E8263

Benzonase^® Nuklease, hochrein

≥250 units/μL, ≥99% (SDS-PAGE), recombinant, expressed in E. coli, buffered aqueous glycerol solution, ultrapure grade

• Synonym(e): Endonuclease aus Serratia marcescens
• CAS-Nummer: 9025-65-4
• EC-Nummer: 3.1.30.2 (BRENDA, IUBMB)
• MDL-Nummer: MFCD00131010
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Serratia marcescens
• Qualitätsniveau: 200
• Rekombinant: expressed in E. coli
• Qualität: ultrapure grade
• Assay: ≥99% (SDS-PAGE)
• Form: buffered aqueous glycerol solution
• Mol-Gew.: 30 kDa
• Konzentration: ≥250 units/μL
• Anwendung(en): research use
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Anwendung

Das Enzym wurde in einem Assay zur Bestimmung der Menge an Tf1-RNA verwendet, die durch Benzonase Nuklease vor dem Abbau geschützt ist. Das Tf1-Element aus Schizosaccharomyces pombe ist ein Retrotransposon mit langer terminaler Wiederholung, das funktionelle Protease, reverse Transkriptase und Integrase-Proteine kodiert.[1] Außerdem wurde es für die Fraktionierung von Kernpellets und Kernextrakten aus Zelllysaten verwendet.[2]

Entfernung von Nukleinsäure in Proteinproben

Reinste Benzonase Nuklease, oder Endonuklease aus Serratia marcescens, wurde in einer Studie zur Beurteilung der Auswirkungen von Natrium-Dodecylbenzolsulfonat und Entschäumungsmitteln auf die Endonuklease-Aktivität von Serratia marcescens verwendet. Endonuklease aus Serratia marcescens wurde ferner in einer Studie zur Untersuchung der Struktur von Chromatin-Untereinheiten verwendet.

Biochem./physiol. Wirkung

Benzonase^® Nuklease ist eine gentechnisch hergestellte Endonuklease aus Serratia marcescens.[3][4] Das Protein ist ein Dimer aus 30 kDa Untereinheiten mit zwei essentiellen Disulfidbindungen.[5][6][7][8] Diese Endonuklease greift alle DNA- und RNA-Formen (einzelsträngig, doppelsträngig, linear und zirkulär) an, baut diese ab und kann unter unterschiedlichsten Betriebsbedingungen eingesetzt werden. Sie schließt Nukleinsäuren vollständig in 5′-Monophosphat-terminierte Oligonukleotide mit einer Länge von 3 bis 5 Basen auf. Dies ist ideal für die Entfernung von Nukleinsäuren aus rekombinanten Proteinen und für Anwendungen, in denen ein vollständiger Verdau von Nukleinsäuren gewünscht ist. Sie reduziert darüber hinaus die Viskosität in Proteinextrakten und beugt Zellverklumpungen vor. Die Vorbehandlung einer Proteinprobe mit diesem Enzym verbessert ihre Auflösung in der 2D Gel-Elektrophorese durch die Entfernung aller gebundenen Nukleinsäuren. Der optimale pH-Wert für die Enzymaktivität liegt zwischen 8,0 und 9,2.

Verdaut native oder hitzedenaturierte DNA und RNA.

Einheitendefinition

Eine Einheit verdaut mit Ultraschall behandelte Lachssperma-DNA in säurelösliche Oligonukleotide entsprechend einem ΔA₂₆₀ von 1,0 in 30 min bei einem pH-Wert von 8,0 bei 37 °C (Reaktionsvolumen 2,625 ml).

Physikalische Form

Lösung in 50 % Glycerin, mit 20 mM Tris HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl₂ und 20 mM NaCl.

Rechtliche Hinweise

Benzonase^® Nuklease wird von der Merck KGaA, Darmstadt, Deutschland und/oder einer ihrer Tochtergesellschaften geliefert.

Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Persönliche Schutzausrüstung: Eyeshields, Gloves