Protokół powlekania żelatyną dla hodowli komórkowych

Żelatyna jest molekularną pochodną kolagenu i jest syntetyzowana z alkalicznego trawienia kolagenu ze skóry bydlęcej. Żelatyna jest hydrokoloidem bogatym w glicynę, prolinę i hydroksyprolinę, które nadają jej stabilność strukturalną. Żelatyna stanowi idealne podłoże do mocowania komórek w hodowli komórkowej. Optymalne stężenie zależy od typu komórek i celu badań.

Ważne uwagi przed powlekaniem żelatyną

• Upewnij się, że komórki są zdrowe i w odpowiedniej liczbie.
• Roztwory żelatyny muszą całkowicie upłynnić się w temperaturze 37 ° C przed powlekaniem.
• Roztwory żelatyny mogą być przechowywane w temperaturze 4 - 8 °C przez czas nieokreślony; podwyższone temperatury powodują hydrolizę i utratę integralności.
• Typowe stężenie pokrycia powierzchni wynosi 100 - 200 µg/cm². Stężenie pokrycia powierzchni może się różnić w zależności od hodowanych komórek. Optymalne warunki mocowania muszą być określone dla każdej linii komórkowej i aplikacji.
• Nie należy nadmiernie suszyć po powlekaniu, ponieważ zakłóca to strukturę żelatyny i wpływa na mocowanie komórek.

Protokół powlekania żelatyną dla hodowli komórkowych

1. Przygotuj 2% (w/v) roztwór rozpuszczając żelatynę w wodzie o jakości hodowli tkankowej.
2. Sterylizuj w autoklawie w temperaturze 121 °C, pod ciśnieniem 15 psi przez 30 minut.
3. Pokryć powierzchnię hodowli 5-10 µL roztworu żelatyny/cm² (tj. 100-200 µg/cm²).
4. Pozostawić do wyschnięcia na co najmniej 2 godziny przed wprowadzeniem komórek i pożywki.
5. Alternatywnie, roztwór żelatyny (nr produktu G1393) może być użyty do bezpośredniego pokrycia naczyń hodowlanych.

Tabela 1. Żelatyny do mocowania komórek.

Nr produktu	Opis	Stężenie powłoki	Dilute in
G1393	Roztwór żelatyny	100-200 μg/cm2	Woda sterylna
G9136	Żelatyna ze świńskiej skóry	100-200 μg/cm2	Ciepła pożywka podstawowa (bez surowicy)
G1890	Żelatyna ze świńskiej skóry	100-200 μg/cm2	Ciepła woda
G7041	Żelatyna ze skóry ryb zimnowodnych	100-200 μg/cm2
G9391	Żelatyna ze skóry bydlęcej	100-200 μg/cm2

Często zadawane pytania dotyczące powlekania wyrobów hodowlanych żelatyną

• Jaka jest czystość produktów żelatynowych?
  Nie określamy czystości roztworów fibronektyny. Wszystkie nasze proszki fibronektyny mają czystość 70-90%.
  
  
• Jaki jest najlepszy rozpuszczalnik do rozcieńczania proszków żelatyny?
  Rozpuszczalniki, które są kompatybilne z rozcieńczaniem żelatyny, znajdują się w Tabeli 1.
  
  
• Jak długo można przechowywać żelatynę?
  Roztwory żelatyny mogą być przechowywane przez czas nieokreślony w temperaturze 2 - 8 °C. Płytki pokryte żelatyną mogą być przechowywane w temperaturze 2 - 8 °C przez okres do 4 tygodni, pod warunkiem, że są dobrze uszczelnione, aby zapobiec zanieczyszczeniu i/lub nadmiernemu wysuszeniu żelatyny. Nie używaj produktu, jeśli na powierzchni powlekanego materiału pojawią się przebarwienia lub pęknięcia.
  
  
• Jakie jest znaczenie liczby Blooma dla żelatyn?
  Liczba Blooma została wprowadzona przez Oscara T. Blooma i wskazuje sztywność filmu żelatynowego. Po raz pierwszy została zmierzona przy użyciu żelometru Blooma w kontrolowanym procesie pomiaru sztywności folii żelatynowej. Wyższa liczba oznacza sztywniejszy produkt. Liczba Blooma / wytrzymałość Blooma pomaga w wyborze odpowiedniego produktu żelatynowego do danego zastosowania.