Oznaczanie kofeiny w kawie przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cienkowarstwowej

Czytaj więcej o

• Wprowadzenie
• Wyniki i dyskusja
• Zakończenie

Wprowadzenie

Wysokosprawna chromatografia cienkowarstwowa (HPTLC) jest bardzo przydatną techniką analityczną i wymaga niewielkiego przygotowania próbki, co zostało zilustrowane na przykładzie analizy kofeiny w kawie. W przypadku próbek gotowanej kawy przed analizą konieczna jest jedynie ekstrakcja i filtracja przez filtr strzykawkowy PTFE 0,45 μm. Płytka HPTLC została wstępnie kondycjonowana fazą ruchomą, a skaner TLC został użyty do oznaczenia ilościowego po zakończeniu rozdziału chromatograficznego.

Wyniki i dyskusja

Kofeina została wykryta w świetle UV przy 254 nm, hRf = 56, (Rysunek 1). Skonstruowano czteropoziomową krzywą kalibracyjną i wykorzystano ją do celów ilościowych (rysunek 2). Każda próbka była analizowana w trzech powtórzeniach wykonywane równolegle, co jest zaletą chromatografii planarnej w porównaniu zarówno z GC, jak i HPLC.

.

Tabela 1 Dane chromatograficzne

Ścieżka	Składnik	hRf	[Kofeina] (mg/ml)	Objętość aplikacji  (µL)	[Kofeina] (mg/g)
1, 2, 3, 4, 9, 10, 11, 12, 17, 18, 19, 20	Standard kofeiny	56	1.0	0.1, 0.5, 1.0, 2.0	-
5, 13, 21	Filter Coffee 1	56		1	27.5
6, 14, 22	Filter Coffee 2	56		1	15.2
7, 15, 23	Pad Coffee	56		1	15.5
8, 16, 24	Chai Latte	56		1	4.9

Rysunek 1. Rozwinięta płytka HPTLC przy 254 nm, dane chromatograficzne pokazane w tabeli powyżej.

Rysunek 2. Wykres kalibracji w trybie regresji wielomianowej (r = 0,9970).

Wnioski

Kofeina może być łatwo oznaczana ilościowo w różnych rodzajach kawy przy minimalnym przygotowaniu próbki przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cienkowarstwowej.

Tabela 2 Dane aplikacji (chromatografia)

Chromatografia
Płytka	HPTLC Silica gel 60 F254, 20x10cm
Przygotowanie próbki	Wzorzec kofeiny rozcieńczony w metanolu; Kawa gotowana z wodą i przefiltrowana przez filtr 0.45 μm.
Aplikacja próbki	ATS4 (Camag)
Objętość aplikacji	0.1 do 2.0 μL
Faza kondycjonowania wstępnego i faza ruchoma	Acetonitryl / Metanol / n-Heptan 6/4/1
Dystans kondycjonowania wstępnego odległość migracji	7 cm 5 cm
Czas migracji	9 min

Tabela 3 Dane aplikacji (wykrywanie)

Wykrywanie
Długość fali	Światło UV o długości fali 254 nm i 366 nm
Staining	Brak
sprzętu do MS	ekspresji CMS (Advion)
Detekcja MS	Tryb ESI (+) (m/z 150 - 400)