07-473

Anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys4)

Upstate^®, from rabbit

• Sinonimo/i: H3K4me3, Histone H3 (tri methyl K4), H3 histone family, member T, histone 3, H3, histone cluster 3, H3
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: human
• Application: ChIP, DB, ICC, WB
• Citations: 1097

Proprietà

• biological source: rabbit
• Quality Level: 100
• antibody form: affinity isolated antibody
• antibody product type: primary antibodies
• clone: polyclonal
• mol wt: (~17 kDa observed; 15.51 kDa calculated.. Uncharacterized bands may be observed in some lysate(s).)
• purified by: affinity chromatography
• species reactivity: human
• species reactivity (predicted by homology): vertebrates (based on 100% sequence homology.)
• manufacturer/tradename: Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable (ChIP-seq), dot blot: suitable, immunocytochemistry: suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: Q16695
• shipped in: wet ice
• target post-translational modification: trimethylation (Lys4)
• Gene Information: human ... H3C1(8350)

Descrizione

General description

Anticorpo policlonale purificato di coniglio in tampone contenente Tris-glicina 0,1 M (pH 7,4), NaCl 150 mM e azoturo di sodio 0,05%

L′anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys4), N° Cat. 07-473, è un anticorpo policlonale di coniglio che permette di rivelare l'istone H3 trimetilato in lisina 4 ed è stato testato per l'uso in saggi di ChIP, dot blot, immunocitochimica e Western Blotting

L′istone H3.1t (UniProt: Q16695; chiamato anche H3/t, H3t, H3/g) nell'uomo è codificato dal gene HIST3H3 (chiamato anche H3FT) (Gene ID: 8290). Gli istoni sono proteine basiche nucleari altamente conservate che costituiscono la struttura portante dei nucleosomi nella cromatina degli eucarioti. Per questo hanno un ruolo cruciale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione e nella replicazione del DNA così come nella stabilità cromosomica. Due molecole di ciascuno dei quattro istoni (H2A, H2B, H3 e H4) formano un ottamero intorno al quale il DNA si avvolge a formare unità ripetute, chiamate nucleosomi, che limitano l′accessibilità al DNA da parte dell′apparato di trascrizione, che richiede il DNA come stampo. L'istone H3 presenta un dominio globulare principale e una lunga coda N-terminale che fuoriesce dal centro globulare del nucleosoma e può subire diversi tipi di modificazioni epigenetiche che influenzano i processi cellulari. Le code N-terminali delle proteine istoniche sono soggette a modificazioni post-traduzionali, quali fosforilazione, acetilazione e metilazione, che permettono il reclutamento di fattori di regolazione a valle, influenzano la struttura cromatinica e sono decisivi nel processo di trascrizione. L'istone H3 può subire acetilazione a opera delle istone-acetiltransferasi su diversi residui di lisina presenti nella sua coda. Solitamente l'acetilazione è associata ad attività trascrizionale, mentre la metilazione dei residui di lisina e arginina può attivare o sopprimere la trascrizione a seconda del residuo modificato. La trimetilazione dell'istone H3 è uno dei segnali epigenetici più studiati. Modificazioni di tipo H3K4me3 risultano concordemente presenti a livello dei siti di inizio della trascrizione e il dominio H3K4me3 è associato a una maggiore attività di trascrizione e all′identità cellulare nello sviluppo preimpianto e nel processo di derivazione delle cellule staminali embrionali dalla massa cellulare interna e dalle cellule staminali ottenute dal trofoectoderma. (Rif.: Sharifi-Zarchi, A., et al. (2017). BMS Genomics. 18; Article 964; Liu, X., et al. (2016). Nature. 537(7621); 558-562).

Immunogen

Epitopo: lisina 4 trimetilata (Lys4)

Peptide lineare, coniugato con KLH, corrispondente a 10 amminoacidi della regione N-terminale dell′istone H3 umano trimetilato in Lisina 4.

Application

Saggio di ChIP:
un laboratorio indipendente ha convalidato l′uso di questo anticorpo nei saggi di immunoprecipitazione della cromatina (ChIP).
Saggio di Dot blot: un lotto rappresentativo alla diluizione 1:10.000 ha rivelato il trimetil-istone H3 (Lys4) nell′array Absurance
Histone H3 Antibody Specificity Array (N° Cat. 16-667) e nell′array Absurance Histone H2A, H2B, H4 Antibody Specificity Array (N° Cat. 16-665).Saggio di ChIP-seq:
L′immunoprecipitazione della cromatina è stata ottenuta con il kit Magna ChIP HiSens (N° Cat. 17-10460), 1 µL di anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys4) (N° Cat. 07-473), 20 µL di microsfere con Proteina A/G, e cromatina trattata con formaldeide (crosslinked) ottenuta da 1e6 cellule HeLa, seguita da purificazione del DNA mediante sferette magnetiche. Le librerie sono state preparate da campioni di DNA input e ChIP usando protocolli standard con adattatori Illumina contrassegnati da codici a barre e analizzati nello strumento Illumina HiSeq. È stato mappato un eccesso di otto milioni di reads dai file FastQ usando il sistema di allineamento Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml) dopo rimozione dei tag con TagDust (http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/). I picchi sono stati identificati usando MACS (http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/) e i picchi e i reads sono stati visualizzati sotto forma di track personalizzata sul Genome Browser dell′UCSC (http://genome.ucsc.edu) da file nei formati BigWig e BED. I picchi nella fascia del 25% più alto identificati nel dataset 07-473 erano sovrapponibili al 99% ai picchi identificati nel track H3K4me3 BROAD Histone di ENCODE per cellule HeLa S3.

Categoria di ricerca
Epigenetica & funzione nucleare

L′anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys4), N° Cat. 07-473, è un anticorpo policlonale di coniglio che permette di rivelare l'istone H3 trimetilato in lisina 4 ed è stato testato per l'uso in saggi di ChIP, dot blot, immunocitochimica e Western Blotting

Sotto categoria di ricerca
Istoni

Biochem/physiol Actions

Questo anticorpo policlonale di coniglio rivela specificamente l′istone H4 trimetilato in Lisina 4 (H3Kme3).

Physical form

Anticorpo policlonale di coniglio purificato per affinità in tampone contenente Tris-glicina 0,1M (pH 7,4), NaCl 150mM con azoturo di sodio allo 0,05%.

Purificazione per affinità

Preparation Note

Stabile per 1 anno dalla data di ricezione a 2-8ºC.

Analysis Note

Controllo
Estratto nucleare di cellule HeLa

Valutata mediante Western blotting su preparazioni nucleari di cellule HeLa estratte con acido (positive) e istone H3 ricombinante (negativo).

Saggio di Western blotting:
per la rivelazione dell′istone H3 trimetilato (Lys4) in preparazioni nucleari di cellule HeLa estratte con acido è stata utilizzata una diluizione 1:5.000 – 1:10.000 di questo anticorpo.

Other Notes

Sostituisce: 04-791

Legal Information

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

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Informazioni sulla sicurezza

• Classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids