使用 illustra™ GFX 試劑盒進行 DNA 清除

Cytiva 提供三種基於矽的 DNA 淨化試劑盒。 illustra™ GFX™ PCR 和凝膠帶純化試劑盒可從溶液或凝膠片中純化 PCR 產品和其他 DNA。illustra™ GFX 96 PCR Purification Kit 可從 96 孔格式的溶液中純化 PCR 產物，提高產量。 illustra™ CyScribe™ GFX Purification Kit 專為在進行微陣列或其他應用之前清理 Cy3- 或 Cy5- 染料標記的 cDNA 而設計。

illustra™ GFX PCR DNA 和凝膠帶純化試劑盒設計用於純化和濃縮 PCR 混合物、限制性酵素消化液、溶液和瓊脂糖凝膠帶中的 DNA。DNA 大小從 50 bp 到 10 kbp 不等，可從 100 μL 溶液和 900 mg 凝膠切片中純化。從硼酸基緩衝液（如 TBE）中運行的凝膠中純化 DNA 無需任何修飾。

所開發的方法使用混沌劑從溶液中提取 DNA 和/或溶解瓊脂糖並使蛋白變性。DNA 選擇性地與 illustra™ GFX MicroSpin 膠柱所含的矽膠膜結合。基質結合的 DNA 用乙醇緩衝液洗滌以去除鹽分和其他污染物，純化的 DNA 用低離子強度緩衝液洗脫。

表 8.3 illustra™ GFX PCR DNA 和凝膠帶純化試劑盒的產品規格。

樣本類型	PCR混合物、酵素反應、DNA溶液、瓊脂糖凝膠切片
樣品大小範圍	50bp-10kbp
輸入容量	100μL溶液或高達900 mg瓊脂質
洗脱体积	10-50μL
主要后续应用	進一步的PCR擴增、測序、標記、限制性酵素消化、結合、克隆
當純化一個910 bp的片段在起始濃度為8.4 ng/μL	PCR, 10 μL 洗脫容量: 65% PCR, 50 μL 洗脫容量: 82% 300 mg 琼脂糖, 10 μL 洗脫容量：57% 300 mg 琼脂糖，50 μL 洗脱体积：91%

當純化小於50 bp（但大於10 bp）的PCR片段時，請使用illustra™ MicroSpin G-25色譜柱。

本試劑盒不能用於純化RNA。

如果在溶液中處理大量的樣品，長度在100 bp-10 kbp，請使用illustra™ GFX 96 PCR純化試劑盒。

使用 illustra™ GFX PCR DNA 和凝膠帶純化試劑盒純化和濃縮 DNA 的步驟

材料

• 本產品隨附緩衝液和 illustra™ GFX MicroSpin 試劑柱
• 本產品隨附緩衝液和 illustra™ GFX MicroSpin 試劑柱
• 本產品隨附緩衝液和 illustra™ GFX MicroSpin 試劑柱。/li>
• 加熱塊或水浴設定為 60 °C（僅適用於瓊脂糖凝膠切片）

預先準備

首次使用前，在裝有 1 型洗滌緩衝液的瓶中加入絕對乙醇。有關容量請參閱產品說明書。倒轉混合。在標籤上註明此步驟已完成。

一般规程

注意：缓冲液和色谱柱不可在 illustra™ 产品系列的 Cytiva 试剂盒之间转移。請確保您使用正確的緩衝液和柱進行純化。

1. 準備結合樣品

a.從溶液中加入 Capture Buffer 準備結合樣品。Capture Buffer 含有混沌鹽，可使蛋白質（包括酵素）變性，並促進 DNA 吸附到矽膠基質上。

如果樣本中的 DNA 大於 5 kb，請勿渦旋，否則會造成 DNA 剪斷。

b.從瓊脂糖：加入 Capture Buffer 溶解琼脂糖，準備樣品結合。在 60 °C 下孵育/混和，直到琼脂糖溶解。

2.結合 DNA

將步驟 1 的樣品加入 GFX 柱。離心。大於 50 bp 的 DNA 會在混沌鹽的存在下結合到矽膠膜上。

3.清洗和乾燥

用乙醇緩衝液清洗基質結合的 DNA，以去除鹽和其他污染物。

注意：離心步驟後，膜上應沒有液體，以確保乙醇不會洗脫至純化的 DNA 中。

如果純度要求很高，例如樣品要用於鈍端連接，可以重複清洗和乾燥步驟。

4.洗離純化和濃縮的DNA

用10到50  μL的低離子強度洗離緩衝液洗離膜上的DNA。在室溫下短暫孵育並離心，洗離純化的 DNA。在沒有混沌鹽的情況下，DNA會從膜上脫附。