Zselatin bevonatolási protokoll sejtkultúrához

A zselatin a kollagén molekuláris származéka, amelyet a szarvasmarha bőréből származó kollagén lúgos emésztéséből szintetizálnak. A zselatin hidrokolloid és gazdag glicinben, prolinban és hidroxiprolinban, ami szerkezeti stabilitást kölcsönöz. A zselatin ideális sejtmegkötő szubsztrátumot kínál a sejttenyésztéshez. Az optimális koncentráció a sejttípustól és a kutatási céltól függ.

Fontos megjegyzések a zselatinbevonat előtt

• Gondoskodjon arról, hogy a sejtek egészségesek és megfelelő számúak legyenek.
• A zselatinoldatoknak 37 °C-on teljesen el kell cseppfolyósodniuk a bevonás előtt.
• A zselatinoldatok 4 - 8 °C-on korlátlan ideig tárolhatók; a magasabb hőmérséklet hidrolízist és integritásvesztést okoz.
• A tipikus felületi fedési koncentráció 100 - 200 µg/cm². A felületi fedettségi koncentráció a tenyésztett sejtektől függően eltérő lehet. A kötődés optimális körülményeit minden egyes sejtvonal és alkalmazás esetében meg kell határozni.
• Ne szárítsa túl a bevonás után, mivel ez megbontja a zselatin szerkezetét és befolyásolja a sejtek kötődését.

Zselatin bevonási protokoll sejtkultúrához

1. Készítsen 2%-os (w/v) oldatot a zselatin szövetkultúra minőségű vízben történő feloldásával.
2. Szterilizálja 121 °C-on, 15 psi nyomáson 30 percig tartó autoklávozással.
3. Kenjük be a tenyészet felületét 5-10 µl zselatinoldattal/cm² (azt. 100-200 µg/cm²).
4. A sejtek és a táptalaj bevezetése előtt legalább 2 órát hagyja száradni.
5. Alternatívaként zselatinoldat (G1393 termékszám) használható a tenyésztőedények közvetlen bevonására.

.

1. táblázat. Zselatinok a sejtek rögzítéséhez.

Termékszám	Megnevezés	Bevonatkoncentráció	Bevonatkoncentráció	Hígítás
Hígítás
G1393	Gelatin oldat	100-200 μg/cm2	100-200 μg/cm2	Szteril víz
G9136	Sertésbőrből származó zselatin	100-200 μg/cm2	Meleg alapközeg (szérum nélkül)
G1890	Sertésbőrből származó zselatin	100-200 μg/cm2	Meleg víz
G7041
Gelatin hidegvízi halbőrből	100-200 μg/cm2
G9391	Szarvasmarha bőréből származó zselatin

Gyakori kérdések a kultúredények zselatinnal történő bevonásával kapcsolatban

• Milyen tisztaságúak a zselatinkészítmények?
  A fibronectinoldatok tisztaságát nem határozzuk meg. Minden fibronectinporunk 70-90%-os tisztaságú.
  
  
• Melyik a legjobb oldószer a zselatinporok hígításához?
  A zselatin hígításához alkalmas oldószereket az 1. táblázat tartalmazza.
  
  
  
• Meddig tárolható a zselatin?
  A zselatinoldatok 2-8 °C-on korlátlan ideig tárolhatók. A zselatinnal bevont lemezek 2-8 °C-on legfeljebb 4 hétig tárolhatók, feltéve, hogy jól lezárják őket a szennyeződés és/vagy a zselatin túlzott kiszáradásának megakadályozása érdekében. Ne használja a terméket, ha a bevont anyag felületén elszíneződések vagy repedések jelennek meg.
  
  
• Mi a Bloom-szám jelentősége a zselatinok esetében?
  A Bloom-számot Oscar T. Bloom vezette be, és a zselatinfilm merevségét jelzi. Először a Bloom-zselométerrel mérték meg egy ellenőrzött eljárással a zselatinfilm merevségének mérésére. A magasabb szám merevebb terméket jelez. A Bloom szám/Bloom szilárdság segít a megfelelő zselatin termék kiválasztásában az Ön alkalmazásaihoz.