Referenční centrum vyrovnávací paměti

• pH rozmezí vybraných biologických pufrů Graf (25 °C, 0.1 M)
• Tris nebo Trizma^® Příprava pufrů - pH vs. Teplota
• Příprava fosfátového pufru - 0.2 M roztok
• Kyselina citronová - Na₂HPO₄ Příprava pufru, pH 2.6-7,6
• Kyselina citronová - pufrový přípravek citrátu sodného, pH 3,0-6.2
• Pufrovací přípravek octanu sodného - kyselina octová, pH 3,7-5.6
• Na₂HPO₄
/sub> - NaH₂PO₄ Příprava pufru, pH 5.8-8.0 při 25 °C
• Imidazol (glyoxalin) - HCl pufrový preparát, pH 6,2-7.8 při 25 °C
• Pufrovací přípravek uhličitan sodný - hydrogenuhličitan sodný, pH 9.2-10,8
• Součty a rovnice pro přípravu pufru

Výběr správného biologického pufru

Vyberte pufr na základě požadavků na pH a pKa, což je míra síly kyseliny, která zohledňuje pH, koncentraci a teplotu. Měly by se také zohlednit regulační požadavky nebo požadavky na čistotu pro vaši přesnou aplikaci. Následující tabulky vám pomohou orientovat se v přípravě mnoha běžných roztoků pufrů podle pH a pKa. 

Kromě níže uvedených tabulek jsme vyvinuli několik kalkulaček receptů pufrů, které vám pomohou s přípravou pufrů.

TBE a TAE pro gelovou elektroforézu mají poněkud složitější recepty. Pomůžeme vám vybrat ten správný.

Co jsou to třídy pufrů?

Třída pufru označuje kvalitu a úrovně nečistot vhodné pro různá použití. Nabízíme šest tříd pufrů určených pro obecné laboratorní použití, finální farmaceutickou formulaci a výrobu a pro aplikace mezi nimi, které mohou vyžadovat testování stopových kovů nebo materiálů určité čistoty.

Tabulka užitečných rozsahů pH vybraných biologických pufrů (25 °C, 0,1 M)

Meziprodukty	Užitečný rozsah pH	pKa (při 20 °C)	pKa (při 25° C)C)	pKa (při 37 °C)	Třída činidla	BioPerformance Certified Grade
MES	5.5-6.7	6.16	6.10	5.97	M8250	M2933
Bis-Tris	5.8-7.2	n/a	6.50	6.36	B9754	B4429
ADA	6.0-7.2	6.65	6.59	6.46	A9883	n/a
ACES	6.1-7,5	6,88	6,78	6.54	A9758	A3594
Trubky	6.1-7,5	6,80	6.76	6.66	P6757	P1851
MOPSO	6.2-7.6	n/a	6.90	6.75	M8389	n/a
Bis-Tris Propan	6.3-9,5	n/a	6.8, 9.0	n/a	B6755	Podle výrobce:	.B4679
BES	6.4-7.8	7.17	7.09	6.90	B9879	B4554
MOPS	6.5-7.9	7.28	7.20	7.02	M1254	M3183
TES	6.8-8.2	7.50	7.40	7.16	T1375	T5691
HODNOTY	6.8-8,2	7,55	7,48	7.31	H3375	H4034
DIPSO	7.0-8.2	n/a	7.60	7.35	n/a	n/a
MOBS	6.9-8,3	n/a	7.60	n/a	M3295<./a>	n/a
TAPSO	7.0-8.2	n/a	7.60	7.39	T9269	n/a
Tris nebo Trizma®	7.0-9,0	8,20	8,06	7.72	T1503	T6066
HEPPSO	7.1-8.5	n/a	7.80	6.66	n/a	n/a
POPSO	7.2-8,5	n/a	7,80	7.63	P3405	n/a
ČAJ	7.3-8.3	n/a	7.80	n/a	n/a	n/a
EPPS	7.3-8,7	n/a	8.00	n/a	E9502	E0276
Tricine	7.4-8,8	8,16	8,05	7.80	T0377	T5816
Gly-Gly	7.5-8.9	n/a	8.20	n/a	G1002	Podrobnosti:	G1002
Bicine	7.6-9.0	8.35	8.26	8.04	B3876	n/a
HEPBS	7.6-9.0	n/a	8.30	n/a	H6903<./a>	n/a
TAPS	7.7-9.1	8.49	8.40	8.18	T5130	T5316
AMPD	7.8-9,7	n/a	8.80	n/a	A9754	n/a
TABS	8.2-9.6	n/a	8.90	n/a	n/a	n/a
AMPSO	8.3-9.7	n/a	9.00	9.10	A6659	n/a
CHES	8.6-10.0	9.55	9.49	9.36	C2885	n/a
CAPSO	8.9-10.3	n/a	9.60	9.43	C2278	n/a
AMP	9,0-10.5	n/a	9.70	n/a	n/a	n/a
CAPS	9.7-11.1	10.56	10.40	10.02	C2632	n/a
CABS	10.0-11.4	n/a	10.70	n/a	C5580	n/a

Tris nebo Trizma^® Tabulka přípravy pufru - závislost pH na teplotě

pH při teplotě
5 °C	25 °C	37 °C
7.76	7,20	6.91
7.89	7.30	7.02
7.97	7,40	7.12
8.07	7.50	7.22
8.18	7,60	7.30
8.26	7.70	7.40
8.37	7,80	7.52
8.48	7.90	7.62
8.58	8.00	7.71
8.68	8.10	7.80
8.78	8.20	7.91
8.88	8.30	8.01
8.98	8.40	8.10
9.09	8.50	8.22
9.18	8.60	8.31
9.28	8.70	8.42
9.36	8,80	8.51
9.47	8.90	8.62
9.56	9,00	8,70

g/L pro 0.05 M roztoku
Trizma® HCL	Trizma® Base
7.02	0,67
6.85	0,80
6.61	0,97
6.35	1.18
6,06	1.39
5.72	1,66
5.32	1.97
4,88	2.30
4.44	2.65
4.02	2,97
3.54	3.34
3,07	3.70
2.64	4,03
2.21	4.36
1,83	4.65
1.50	4,90
1.23	5.13
0,96	5.32
0.76	5,47

Tabulka pro přípravu fosfátového pufru - 0,2 M roztok  

Fosforečnan draselný  bezvodý monobazický g/l	Fosforečnan sodný dvoubazický heptahydrát g/L	23 °C pH
22.4	3,49	5.7
22,08	4,29	5,8
21,60	5,37	5.9
21.05	6.60	6.0
20.40	8.05	6.1
19.56	9.93	6.2
18.60	12.07	6.3
17.64	14.22	6,4
16,44	16.90	6.5
15.00	20.12	6,6
13,56	23.34	6,7
12,24	26,29	6,8

Fosforečnan draselný monobazický bezvodý g/l	Fosforečnan sodný Dibasický heptahydrát g/L	23 °C pH
10.80	29.51	6,9
9,36	32.73	7,0
7,92	35.95	7,1
6,72	38.63	7,2
5,52	41.31	7,3
4,56	43.46	7,4
3,84	45.07	7,5
3,12	46.68	7,6
2,52	48.55	7,7
2,04	49.09	7,8
1,68	49.89	7,9
1,27	50,81	8,0

Kyselina citronová - Na₂HPO₄ Příprava pufru, pH 2,6-7.6¹

Monohydrát kyseliny citronové, C₆H₈O₇ - H₂O, MW 210.14; 0,1 M obsahuje 21,01 g/l. Na₂HPO₄, MW 141,98; 0,2 M obsahuje 28,40 g/l, nebo Na₂HPO₄ - 2H₂O, MW 178.05; 0,2 M obsahuje 35,61 g/l.

x ml 0,1 M-kyseliny citronové a y ml 0,2 M-Na₂HPO₄ smícháno

pH	x ml 0,1 M kyseliny citronové	y ml 0.2-Na2HPO4
2.6	89,10	10,90
2,8	84.15	15,85
3,0	79,45	20,55
3.2	75,30	24,70
3.4	71,50	28,50
3.6	67,80	32,20
3,8	64,50	35.50
4.0	61.45	38.55
4.2	58.60	41.40
4.4	55.90	44.10
4.6	53.25	46,75
4,8	50,70	49,30
5.0	48,50	51,50
5,2	46,40	53.60
5.4	44.25	55.75
5,6	42,00	58.00
5.8	39.55	60.45
6.0	36.85	63,15
6,2	33,90	66,10
6.4	30,75	69,25
6,6	27,25	72.75
6.8	22.75	77.25
7,0	17,65	82.35
7,2	13,05	86,95
7,4	9.15	90,85
7,6	6,35	93,65

Kyselina citronová - pufr citronanu sodného, pH 3,0-6.2¹

Monohydrát kyseliny citronové, C₆H₈O₇ - H₂O, MW 210.14; 0,1 M obsahuje 21,01 g/l. Citronan trisodný dihydrát, C₆H₅O₇Na₃ - 2H₂O, MW 294. L/l.12; 0,1 M obsahuje 29,41 g/l.

x ml 0,1 M-kyseliny citronové a y ml 0,1 M-citrátu trisodného se smísí

pH	x ml 0,1 M kyseliny citronové	y ml 0.1 M-citrát trisodný
3,0	82,0	18.0
3,2	77,5	22.5
3,4	73,0	27,0
3.6	68,5	31,5
3.8	63,5	36,5
4,0	59.0	41,0
4,2	54.0	46,0
4,4	49,5	50.5
4.6	44.5	55.5
4.8	40.0	60.0
5.0	35,0	65,0
5.2	30,5	69,5
5,4	25.5	74,5
5,6	21.0	79,0
5,8	16,0	84.0
6.0	11.5	88.5
6.2	8,0	92,0

PŘÍPRAVA pufru octanu sodného - kyseliny octové, pH 3,7-5.6¹

Trihydrát octanu sodného, CH₃COONa - 3H₂O, MW 136.09; 0,2 M obsahuje 27,22 g/l.

x ml 0,2 M-NaOAc a y ml 0,2 M-HOAc smícháme

pH, 18 °C	x ml 0,2 M-NaOAc	y ml 0.2 M-HOAc
3,7	10,0	90,0
3,8	12.0	88,0
4,0	18,0	82,0
4.2	26.5	73.5
4.4	37.0	63.0
4.6	49.0	51.0
4.8	59.0	41,0
5,0	70,0	30,0
5.2	79.0	21.0
5.4	86.0	14.0
5.6	91.0	9.0

Na₂HPO₄ - NaH₂PO₄ PŘÍPRAVA Pufru, pH 5.8-8,0 při 25 °C¹

Na₂HPO₄ - 2H₂O, MW 178,05; 0,2 M obsahuje 35,61 g/l. Na₂HPO₄ - 12H₂O, MW 358,22; 0,2 M obsahuje 71,64 g/l. NaH₂PO₄ - H₂O, MW 138,01; 0,2 M obsahuje 27,6 g/l. NaH₂PO₄ - 2H₂O, MW 156,03; 0,2 M obsahuje 31,21 g/l.

x ml 0.2 M-Na₂HPO₄, y mL 0,2 M-NaH₂PO₄; ředí se na 100 mL s H₂O

pH, 25 °C	x ml 0,2 M-Na2HPO4	y ml 0.2 M-NaH2PO4
5.8	4,0	46,0
6.0	6.15	43.85
6.2	9,25	40,75
6.4	13,25	36,75
6,6	18,75	31.25
6.8	24.5	25.5
7.0	30.5	19,5
7,2	36.0	14,0
7,4	40.5	9,5
7,6	43.5	6,5
7,8	45.75	4,25
8,0	47,35	2,65

Imidazol (glyoxalin) - HCl pufr PŘÍPRAVA, pH 6,2-7.8 při 25 °C¹

Imidazol, C₃H₄N₂, MW 68.08

25 ml 0,2 M-imidazolu (13,62 g/l), x ml 0,2 M-HCl, zředěno na 100 ml s H₂O

pH, 25 °C	x ml 0.2 M-HCl
6,2	21,45
6.4	19,9
6,6	17,75
6,8	15.2
7,0	12,15
7.2	9,3
7,4	6.8
7,6	4,65
7.8	3,0

Uhličitan sodný - pufr hydrogenuhličitanu sodného PŘÍPRAVA, pH 9,2-10.8¹

Na₂CO₃ - 10H₂O, MW 286,2; 0,1 M obsahuje 28,62 g/l. NaHCO₃, MW 84,0; 0,1 M obsahuje 8,40 g/L.

x ml 0.1 M-Na₂CO₃ a y ml 0,1 M-Na₂HCO₃ smíchaných

.

20 °C	37 °C
x ml 0.1 M-Na2CO3	y ml 0.1 M-Na2HCO3
9.2	8,8	10	90
9,4	9.1	20	80
9.5	9,4	30	70
9.8	9,5	40	60
9,9	9.7	50	50
10.1	9,9	60	40
10.3	10,1	70	30
10,5	10.3	80	20
10,8	10.6	90	10

Vzorce a rovnice pro přípravu pufru

Procentní hmotnostní podíl (w/v)

(% požadovaného pufru / 100) × konečný objem pufru (ml) = g potřebného výchozího materiálu.

Molární roztoky

požadovaná molarita × hmotnost vzorce × konečný objem roztoku (l) = potřebné gramy

Hendersonova-Hasselbachova rovnice

.

Odkaz

1. Dawson R, Elliot D, Elliot W, Jones KM. 1986. Data for Biochemical Research. 3rd ed.. Oxford Science Publ..