Analiza LC/MS fosfolipidów w mleku w Ascentis® Express HILIC po SPE z użyciem Supelclean™ Si, analiza Shotgun HPLC
Materiały
Standardowe
kolumna analityczna
probówka lub płytka SPE
CONDITIONS
sample/matrix
Phospholipids from 10 mL cow’s milk (Folch method extraction)
SPE tube/cartridge
Supelclean LC-Si, 1 g/6 mL (57051)
condition
hexane
sample addition
1 mL extract in chloroform/methanol (2:1, v/v)
washing
3 mL of hexane/diethylether (8:2, v/v) and 3 mL of hexane/diethylether (1:1, v/v) to remove nonpolar lipids
elution
1 x 4 mL methanol, followed by 1 x 2 mL methanol, followed by 1 x 2 mL chloroform/methanol/water (3:5:2, v/v/v).
eluate post-treatment
dry under a gentle stream of nitrogen, redissolved residue in chloroform/methanol (2:1, v/v)
column
Ascentis Express HILIC, 15 cm x 4.6 mm I.D., 2.7 μm particles (53981-U)
mobile phase
[A] acetonitrile; [B] acetonitrile:water (2:1)
gradient
0% B held for 5 min; to 30% B in 5 min; to 100% B in 20 min; held at 100% B for 10 min; to 0% B in 1 min
flow rate
0.7 mL/min
column temp.
ambient
detector
ELSD. nebulizing gas (nitrogen) flow: 2 mL/min (180 KPa); drift tube temperature: 50 °C
injection
5 μL
Opis
Komentarz do analizy
Ekstrakcję frakcji lipidowej przeprowadzono z 10 ml próbki mleka krowiego, zgodnie z metodą Folcha, aby zapewnić wyczerpującą ekstrakcję całej zawartości lipidów. Całkowity ekstrakt odparowano pod próżnią, a końcową suchą pozostałość (400 mg) ponownie rozpuszczono w chloroformie/metanolu 2:1 (v/v). Ekstrakt lipidowy (100 mg) rozpuszczono następnie w 1 ml mieszaniny chloroformu i metanolu (2:1, v/v). Po kondycjonowaniu wkładu heksanem, niepolarne lipidy eluowano 3 ml heksanu/eteru dietylowego (8:2, v/v) i 3 ml heksanu/eteru dietylowego (1:1, v/v). Odzysk PL z wkładu uzyskano przez dwuetapową elucję, stosując 4 ml metanolu jako pierwszego rozpuszczalnika ekstrakcyjnego, a następnie 2 ml metanolu, a następnie 2 ml chloroformu/metanolu/wody (3:5:2, v/v/v). Odzyskaną frakcję wysuszono pod łagodnym strumieniem azotu, uzyskując 49,7 mg suchej pozostałości. Pozostałość ponownie rozpuszczono w chloroformie/metanolu (2:1, v/v).
Informacje prawne
Ascentis is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Supelclean is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC