Narzędzia do ilościowego oznaczania białek

Zaufane produkty do oznaczania białek

Niezawodne produkty do tradycyjnych technik oznaczania ilościowego białek, takich jak BCA i Bradford, a także produkty do alternatywnych metod oznaczania białka całkowitego, takich jak Lowry i Micro Pyrogallol.

Testy kolorymetryczne

• BCA
• Bradford
• Lowry
• Micro Pyrogallol Red Method

BCA Assay

Oznaczanie białek jest jedną z najczęstszych operacji wykonywanych w badaniach biochemicznych. Zasada oznaczania kwasu dwuchoninowego (BCA) jest podobna do procedury Lowry'ego, ponieważ obie polegają na tworzeniu kompleksu Cu²⁺-białko w warunkach alkalicznych, a następnie redukcji Cu²⁺ do Cu¹⁺. Wielkość redukcji jest proporcjonalna do ilości obecnego białka. Wykazano, że cysteina, cystyna, tryptofan, tyrozyna i wiązanie peptydowe są w stanie zredukować Cu²⁺ do Cu¹⁺. BCA tworzy fioletowo-niebieski kompleks z Cu¹⁺ w środowisku alkalicznym, zapewniając w ten sposób podstawę do monitorowania redukcji alkalicznej Cu²⁺ przez białka.

Test BCA jest bardziej czuły i możliwy do zastosowania niż procedury biuretowe lub Lowry'ego. Ponadto charakteryzuje się mniejszą zmiennością niż test Bradforda. Test BCA ma wiele zalet w porównaniu z innymi technikami oznaczania białek:

• Kompleks barwny jest stabilny
• Ma mniejszą podatność na detergenty
• Ma zastosowanie w szerokim zakresie stężeń białek

Zestaw kwasu bursztynowego do oznaczania białek, BCA
200-1000 µg/ml białka
Białka redukują zasadową Cu(II) do Cu(I) w sposób zależny od stężenia. Kwas bursztynowy jest wysoce specyficznym odczynnikiem chromogennym dla Cu(I), tworzącym fioletowy kompleks o maksimum absorbancji przy 562 nm. Absorbancja jest wprost proporcjonalna do stężenia białka. Jest to alternatywa dla odczynnika Folin-Ciocalteu do oznaczania białek.

Składniki:

• Roztwór kwasu bicynchoninowego
• 4%(w/v) CuSO₄ 
• roztwór 5H₂O
• wzorzec białka BSA

QuantiPro™ BCA Assay Kit, QPBCA
0,5-30 µg/ml białka
Może być stosowany do pomiaru bardzo rozcieńczonych stężeń białka w bardzo małych objętościach próbek. Dokładnie mierzy stężenia białek od 0,5 do 30 µg/ml w testach probówkowych i od 1 do 20 µg/ml w testach płytkowych z 96 lub 384 dołkami.

Komponenty:

• Quantipro buffer QA
• Quantipro buffer QB
• BSA Protein Standard Solution
• 4% roztwór pięciowodnego siarczanu miedzi(II)

Bradford Assay

Odczynnik Odczynnik Bradforda, B6916 może być stosowany do oznaczania stężenia białek w roztworze. Procedura opiera się na tworzeniu kompleksu między barwnikiem, błękitem brylantowym G, a białkami w roztworze. Kompleks białko-barwnik powoduje przesunięcie maksimum absorpcji barwnika z 465 do 595 nm. Wielkość absorpcji jest proporcjonalna do ilości obecnego białka. Odczynnik Bradford Reagent nie wymaga rozcieńczania i nadaje się do testów mikro-, wielodołkowych i standardowych. Liniowy zakres stężeń wynosi 0,1-1,4 mg/ml białka, przy użyciu BSA (albuminy surowicy bydlęcej) jako białka standardowego.

Odczynnik Bradford jest kompatybilny ze środkami redukującymi, które są często stosowane do stabilizacji białek w roztworze. Inne procedury oznaczania białek (Lowry i BCA) nie są kompatybilne ze środkami redukującymi. Odczynnik Bradford powinien być stosowany zamiast tych testów białkowych, jeśli obecne są czynniki redukujące. Odczynnik Bradford jest jednak kompatybilny tylko z niskimi stężeniami detergentów. Jeśli badana próbka białka zawiera detergenty w buforze, zaleca się użycie procedury oznaczania białka BCA.

Bradford Reagent, B6916
Ten test białkowy opiera się na kompleksowaniu białek z błękitem brylantowym G. Próbka białka jest mieszana z odczynnikiem, a następnie odczytywana przy 595 nm po krótkiej inkubacji w temperaturze pokojowej.

Cechy i zalety:

• Odczynnik jest gotowy do użycia. Nie wymaga mieszania ani rozcieńczania
• Rozwój kolorów jest szybki. Tylko pięć minut inkubacji, a następnie próbka jest odczytywana przy 595 nm
• Cukry redukujące i substancje redukujące wraz z tiolami nie kolidują z tym odczynnikiem
• Odczynnik nadaje się do testów mikro (1-10 μg/ml) i standardowych (50-1400 μg/ml)
• Może być stosowany w testach mikrodołkowych

Lowry Assay

 Lowry Assay, L3540 jest powszechnie stosowaną metodą ilościowego oznaczania rozpuszczalnych białek. Ze względu na swoją czułość, prostotę i precyzję jest to często wybierana metoda. Opiera się na dwóch reakcjach chemicznych, z których pierwsza polega na kompleksowaniu alkalicznego winianu miedzi z wiązaniem peptydowym białka, a druga na redukcji za pomocą odczynnika Folin i Ciocalteu, F9252. Reakcja ta daje purpurowy kolor, w którym absorpcja jest odczytywana między 500 a 800 nm. Test ten można przeprowadzić bezpośrednio z roztworem białka lub zastosować metodę wytrącania obejmującą DOC i TCA. Wytrącanie eliminuje zakłócenia często powodowane przez inne odczynniki, takie jak Tris, siarczan amonu, EDTA, sacharoza, cytrynian i inne. Stężenie białka można następnie określić za pomocą krzywej kalibracyjnej.

Total Protein Kit, Micro Lowry, Peterson's Modification, TP0300
Total Protein Kit, Micro Lowry jest oparty na modyfikacji metody Micro Lowry dokonanej przez Petersona i wykorzystuje dodecylosiarczan sodu, zawarty w& nbsp;odczynniku Lowry.nbsp;odczynnika Lowry, aby ułatwić rozpuszczanie stosunkowo nierozpuszczalnych lipoprotein.¹

Składniki:

• Odczynnik Lowry'ego, proszek
• 0.15% roztwór dezoksycholanu (DOC)
• roztwór kwasu trichlorooctowego (TCA)
• odczynnik fenolowy Folina i Ciocalteu
• wzorzec BSA, 2 mg

Odniesienie

1. Peterson GL. 1977. A simplification of the protein assay method of Lowry et al. which is more generally applicable. Analytical Biochemistry. 83(2):346-356. https://doi.org/10.1016/0003-2697(77)90043-4

Metoda mikro czerwieni pirogallolowej

Procedura mikro czerwieni pirogallolowej jest modyfikacją opublikowanej metody.¹ Metoda opiera się na pomiarze przesunięcia absorpcji, które występuje, gdy kompleks molibdenianu czerwieni pirogallolowej wiąże się z podstawowymi grupami aminokwasowymi cząsteczek białka. Wzrost absorbancji przy 600 nm jest wprost proporcjonalny do stężenia białka w próbce. Metoda ta wykazuje liniowy zakres od 0,01-2,0 mg/ml.

Total Protein Kit, Micro Pyrogallol Red Method, TP0400
Zestaw Micro Pyrogallol Red zawiera odczynniki wystarczające na 240 testów. Zestaw zawiera dwie 120 ml butelki Odczynnika do oznaczania białka całkowitego, T2074 oraz 5 ml Roztworu wzorcowego białka.

Składniki:

• Odczynnik białka całkowitego
• Roztwór wzorcowy białka; albumina surowicy ludzkiej

Odniesienie

1. FUJITA Y, MORI I, KITANO S. 1983. Color reaction between pyrogallol red-molybdenum(VI) complex and protein.. Bunseki kagaku. 32(12):E379-E386. https://doi.org/10.2116/bunsekikagaku.32.12_e379