Ugrás a tartalomra
Merck
KezdőlapSzilárd fázisú extrakció (SPE)HybridSPE®-foszfolipid technológia

HybridSPE®-foszfolipid technológia

HybridSPE®-PLus lemezek - a HybridSPE®-foszfolipid technológia következő generációja

Az új HybridSPE®-lemezek-PLus lemezek a hagyományos HybridSPE®-foszfolipid lemezek jól bevált kémiai tulajdonságait kínálják, a lemezek gyártásának többéves gyártási tapasztalatból eredő fejlesztésével párosítva. Ezek a gyártási fejlesztések lehetővé tették számunkra, hogy növeljük a kutak közötti áramlási konzisztenciát és csökkentsük a minta 

feltöltési térfogat, tovább javítva az analit visszanyerését és a vizsgálat reprodukálhatóságát. Továbbra is kínáljuk és támogatjuk hagyományos, négyszögletes lyukú HybridSPE®-foszfolipid lemezeket azoknak az ügyfeleknek, akik már kifejlesztették a módszereket ezekre, de felkérjük az új módszereket kifejlesztő ügyfeleket, hogy használják ki a legújabb technológiát: a HybridSPE®-PLus.

A foszfolipidek hatása az LC-MS adatok pontosságára és reprodukálhatóságára

Foszfolipidek: A foszfolipidek minden sejtmembrán fő alkotórészeként vannak jelen. Ezért minden biológiai mintamátrixban jelen vannak, beleértve a szérumot, a plazmát és a teljes vért, és problémát jelenthetnek a kis molekulák LC-MS-analízise során, mivel gyakran együttelütálódnak és ionizálódnak az érdeklődésre számot tartó analitekkel együtt. Ez a koelúció a tömegspektrométer jelének ionszuppresszióját (téves csökkenését) eredményezi, ami változékonyságot okozhat és hatással lehet az LC-MS eredmények pontosságára (1. ábra).

A foszfolipidek hatása a klonidin ionizációjára

1. ábra. A foszfolipidek hatása a klonidin ionizációjára

A pontos eredmények és a gyors válaszok fontossága a bioanalízisben

Megértjük, hogy az Ön elemzési eredményei jelentős hatással lehetnek sokak életére. Ez nyomást gyakorol Önre, hogy az Ön által előállított adatok a lehető legpontosabbak legyenek. Nemcsak gyors válaszokra van szüksége, hanem olyan válaszokra is, amelyekben megbízhat. Az Ön munkáját nem könnyíti meg az sem, hogy milyen összetett mintákkal dolgozik. A mintáiban különböző mértékben, de eredendően jelen lévő fehérjék és foszfolipidek az olyan érzékeny technikák, mint az LC-MS vagy az LC-MS/MS használata esetén az analitikai eredményeit változékonyabbá tehetik. Több mint négy évtizedes kromatográfiás szakértelmünkkel segítünk Önnek eligazodni a mintaelőkészítési lehetőségek összetettségében.

A biológiai minták hagyományos mintaelőkészítési módszereinek korlátai

A hagyományos biológiai mintatisztítási módszerek korlátai

A legtöbb klinikai és biológiai kutató hagyományos módszereket, például fehérjecsapadék-leválasztást és folyadék-folyadék extrakciót használ a minták elemzés előtti tisztítására. Bár ezek a technikák lehetővé teszik a fehérjék olcsó és gyors eltávolítását, a foszfolipidek okozta ionszuppresszió problémáját egyáltalán nem kezelik.


Még ha a foszfolipidek nem is eluálódnak együtt az adott analitával, felhalmozódhatnak az analitikai oszlopon, és a későbbi elemzések során szórványosan eluálódhatnak az oszlopról. Ez kiszámíthatatlan ionszupressziót és rossz reprodukálhatóságot okozhat, ezáltal veszélyeztetve az eredmények pontosságát (2. ábra).


Háttérinterferencia megfigyelése több injektálás után a standard fehérje PPT használatával

Gradiens RP LC-MS üres plazmaminták gradiens RP LC-MS-je

2. ábra. Standard fehérje PPT-vel készített üres plazmaminták gradiens RP LC-MS-je a HybridSPE®-foszfolipiddel szemben.

Háttérinterferencia többszöri injekciózás után a HybridSPE®-foszfolipid technológia alkalmazásával

HybridSPE®-foszfolipid technológia

A C18 1,8 µm-es oszlopon (5 cm x 2,1 mm) többszöri befecskendezés után keletkező ellennyomás

C18 1,8 µm-es oszlopon (5 cm x 2,1 mm) többszöri befecskendezés után keletkező ellennyomás

Foszfolipid eltávolítási technikák

A foszfolipidek által okozott ionszuppresszió problémájának megoldására egyes elemzők hagyományos SPE-vel próbálkoznak. A hagyományos SPE gyakran időigényes és összetett módszerfejlesztést igényel, de így is csak névleges mennyiségű foszfolipidet távolít el. A visszamaradó foszfolipidek befolyásolhatják az eredmények pontosságát, felhalmozódhatnak az analitikai oszlopon, ami hatással lehet a későbbi elemzésekre, növelhetik az oszlopcsere költségeit és növelhetik a műszer leállási idejét.

A kereskedelemben ma már számos olyan termék kapható, amelyet kifejezetten a fehérjék és a foszfolipidek eltávolítására terveztek, beleértve a HybridSPE® lemezeket és kazettákat. E termékek többsége egyszerű, gyors és könnyen használható, és meglehetősen standardizált módszereket kínál minimális módszerfejlesztéssel. A legtöbbjük azonban hidrofób visszatartási mechanizmust használ a foszfolipidek és a mintában lévő érdekes analitok elválasztására. Ez problémát jelent, ha az érdeklődésre számot tartó analitok szintén hidrofóbok, mivel a hidrofób foszfolipidekkel együtt visszatartódnak és eltávolításra kerülnek. Ez az analit visszanyerésének csökkenését és pontatlan eredményeket eredményez. A HybridSPE®Foszfolipid technológia abban különbözik, hogy a fehérjéket és a foszfolipideket is teljesen eltávolítja a mintából anélkül, hogy más hidrofób vegyületeket visszatartana.

A HybridSPE®-foszfolipid technológia egyedülálló kémiája és alapvető módszertana</h2>

Hogyan különbözik a HybridSPE®-Foszfolipid technológia más foszfolipid eltávolító termékektől?
A HybridSPE®-Phospholipid technológia a maga nemében elsőként 2008-ban került bevezetésre. Egyesíti a hagyományos fehérjecsapadékolás egyszerű, szabványosított módszertanát a szilárd fázisú extrakció (SPE) specifitásával a fehérjék és foszfolipidek egyidejű eltávolítására biológiai mintákból az LC-MS analízis előtt. Más foszfolipid-eltávolító termékekkel ellentétben, amelyek hidrofób retenciós mechanizmust használnak a foszfolipidek biológiai mintákból történő eltávolítására, a HybridSPE®-Foszfolipid technológia egyedi retenciós mechanizmust használ (3. ábra). Ez lehetővé teszi a foszfolipidek elválasztását még a nagyon hidrofób analitektől is, mint például a vitaminoktól, amelyek a konkurens termékeknél gyakran a foszfolipidekkel együtt visszamaradnak.

A HybridSPE®-foszfolipid technológia egyedülálló visszatartási mechanizmusa

3. ábra. A HybridSPE®-foszfolipid technológia egyedülálló visszatartási mechanizmusa lehetővé teszi még a nagyon hidrofób analitok elválasztását is a foszfolipid szennyeződésektől a biológiai mintamátrixokban lévő foszfolipid szennyeződésektől

Újabb, jobb "Go-to" mintaelőkészítési módszer a foszfolipidek eltávolítására
A biológiai mintákkal dolgozó laboratóriumok gyakran választják a fehérje kicsapását az LC-MS elemzés előtt, és ezt használják "go-to" mintaelőkészítési módszerként. A foszfolipidek eltávolítását költségesebbnek, időigényesebbnek és szükségtelennek tartják, ha az adott analitok nem koelutálnak a mintában lévő foszfolipidekkel. Ez nem így van.

A laboratóriumok valójában csökkenthetik az összköltségeket és növelhetik az általános átmenő teljesítményt, miközben pontosabb adatokat generálhatnak, ha a HybridSPE®-Foszfolipid technológiát használják a fehérjék és a foszfolipidek eltávolítására minden biológiai mintából a kis molekulák LC-MS analízise előtt.

Egyszerű és gyors foszfolipid eltávolítás
A 96 lyukú lemezek protokollja mindössze néhány egyszerű lépést tartalmaz (4. és 5. ábra), és a lemezek a csomagolásból kivéve azonnal használhatók, előkondicionálási lépés nélkül. Először a mintát (amely szükség esetén belső standardokat is tartalmaz) és egy kicsapó oldószert adunk a lyuklemezbe, majd egy keverési lépés következik, és vákuum alkalmazása a minta összegyűjtéséhez. A begyűjtött minták ezután készen állnak az elemzésre.

A HybridSPE®-foszfolipid mintaelőkészítési munkafolyamat alapvető ábrázolása

4. ábra. A HybridSPE®-foszfolipid mintaelőkészítési munkafolyamat alapvető ábrázolása

1. Minta hozzáadása

Pipettázzon 100 µl plazmát vagy szérumot a HybridSPE® lemezre, amelyet 300 µl kicsapó oldószer követ. Adjon hozzá belső standardokat szükség szerint.

2. Keverje össze

Vortexeléssel/rázással a HybridSPE® lemezen vagy 0,5-1 mL pipettaheggyel történő aspirálással/adagolással.

3. Vákuumot alkalmazzon

A csomagolt ágyas szűrő/szűrőbetét egységmélységi szűrőként működik a kicsapódott fehérjék egyidejű fizikai eltávolítása és a foszfolipidek kémiai eltávolítása érdekében. A kis molekulák (pl, gyógyszeripari vegyületek és metabolitok) visszatartás nélkül haladnak át.

4. Mintagyűjtés

A kapott szűrlet/elúció fehérjéktől és foszfolipidektől mentes, és készen áll az azonnali LC-MS/MS elemzésre.

HybridSPE® 96 lyukú lemez protokoll

5. ábra. HybridSPE® 96 lyukú lemezek protokollja

Technikai erőforrások

A folytatáshoz jelentkezzen be

Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.

Még nem rendelkezik fiókkal?