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質粒 DNA 的純化

質粒純化簡介

萃取 DNA、RNA 和蛋白質等大分子在分子生物學研究中很常見。核酸的萃取與純化過程已從複雜且耗費大量人力的程序演進至今。目前的核酸純化方法可提供高樣本輸出、高純度及可擴充性的生物分子,並將交叉污染降至最低。

质粒纯化的核酸制备

核酸的制备始于样品收集过程(细菌、动物组织和细胞或植物组织)。無論使用何種 DNA 製備方法,都必須正確收集和處理樣本,才能獲得高品質的核酸。從樣本收集到核酸純化的路徑可能會涉及樣本收集、運輸、歸檔、儲存和核酸純化的工作流程(圖 1)。

樣本收集、傳輸、歸檔和 DNA 純化的工作流程。

圖 1. 樣本收集、傳輸、歸檔和 DNA 純化的工作流程。

核酸分離

DNA的分離包括裂解細胞膜、去除組織蛋白、RNA和脂質,以及純化。各種可用於萃取和純化的方法詳見表 1

表 1.核酸分離方法概述。

Plasmid DNA

質粒是分子生物學中用於操作和解碼遺傳資訊的小型、環狀、雙鏈 DNA。




3D 模式
專利技術讓您更容易掌握如何使用DHT-2300™。We are committed to bringing you Greener Alternative Products, which adhere to one or more of The 12 Principles of Greener Chemistry.

我們的 GenElute™ 質粒微量萃取試劑盒是一種簡單、快速且符合成本效益的方法,可從 E. coli 培養物中分離出質粒 DNA。該試劑盒結合了矽基膜技術和旋轉柱格式的便利性,每毫升隔夜培養物可回收高達 20 mg 的高拷貝質粒 DNA。以下是使用 GenElute™ Plasmid Miniprep Kit 分離和純化質粒 DNA 的主要步驟 (圖 2)。

  1. 通過離心收割細菌細胞,進行改良的鹼-SDS裂解程序,並在高鹽分存在下將DNA吸附到矽石上。
  2. 然後透過簡單的清洗步驟去除污染物。
  3. 結合的 DNA 在水或 Tris-EDTA 緩衝液中洗脫。回收的質粒 DNA 主要以超卷曲的形式存在。
  4. DNA可以用於限制性酵素消化、克隆、PCR、轉換、轉錄、傳統和自動測序等應用

我們的一些質粒 DNA 純化試劑盒列於表 2。 不同質粒 DNA 純化方法的詳細說明 (PDF).

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從質粒中製備和淨化核酸的工作流程

圖 2.從質粒中製備和淨化核酸的工作流程。PCR DNA 淨化:產品編號 NA1020 及 PCR9604

表 2.質粒 DNA 純化套件
表 3.PCR 清除產品

參考資料

1.
Tan SC, Yiap BC. 2009. DNA, RNA, and Protein Extraction: The Past and The Present. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 20091-10. https://doi.org/10.1155/2009/574398
2.
Buckingham L, Flaws ML. 2007. Flaws, Molecular Diagnostics: Fundamentals, Methods, & Clinical Applications. Philadelphia, USA: F.A. Davis Company.
3.
Weaver R. 2002. Molecular Biology . 2nd edition. San Francisco: McGraw Hill.
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