T4455

TEV-Protease

• Synonym(e): P1 protease, TEVp, Tobacco Etch Virus protease, rTEV
• NACRES: NA.54
• UNSPSC Code: 12352204
• Specific activity: ≥3,000 units/mg protein
• Biological source: microbial (Tobacco Etch virus)
• Recombinant: expressed in E. coli

Eigenschaften

• biological source: microbial (Tobacco Etch virus)
• Quality Segment: 200
• recombinant: expressed in E. coli
• description: Contains both a histidine tag and a GST tag
• form: solution
• specific activity: ≥3,000 units/mg protein
• mol wt: 27 kDa
• technique(s): protein purification: suitable
• suitability: suitable for purification of HIS tagged recombinant proteins
• application(s): genomic analysis
• shipped in: wet ice
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

General description

Tabakätzvirus (TEV)-Protease ist ein hilfreiches Instrument für das Entfernen von Fusion-Tags von rekombinanten Proteinen.

Ein modifiziertes 52-kDa-TEV-Proteasekonstrukt, das für eine einfache Entfernung mit Glutathion oder dem His-Select^®-Affinitätsmedium sowohl GST- als auch His-Tags enthält.

TEV-Protease ist eine aufgebaute katalytische Domäne der NIa-Protease des Tabakätzvirus (Tobacco Etch Virus). TEV-Protease ist eine hochspezifische Cysteinprotease, die der Familie der C4-Peptidasen angehört.

TEV-Protease hat eine katalytische (NIa)-Proteasedomäne, die einem Molekulargewicht von 27 kDa entspricht. Sie ist eindeutig mit hoher Spezifizität und bei niedriger Temperatur aktiv.

Application

TEV-Protease wird bei der Entfernung von Histidin-Tags aus der rekombinanten mitogen-aktivierten Proteinkinase 14 (MAPK14), Connexin 43 (Cx43) c-terminalem Fragment und δ1-pyrrolin-5-carboxylat-Reduktase von Oryza sativa verwendet. Außerdem wird sie bei der Eluierung aufgereinigter Proteasome von humanen Leukämie-Zelllinien K562 eingesetzt.

Biochem/physiol Actions

Immobilisierte TEV-Protease auf Streptavidin-Agarose ist ein effizientes Mittel zur Fusionsproteinspaltung. TEV-Protease wurde auch in einer Studie zur Untersuchung der proteolytischen Prozessierung von nlrp1b für Inflammasom-Aktivität verwendet. [1]

TEV-Protease weist die streng eingehaltene 7-Aminosäuren-Spaltungserkennungssequenz Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓Gly/Ser auf.

Die Tabakätzvirus (TEV)-Protease wird einer Autolyse unterzogen; allerdings sind TEV-Protease-Mutanten gegen die Autolyse resistent. Die bakterielle Expression einer rekombinanten TEV-Protease führt zu einer unbefriedigenden Ausbeute und einer geringeren Löslichkeit. Durch die Verwendung von grün fluoreszierenden Fusionsproteinen überwindet die TEV-Protease diese Leistungsdefizite und findet Anwendungsmöglichkeiten in der strukturellen Genomforschung.

Features and Benefits

Unter dem Aspekt einer verbesserten Stabilität und hochspezifischen Aktivität über einen breiten Temperaturbereich hinweg optimal entwickelt und aufgereinigt.

Physical form

Lieferung als >=2 mg/ml in 25 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM NaCl, 1 mM TCEP und 50 % Glycerin

wässrige Glycerinlösung

Preparation Note

Spaltungsprotokoll
Einen frischen Dialysepuffer herstellen. Der Dialysepuffer sollte unter dem Aspekt der Zielprotein-Löslichkeit optimiert werden und keine Protease-Inhibitoren enthalten. Außerdem sollte der Dialysepuffer mit nachgelagerten Aufreinigungsprozessen kompatibel sein, d. h. die Menge von EDTA oder DTT muss minimal sein, wenn eine HIS-Select^®-Säule zum Entfernen des gespaltenen His-Tags verwendet werden soll.
Beispiel eines geeigneten Dialysepuffers: 25 mM Tris-HCl (pH 8,0), 150–500 mM NaCl, 14 mM β-Mercaptoethanol
Die Aktivität dieser TEV-Protease ist sowohl in 150 mM NaCl als auch in 500 mM NaCl und 400 mM Imidazol jeweils gleich.
Die Zielproteinprobe mit Dialysepuffer auf 1 - 2 mg/ml verdünnen. Falls sich das Zielprotein im Dialysepuffer aggregiert, ist dieser Schritt optional. Ein kleines Aliquot als Kontrolle für die PAGE-Analyse aufbewahren. EDTA kann bis zu einer Endkonzentration von 0,5 mM zugegeben werden, wenn das Zielprotein von der HIS-Select^®-Säule eluiert werden soll und EDTA mit dem Zielprotein kompatibel ist.
TEV-Protease in einem Protease-zu-Zielprotein-Verhältnis von 1:100 (w/w) bzw. 10.000 Einheiten (1 mg) TEV-Protease zu 100 mg Zielprotein zugeben. Das Molverhältnis muss nicht berechnet werden. TEV-Protease kann dem Zielprotein direkt zugegeben werden. Weder muss der Puffer geändert noch die TEV-Protease verdünnt werden. Das optimale Verhältnis sollte empirisch ermittelt werden. Ein Protease-zu-Zielprotein-Verhältnis (w/w) von 1:50 bis 1:200 sollte einen wirkungsvollen Bereich für die meisten Zielproteine ermöglichen.
Bei 4 °C ~ 16 Stunden lang gegen den Dialysepuffer dialysieren. Die Dialyse soll Imidazol oder Glutathion entfernen, wenn HIS-Select^®- oder Glutathion-Affinitätssäulen zum Entfernen des gespaltenen Tags oder der TEV-Protease nach der Spaltung verwendet werden.
Normalerweise spaltet 1 mg TEV-Protease > 90 % von 100 mg eines Kontrollproteins bei 4 °C binnen 16 Stunden.

Other Notes

Eine Einheit der TEV-Protease spaltet >85 % von 3 μg des Kontrollsubstrats in einer Stunde bei einem pH-Wert von 8,0 und einer Temperatur von 30 °C.

Legal Information

HIS-Select is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 2
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable