使用 Discovery DSC-Si SPE 和反相 HPLC-UV 測定外用藥膏中的氫化可的松含量

Section Overview

• Problems Associated with Poor/No Sample Preparation
• 使用 TLC 進行負載優化
• 優異的樣品清理、回收和和可重複性
• 結論

氫化可的松（圖 A）是腎上腺皮質分泌的一種類固醇激素，合成後可作藥用。它是一種中等極性的化合物，含有糖皮質類結構（類固醇核），可用於治療各種炎症和非炎症。

在本研究中，我們開發了一種簡單且具有選擇性的正相 SPE 分析方法，可有效地從外用藥膏中分離出氫化可的松，以便進行後續的反相 HPLC-UV 定量/分析，從而展示了 Discovery SPE 的效用。最初使用薄層色譜法 (TLC) 來確定適當的負載條件，最終 SPE 方法條件的回收率和 RSD 值為 99.86 ± 6.99%。

圖 A. 氫化可的松的結構

Problems Associated with Poor/No Sample Preparation

大多數的反相 HPLC 協定要求使用水性：有機流動相混合物來促進 LC 色譜柱內的分離。儘管本報告中測試的國家品牌氫化可的松乳膏樣品（1% 氫化可的松乳膏，最大強度）可溶於甲醇，但當甲醇樣品暴露於緩衝劑/水中時，會出現沉澱（圖 B）。這主要是由於局部乳霜中的親脂性非活性成分不溶解所致。這些成分包括蘆薈、鯨蠟硬脂醇、甘油、硬脂酸甘油酯和各種油脂。

因此，簡單的溶劑萃取/稀釋並不足以製備此應用的樣品。乳霜中的親脂成分很容易沉澱（暴露於水性流動相時），導致背壓增加和系統堵塞。

圖 B. 氫化可的松乳膏親脂成分在去離子水:甲醇(1:1)中的沉澱。(左瓶-空白；右瓶-沉澱樣品）

Load Optimization Using TLC

用 1mg/mL 甲醇氫化可的松乳膏樣品和氫化可的松標準品點曬兩塊獨立的 Silica-60 TLC 板 (2.5 x 7.5cm)。每個板分別用乙酸乙酯或乙酸乙酯：己烷 (1:1) 沖洗。在乙酸乙酯 TLC 層析板上，標準品和樣品均發生了色點遷移，而在乙酸乙酯：己烷 TLC 層析板上則沒有發生色點遷移。

根據上述結果，在 Discovery DSC-Si（矽）SPE 試劑盒上載 500mg/3mL (52654-U)的樣品前，先將氫化可的松乳膏溶解在乙酸乙酯：己烷 (1:2) 中。混合物中的乙酸乙酯成分是溶解局部乳膏所必需的。正己烷則是誘發極性相互作用的必要成分，以便將氫化可的松充分保留在矽樹脂 SPE 吸附劑上。

Excellent Sample Clean-Up, Recovery, & Reproducibility

Using the SPE method detailed in ；使用 Discovery DSC-Si SPE 試劑盒（500mg/3mL）和 Discovery HS C18 HPLC 色譜柱（5cm x 4.6mm，5µm。採用 SPE 程序後，外用藥膏固有的親脂性干擾物會在 HPLC-UV 分析前從樣品中充分去除。這大大降低了樣品與流動相接觸後沉澱的風險。分析過程中觀察到的乾淨色谱圖（圖 C）進一步證明了這一點。

表 1.用於從 1% 氫化可的松外用乳膏中提取氫化可的松的 SPE 協議

SPE 濾芯： Discovery DSC-Si, 500mg/3mL (52654-U)

Column: Cat.No.: Mobile phase: Flow Rate: Temp.6mm ID, 5µm particles 568520-U Methanol:DI H2O (1：1) 1mL/min 35°C UV, 220nm 10µL

圖 C. 使用 Discovery DSC-Si SPE 的氫化可的松萃取物色谱圖範例

使用外部標準對照氫化可的松乳膏製造商標籤上描述的已知氫化可的松重量百分比來測量回收率。使用本報告中描述的 SPE 和 HPLC 方法，觀察到平均絕對回收率和 RSD 值為 99.86 ± 6.99% (n=6)，從而確定外用藥膏中氫化可的松的平均含量為 1.02%（表 2）。

表 2.從 1%氫化可的松外用乳霜中絕對回收氫化可的松的效率

Sample No.	樣品 重量(g)	理論 氫化可的松 重量(g)1	實際氫化可的松 重量(g)
Sample No. 回收重量 (g)	絕對 回收率 (%)	實際%氫化可的松 在乳霜中
1	1.0258	0.0103	0.0092	89.32	0.9003
2	1.1078	0.0118	0.0111	94.07	0.9975
3	1.1151	0.0112	0.0119	106.25	1.0424
4	1.1369	0.0114	0.0119	104.39	1.0442
5	1.1390	0.0114	0.0113	99.12	1.0785
6	1.1634	0.0116	0.0123	106.03	1.0567
		平均值:	99.86	1。02
		RSD：	6.99	0。06
1根據製造商標籤說明的 1% hydrocortisone (w/w)

結論

研究人員經常需要從困難的樣品基質中分離和定量各種化合物。本報告中描述的 SPE 程序提供了一種絕佳的方法，可在分析前將感興趣的分析物質從關鍵的樣品干擾中分離出來。因此，本報告中描述的 Discovery SPE 和 HPLC 方法在測定 1% 氫化可的松外用乳膏中的氫化可的松含量方面具有極佳的準確性和精確度。

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