA 聚合酶，該聚合酶經過工程化設計，對多酚和多糖等常見植物源 PCR 抑制劑的耐受性更強。

KAPA3G 植物 PCR 試劑盒提供：

• 直接從植物組織（如葉片、種子和粗植物提取物）進行快速 PCR
• 簡化轉基因篩選的工作流程
• 提高 PCR 成功率和可重複性

• 提高 PCR 成功率和可重複性

• 與野生型酵素相比，以一半的時間執行PCR
• 不再需要耗時的DNA萃取
• 適用於直接PCR

圖 22. 使用 KAPA3G 植物 PCR 套件進行直接 PCR 的效果優於 CTAB 抽提和使用野生型 Taq 進行的標準 PCR，而且週轉時間明顯更短。

從原始樣本和純化 DNA 複製長目標

• 可複製高達 5 kb 的片段
• 高產量和特異性

圖 23. 使用 KAPA3G 植物 PCR 套件從純化的 DNA (+) 或葉片 (L) 擴增不同長度的基因片段 (煙草為 297 bp 及 4100 bp，番茄為 640 bp，葡萄為 1221 bp，馬鈴薯為 1448 bp 及 2249 bp)。對於每個物種，基因組 DNA 是使用商用 DNA 純化試劑盒純化的。使用直徑 0.5 mm 的 Harris Uni-Core™ 取樣工具對粗材料進行取樣。純化的 DNA（每個反應 1 - 10 ng，視物種而定）和粗樣本在 50 μL PCR 中作為模板，進行 40 個週期的擴增。在 1% 琼脂糖凝胶上分析反应产物。KAPA Express DNA Ladder (100, 200, 400, 800, 1600, 4000, 8000 bp) 用作 MW 標記。

從多種植物品種和組織類型進行直接 PCR

• 以葉片或種子為模板進行直接 PCR
• 不需要耗時的 DNA 萃取

圖 24. 使用商用 DNA 純化試劑盒從所有物種中純化植物基因組 DNA。使用 Harris Uni-Core™ 取樣工具 (0.5 mm 直徑) 取樣葉子 (所有品種) 或種子 (除煙草和擬南芥外的所有品種；對於這些品種，每個反應使用一顆壓碎的種子)。PCR (50 μL) 含有粗樣本或 1 - 10 ng 純化 DNA (視物種而定)，在所有情況下進行 40 個週期。目標範圍在 500 到 900 bp 之間，反應產物在 1% 瓊脂糖凝膠中分析。KAPA Express DNA Ladder (100, 200, 400, 800, 1600, 4000, 8000 bp) 用作 MW 標記。

利用新穎的粗提物樣本植物 PCR 工作流程提高成功率

• 使用萃取緩衝液在短短 5 分鐘內準備植物 PCR 的粗提物
• 即使是最具挑戰性的樣本類型也能獲得高成功率

圖 25. 使用 Tab c/d 引物對 8 種植物的葉子和/或種子進行粗樣本 PCR，粗樣本為 1 μL 未經熱處理的粗提物（左圖）或 1 μL 經熱處理的粗提物（右圖）。按照 KAPA3G Plant PCR Kit TDS 中的描述建立反應，進行 45 個週期的 PCR，每個週期 55°C 退火，72°C 延長 20 秒。KAPA Express DNA Ladder (100, 200, 400, 800, 1600, 4000, 8000 bp) 用作 MW 標記。1：桉樹；2：葡萄；3：小麥葉；4：小麥種子；5：油菜葉；6：油菜種子；7：水稻種子；8：大麥種子；9：玉米粒；10：棉花種子；11：棉花葉。