Analiza LC/MS (TOF) leków antyarytmicznych i metabolitów w osoczu na urządzeniu Ascentis® Express HILIC po przygotowaniu próbki z użyciem HybridSPE®-fosfolipidów
Materiały
Standardowe
Amiodarone hydrochloride solution
1.0 mg/mL in methanol (as free base), ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®N-Desethylamiodarone hydrochloride solution
1.0 mg/mL in methanol (as free base), ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®(±)-Flecainide solution
1.0 mg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®Lidocaine solution
1.0 mg/mL in methanol, ampule of 1 mL, certified reference material, Cerilliant®kolumna analityczna
probówka lub płytka SPE
CONDITIONS
sample preparation
SPE (Solid Phase Extraction)
sample/matrix
rat plasma stabilized with K2EDTA was spiked directly from stock standard to a level of 400 ng/mL
SPE tube/cartridge
HybridSPE-Phospholipid 96-Well Plate, 50 mg/2 mL (575656-U)
sample addition
apply 100 μL of plasma to plate, followed by 300 μL of 1% formic acid acetonitrile. Agitate via vortex for 4 min
elution
place on vacuum manifold and apply 10” Hg vacuum for 4 minutes. Collect filtrate and analyze directly.
column
Ascentis Express HILIC, 10 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm particles (53939-U)
mobile phase
[A] 5 mM ammonium formate; [B] 5 mM ammonium formate in acetonitrile; (5:95, A:B, pH 7.0 with formic acid)
flow rate
0.4 mL/min
pressure
1305 psi (90 bar)
column temp.
35 °C
detector
ESI(+), full scan, m/z 100-1000
injection
0.5 μL
sample
plasma extract, analyte concentration of final sample work up is equivalent to 100 ng/mL
Opis
Komentarz do analizy
Podstawowa charakterystyka tych związków sprawia, że są one celem separacji chromatograficznej HILIC. Fazy ruchome HILIC składają się z acetonitrylu o wysokim składzie, co ułatwia bezpośrednią analizę wytrąconych próbek osocza bez potrzeby dodatkowej wymiany rozpuszczalnika próbki. W większości przypadków faza ruchoma o wysokiej zawartości substancji organicznych ułatwia również zwiększenie odpowiedzi analitu w detekcji ESI(+) MS. W tej aplikacji wykorzystano HybridSPE-Phospholipid do przygotowania próbki w celu usunięcia fosfolipidów i wytrąconych białek przed analizą LC/MS na kolumnie HPLC Ascentis Express HILIC Fused-Core. Najwyższej jakości rozpuszczalniki zapewniły czyste i niezawodne działanie. CRM Cerilliant zapewniły wiarygodną kwantyfikację. Uzyskana metoda była solidna i czuła.
Informacje prawne
Ascentis is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
HybridSPE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany