Ugrás a tartalomra
Merck
KezdőlapMédia előkészítésAlbumin szarvasmarha szérumból

Szarvasmarha szérumból származó albumin Gyakran Ismételt Kérdések (GYIK)

Az albuminok a szérum vagy plazma legnagyobb mennyiségben előforduló fehérjéi, a teljes fehérjetartalom 60%-át teszik ki, és fontos szerepet játszanak az ozmotikus nyomás (az ér- és szövetkompartmentek közötti folyadékeltolódás) szabályozásában. A globulinokkal ellentétben az albuminok viszonylag alacsony molekulatömegűek, vízben oldódnak, könnyen kristályosodnak, és savas aminosavakat tartalmaznak.

Az albuminok vízben oldódnak, és számos olyan hormon és gyógyszer transzportereként vagy hordozójaként szolgálhatnak, amelyek nem oldódnak könnyen vízben. Megköti a vizet, a Ca2+, a Na+ és a K+-t, és egy hidrofób hasadéknak köszönhetően zsírsavakat, bilirubint, hormonokat és gyógyszereket is. Az albumin a lipidek szolubilizálására szolgál, és blokkolóanyagként is használják western blotok vagy ELISA alkalmazásokban. A fehérjék fontos szerepet játszanak a pH szabályozásában is.

Az albuminok molekulatömege az albumin típusától függően változik. Az érett humán albumin 585 aminosavból áll és molekulatömege 66 kDa.

Az albuminfehérjék legismertebb típusai a human, szarvasmarha-szérum-albuminok és recombinant. Egyéb albuminok közé tartoznak a csirke, egér, porcin.

A szarvasmarha szérumalbumin (BSA) egy általánosan használt kis (~66 kDa) globuláris albuminfehérje, amely számos fontos molekulát és fehérjét köt, szekvenál és stabilizál. Széles körben használják a sejttenyésztési közegek, különösen a szérummentes közegek adalékanyagaként, és számos előnyt biztosít, beleértve az oxidatív károsodástól való védelmet és más közegkomponensek, például a zsírsavak és a piridoxál stabilizálását.

A BSA termékeket számos alkalmazásban használták és publikálták szakmailag lektorált cikkekben, többek között sejtkultúra, IHC, ELISA és sok más alkalmazásban. A BSA termékek széles választékát kínáljuk az Ön kutatási és gyártási igényeihez.

Az albumin a májban szintetizálódik a hepatocitákban, majd gyorsan kiválasztódik a véráramba, és nagyon kevés albumin tárolódik a májban. Az albuminok a plazma onkotikus nyomásának modulátoraként szolgálnak az emberben, és endogén és exogén ligandumok, például gyógyszerek szállítására is képesek. A klinikai orvostudományban a humán szérumalbumin az egyes betegek tápláltsági állapotának markereként mérhető.

Meghatározták a humán albumin aminosav-szekvenciáját és szerkezetét. A humán albumin egy szénhidrát nélküli fehérje. Egyetlen polipeptidláncot alkot, amely a 34. számú maradékon egy szabad szulfhidrilcsoportot és 17 intrachain diszulfidkötést tartalmaz.

A BSA körülbelül 583 aminsavmaradékot tartalmaz, és egyetlen polipeptidláncon belül nem tartalmaz szénhidrátokat. 17 láncközi diszulfidhidat és 1 szulfhidrilcsoportot tartalmaz pH 5-7-nél.

A vér albuminszintje számos betegség diagnosztizálására használható, beleértve a máj- és vesebetegséget, valamint az alultápláltságot. A vér alacsony albuminszintje máj- vagy vesekárosodásra utalhat, míg a magas szint kiszáradásra.

Az albuminokat gyakran használják a laboratóriumban blokkolószerként, hogy megakadályozzák a nem specifikus kötődést az immunvizsgálatokban. Stabilizátorként is használhatók enzimvizsgálatokban és fehérje standardként fehérje mennyiségi meghatározási vizsgálatokban.

  • Western blotting: BSA általában blokkolószerként használják a Western blottingban, hogy megakadályozzák az elsődleges és másodlagos antitestek nem specifikus kötődését a membránhoz.
  • ELISA (enzimhez kötött immunszorbent assay): BSA blokkolószerként használható az ELISA-ban, hogy megakadályozza az antitestek nem specifikus kötődését a lemezhez.
  • Cellakultúra: Az albumin általában a sejttenyésztési közegek kiegészítéseként használatos, hogy a sejteket alapvető tápanyagokkal és növekedési faktorokkal lássa el.
  • Szabályozó: Az albumin stabilizátorként használható vakcinákban, gyógyszerekben és más biológiai termékekben a lebomlás elleni védelem érdekében.

Az albuminok felelősek a vér ozmotikus nyomásának fenntartásáért azáltal, hogy megakadályozzák a vízveszteséget a véráramból. Ezt úgy érik el, hogy poláros és töltött aminosavmaradványaik révén vonzzák a vízmolekulákat.

A különböző módszerekkel tisztított albuminok, beleértve a valódi Cohn frakcionálási módszer, hő sokk, chromatography, és módosított etanolos frakcionálási módszerek. A további tisztítási lépések közé tartozhat a faszénszűrés és a kristályosítás.

A szarvasmarha-szérumalbumin tisztítási módszerei és alkalmazási referenciái

1. táblázat.A BSA-termékeket tisztítási módszer és alkalmazások alapján válogatva és idézve. T = QC-teszt a meghatározott alkalmazáshoz. ChIP = kromatin immunprecipitáció; ELISA = enzimhez kötött immunszorbent assay; IHC = immunhisztokémia; ICC = immuncitokémia; IF = immunfluoreszcencia.

Az albumin izolálása és tisztítása viszonylag egyszerű. Az egyik első izolálási módszer a szérum vízzel szembeni dialízisét alkalmazta, és eltávolította a legtöbb globulint. Egy második eljárás kihasználta az albumin jó oldhatóságát alacsony vagy közepes ammónium-szulfát-koncentrációban, és a pH csökkentésével kicsapást eredményezett. Az elektroforetikus izolálást és az affinitáskromatográfiát is alkalmazták. Ezek közül a módszerek közül azonban egyik sem volt alkalmazható nagyüzemi előállításra.

A kezdeti izolálás hőkezeléssel vagy alkoholos kicsapással történik. A legtöbb kereskedelmi készítményt ma már alkoholos kicsapással, az E. J. Cohn és munkatársai által az 1940-es években kifejlesztett módszerrel (az "V. frakció" körülbelül 96%-os tisztaságú albumint eredményez), vagy hőkezeléssel állítják elő. A szennyeződések további eltávolítása történhet kristályosítással, preparatív elektroforézissel, ioncserélő kromatográfiával, affinitáskromatográfiával (pl. a ConA-agaróz eltávolítja a glikoproteineket), hőkezeléssel (eltávolítja a globulinokat), alacsony pH-jú kezeléssel, faszénkezeléssel, szerves oldószeres kicsapással (pl. izooktán) és alacsony hőmérsékletű kezeléssel. A faszénkezelés és a szerves oldószeres kicsapás eltávolítja a zsírsavakat.

Igen, az albuminok denaturálódhatnak a pH, a hőmérséklet és az ionerősség változásával. A denaturáció következtében a fehérje elveszítheti funkcionális tulajdonságait.

Az albuminok vízben könnyen oldódnak, és csak nagy koncentrációjú semleges sókkal, például ammónium-szulfáttal lehet őket kicsapni. A BSA oldatstabilitása nagyon jó (különösen, ha az oldatokat fagyasztott aliquotként tároljuk). Valójában az albuminokat gyakran használják más oldott fehérjék (pl. labilis enzimek) stabilizátoraként. Az albumin azonban hő hatására könnyen koagulálódik. Ha az albumint 50 °C-ra vagy annál magasabb hőmérsékletre melegítik, az albumin igen gyorsan hidrofób aggregátumokat képez, amelyek hűtéskor nem alakulnak vissza monomerekké. Valamivel alacsonyabb hőmérsékleten is várható aggregáció, de viszonylag lassabb ütemben.

Az albuminok számos molekulához, köztük zsírsavakhoz, hormonokhoz és gyógyszerekhez is képesek kötődni. Ezt hidrofób és elektrosztatikus kölcsönhatások révén teszik.

Kapcsolódó termékek
Loading

Hivatkozások

1.
Lin B, Lin X, Stachel M, Wang E, Luo Y, Lader J, Sun X, Delmar M, Bu L. Culture in Glucose-Depleted Medium Supplemented with Fatty Acid and 3,3?,5-Triiodo-l-Thyronine Facilitates Purification and Maturation of Human Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes. Front. Endocrinol.. 8 https://doi.org/10.3389/fendo.2017.00253
2.
Boteon YL, Wallace L, Boteon APCS, Mirza DF, Mergental H, Bhogal RH, Afford S. An effective protocol for pharmacological defatting of primary human hepatocytes which is non-toxic to cholangiocytes or intrahepatic endothelial cells. PLoS ONE. 13(7):e0201419. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0201419
3.
Aragonès G, Suárez M, Ardid-Ruiz A, Vinaixa M, Rodríguez MA, Correig X, Arola L, Bladé C. 2016. Dietary proanthocyanidins boost hepatic NAD+ metabolism and SIRT1 expression and activity in a dose-dependent manner in healthy rats. Sci Rep. 6(1): https://doi.org/10.1038/srep24977
4.
Liu C, Han T, Stachura DL, Wang H, Vaisman BL, Kim J, Klemke RL, Remaley AT, Rana TM, Traver D, et al. 2018. Lipoprotein lipase regulates hematopoietic stem progenitor cell maintenance through DHA supply. Nat Commun. 9(1): https://doi.org/10.1038/s41467-018-03775-y
5.
Ota A, Kovary KM, Wu OH, Ahrends R, Shen W, Costa MJ, Feldman BJ, Kraemer FB, Teruel MN. 2015. Using SRM-MS to quantify nuclear protein abundance differences between adipose tissue depots of insulin-resistant mice. Journal of Lipid Research. 56(5):1068-1078. https://doi.org/10.1194/jlr.d056317
6.
Patsoukis N, Bardhan K, Chatterjee P, Sari D, Liu B, Bell LN, Karoly ED, Freeman GJ, Petkova V, Seth P, et al. 2015. PD-1 alters T-cell metabolic reprogramming by inhibiting glycolysis and promoting lipolysis and fatty acid oxidation. Nat Commun. 6(1): https://doi.org/10.1038/ncomms7692
7.
Fang L, Xie D, Wu X, Cao H, Su W, Yang J. Involvement of Endoplasmic Reticulum Stress in Albuminuria Induced Inflammasome Activation in Renal Proximal Tubular Cells. PLoS ONE. 8(8):e72344. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0072344
8.
Svensson RU, Parker SJ, Eichner LJ, Kolar MJ, Wallace M, Brun SN, Lombardo PS, Van Nostrand JL, Hutchins A, Vera L, et al. 2016. Inhibition of acetyl-CoA carboxylase suppresses fatty acid synthesis and tumor growth of non-small-cell lung cancer in preclinical models. Nat Med. 22(10):1108-1119. https://doi.org/10.1038/nm.4181
9.
Pavani K, Hendrix A, Van Den Broeck W, Couck L, Szymanska K, Lin X, De Koster J, Van Soom A, Leemans B. Isolation and Characterization of Functionally Active Extracellular Vesicles from Culture Medium Conditioned by Bovine Embryos In Vitro. IJMS. 20(1):38. https://doi.org/10.3390/ijms20010038
10.
Heras S, De Coninck DIM, Van Poucke M, Goossens K, Bogado Pascottini O, Van Nieuwerburgh F, Deforce D, De Sutter P, Leroy JLMR, Gutierrez-Adan A, et al. 2016. Suboptimal culture conditions induce more deviations in gene expression in male than female bovine blastocysts. BMC Genomics. 17(1): https://doi.org/10.1186/s12864-016-2393-z
11.
Velasco-Estevez M, Mampay M, Boutin H, Chaney A, Warn P, Sharp A, Burgess E, Moeendarbary E, Dev KK, Sheridan GK. Infection Augments Expression of Mechanosensing Piezo1 Channels in Amyloid Plaque-Reactive Astrocytes. Front. Aging Neurosci.. 10 https://doi.org/10.3389/fnagi.2018.00332
12.
Saka Y, Smith JC. 2007. A mechanism for the sharp transition of morphogen gradient interpretation in Xenopus. BMC Dev Biol. 7(1):47. https://doi.org/10.1186/1471-213x-7-47
13.
Liu H, Chen C, Hung Y, Lin H, Chao H, Shih P, Chuang C, Li W, Huang T, Hsueh Y. RNase A Promotes Proliferation of Neuronal Progenitor Cells via an ERK-Dependent Pathway. Front. Mol. Neurosci.. 11 https://doi.org/10.3389/fnmol.2018.00428
14.
Mao X, Del Bigio MR. 2015. Interference with protease-activated receptor 1 does not reduce damage to subventricular zone cells of immature rodent brain following exposure to blood or blood plasma. J Negat Results BioMed. 14(1): https://doi.org/10.1186/s12952-014-0022-4
15.
Abe K, Zhao L, Periasamy A, Intes X, Barroso M. Non-Invasive In Vivo Imaging of Near Infrared-labeled Transferrin in Breast Cancer Cells and Tumors Using Fluorescence Lifetime FRET. PLoS ONE. 8(11):e80269. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0080269
16.
Khraiwesh M, Leed S, Roncal N, Johnson J, Sciotti R, Smith P, Read L, Paris R, Hudson T, Hickman M, et al. 2016. Antileishmanial Activity of Compounds Derived from the Medicines for Malaria Venture Open Access Box Against Intracellular Leishmania major Amastigotes. 94(2):340-347. https://doi.org/10.4269/ajtmh.15-0448
17.
Shekhar A, Lin X, Lin B, Liu F, Zhang J, Khodadadi-Jamayran A, Tsirigos A, Bu L, Fishman GI, Park DS. 2018. ETV1 activates a rapid conduction transcriptional program in rodent and human cardiomyocytes. Sci Rep. 8(1): https://doi.org/10.1038/s41598-018-28239-7
18.
Gustafson-Wagner E, Stipp CS. The CD9/CD81 Tetraspanin Complex and Tetraspanin CD151 Regulate ?3?1 Integrin-Dependent Tumor Cell Behaviors by Overlapping but Distinct Mechanisms. PLoS ONE. 8(4):e61834. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061834
19.
Agrawal S, Guess AJ, Chanley MA, Smoyer WE. 2014. Albumin-induced podocyte injury and protection are associated with regulation of COX-2. Kidney International. 86(6):1150-1160. https://doi.org/10.1038/ki.2014.196
20.
Adhikary G, Grun D, Kerr C, Balasubramanian S, Rorke EA, Vemuri M, Boucher S, Bickenbach JR, Hornyak T, Xu W, et al. Identification of a Population of Epidermal Squamous Cell Carcinoma Cells with Enhanced Potential for Tumor Formation. PLoS ONE. 8(12):e84324. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0084324
21.
Tomlinson S, Taylor PW, Morgan BP, Luzio JP. 1989. Killing of gram-negative bacteria by complement. Fractionation of cell membranes after complement C5b-9 deposition on to the surface of Salmonella minnesota Re595. 263(2):505-511. https://doi.org/10.1042/bj2630505
22.
Fisher ML, Ciavattone N, Grun D, Adhikary G, Eckert RL. 2017. Sulforaphane reduces YAP/?Np63? signaling to reduce cancer stem cell survival and tumor formation. Oncotarget. 8(43):73407-73418. https://doi.org/10.18632/oncotarget.20562
23.
?mít D, Fouquet C, Pincet F, Zapotocky M, Trembleau A. Axon tension regulates fasciculation/defasciculation through the control of axon shaft zippering. 6 https://doi.org/10.7554/elife.19907
24.
Yu Y, Blokhuis B, Derks Y, Kumari S, Garssen J, Redegeld F. 2018. Human mast cells promote colon cancer growth via bidirectional crosstalk: studies in 2D and 3D coculture models. OncoImmunology. 7(11):e1504729. https://doi.org/10.1080/2162402x.2018.1504729
25.
Buchser WJ, Slepak TI, Gutierrez?Arenas O, Bixby JL, Lemmon VP. 2010. Kinase/phosphatase overexpression reveals pathways regulating hippocampal neuron morphology. Mol Syst Biol. 6(1):391. https://doi.org/10.1038/msb.2010.52
26.
Schöneberg J, Dambournet D, Liu T, Forster R, Hockemeyer D, Betzig E, Drubin DG. 2018. 4D cell biology: big data image analytics and lattice light-sheet imaging reveal dynamics of clathrin-mediated endocytosis in stem cell?derived intestinal organoids. MBoC. 29(24):2959-2968. https://doi.org/10.1091/mbc.e18-06-0375
27.
Kuboyama K, Tanga N, Suzuki R, Fujikawa A, Noda M. Protamine neutralizes chondroitin sulfate proteoglycan-mediated inhibition of oligodendrocyte differentiation. PLoS ONE. 12(12):e0189164. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0189164
28.
Mehta V, Abi-Nader KN, Shangaris P, Shaw SWS, Filippi E, Benjamin E, Boyd M, Peebles DM, Martin J, Zachary I, et al. Local Over-Expression of VEGF-D?N?C in the Uterine Arteries of Pregnant Sheep Results in Long-Term Changes in Uterine Artery Contractility and Angiogenesis. PLoS ONE. 9(6):e100021. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100021
29.
Li L, Ma P, Liu Y, Huang C, O W, Tang F, Zhang JV. Intermedin Attenuates LPS-induced Inflammation in the Rat Testis. PLoS ONE. 8(6):e65278. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0065278
30.
Zujur D, Kanke K, Lichtler AC, Hojo H, Chung U, Ohba S. 2017. Three-dimensional system enabling the maintenance and directed differentiation of pluripotent stem cells under defined conditions. Sci. Adv.. 3(5):e1602875. https://doi.org/10.1126/sciadv.1602875
Kapcsolódó cikkek
A folytatáshoz jelentkezzen be

Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.

Még nem rendelkezik fiókkal?