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鹼性磷酸酶

鹼性磷酸酶 - 分析、分子量、底物和結構

Western 印迹和免疫组化

圖 1.用抗 FLAG 抗體和 ALP 標示的二抗檢測 FLAG-BAP 對照蛋白，並用 BCIP/NBT 底物染色（使用 ProteoQuest 色度 Western Blotting Kit，B6404）。

免疫組織化學

鹼性磷酸酶的比色免疫組織化檢測

圖 2.使用 SIGMAFAST™ Fast Red TR/Naphthol AS-MX Tablets (Cat. No. F4523)作為底物，以單克隆抗體人類 IgA 及抗體小鼠 IgG ALP 結合物染色人類扁桃腺的福馬林固定、石蠟包埋切片。40x

我們的產品也可用於酪蛋白和其他蛋白質的去磷酸化。ALKP 可用於 DNA 或 RNA 的 5'-termini 去磷酸化，以防止自結。DNA 或 RNA 經 ALKP 去磷酸化後，也可以用放射性標記的磷酸（透過 T4 多核苷酸激酶）來標記。

牛鹼性磷酸酶

牛腸道 ALP 是一種二聚體、膜源性糖蛋白。1-3 至少存在三种异构体，通常每个单体具有两个N-连接糖和一个或多个O-连接糖。2 酵素的活性需要鋅、鎂或鈣的二價離子。4

該酶對醇、胺、焦磷酸酯和酚的磷酸酯具有廣泛的特異性。它通常用於蛋白質和核酸的去磷酸化。5-7

KM：1.5 × 10-3 M (p-Nitrophenyl phosphate), 19 × 10-3 M (phosphoenolpyruvate)

分子量：2,3 140-160 kDa (dimer MW)
E2781%：7.6-10.5
等電位點:4,8,9 等電位點pI範圍為4.4-5.8

pH 最適：酵素在 pH 7.5-9.5 的範圍內最穩定。3 酵素活性的最適 pH 為 pH 8-10。pH 最佳值會因底物、底物濃度及離子濃度而改變。8 本產品的酵素活性在 pH 9.8 ( 二乙醇胺緩衝酶分析).

。
顯示鹼性磷酸酶最佳 pH 值的圖表

溫度對活性和穩定性的影響

溫度對鹼性磷酸酶活性和穩定性的影響

牛鹼性磷酸酶的抑制劑

螯合劑、砷酸鹽、半胱氨酸、碘、無機磷酸鹽、焦磷酸鹽、磷酸二異丙酯、磷酸三苯酯、氟磷酸二異丙酯和 L-苯丙氨酸。9,10

Levamisole (目錄編號 L9756)通常用於抑制內源 ALKP 活性，而對腸道酶只有輕微的抑制作用。11,12

Diethanolamine Assay
  • Glycine Assay pH 8.8
  • Glycine with Zinc Assay
  • Glycine Assay pH 10.4

    • 單位定義：一個 DEA 單位在 pH 9.8、37 °C 的條件下，每分鐘水解 1 µmole 的 4-nitrophenyl phosphate。大約 3 個 DEA 單位等於 1 個甘氨酸單位。

    鹼性磷酸酶與底物 pNPP 的反應

    ALP也可用於確定牛奶和乳酪等乳製品的巴氏殺菌效果。ALP 在大約 72 °C 的溫度下變性至少 15 秒。事實證明，較低的極端溫度條件也能破壞大部分牛奶中的病原菌。因此，ALP 活性可用於測量巴氏消毒法的效果。過去，有兩種方法可用於檢查巴氏消毒後的 ALP 活性，第一種是 Scharer 測試法，可釋放並測量苯酚。第二種方法稱為 Aschaffenberg & Mullen Test。此方法測量對硝基苯酚的釋放。這兩種測試的陰性結果都表示沒有 ALP 活性，而且大部分牛奶中的病原菌都被破壞。最近，基於相同的 ALP 活性原理，已開發出更靈敏的新技術。

    參考資料

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    7.
    Morton RK. 1955. The action of purified alkaline phosphatases on di- and tri-phosphopyridine nucleotides. 61(2):240-244. https://doi.org/10.1042/bj0610240
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    E. coli Alkaline Phosphatase

    E.大腸桿菌 鹼性磷酸酶（ALKP）是一種二聚体、非糖基化的蛋白質，假設它主要存在於 大腸桿菌（E. coli）的周質體空間。1-3 Like the bovine enzyme, the E.coli 酶對磷酸酯有廣泛的特異性.1

    KM：0.02 × 10-3 M（對硝基苯磷酸酯）4
    分子量t：2 89 kDa (Dimer MW)
    E2781%：7.6-10.52
    等電位點:5 等電位點pI範圍為4.5
    pH 最佳值: 8.05

    1.
    Reid TW, Wilson IB. 1971. 17 E. coli Alkaline Phosphatase.373-415. https://doi.org/10.1016/s1874-6047(08)60377-7
    2.
    Anderson RA, Vallee BL. 1975. Cobalt(III), a probe of metal binding sites of Escherichia coli alkaline phosphatase.. Proceedings of the National Academy of Sciences. 72(1):394-397. https://doi.org/10.1073/pnas.72.1.394
    3.
    Savchenko A, Wang W, Vieille C, Zeikus J. 2001. [26] Alkaline phosphatase from Thennotoga neapolitana.298-305. https://doi.org/10.1016/s0076-6879(01)31067-4
    4.
    Boulanger RR, Kantrowitz ER. 2003. Characterization of a MonomericEscherichia coliAlkaline Phosphatase Formed upon a Single Amino Acid Substitution. J. Biol. Chem.. 278(26):23497-23501. https://doi.org/10.1074/jbc.m301105200
    5.
    Garen A, Levinthal C. 1960. A fine-structure genetic and chemical study of the enzyme alkaline phosphatase of E. Coli I. Purification and characterization of alkaline phosphatase. Biochimica et Biophysica Acta. 38470-483. https://doi.org/10.1016/0006-3002(60)91282-8

     

    蝦鹼性磷酸酶

    Shrimp ALKP 是一種二聚體蛋白，經 SDS-PAGE 測定，分子量約為 58 kDa。

    Shrimp 鹼性磷酸酶的變性溫度比其他來源的酶低，因此建議用於 DNA 和 RNA 的去磷酸化，當需要反應後的熱失活步驟時。

    蝦鹼性磷酸酶，Cat.A2237

    Procedure for Dephosphorylation of DNA

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