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Roche

DIG RNA-Markierungsmix

sufficient for 20 reactions, solution

Synonym(e):

Nukleinsäuremarkierung

Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise
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About This Item

UNSPSC-Code:
41105500

Form

solution

Qualitätsniveau

100

Verwendung

sufficient for 20 reactions

Verpackung

pkg of 40 μL

Hersteller/Markenname

Roche

Verunreinigungen

Ribonuclease, none detected (up to 20 µl using MSII-RNA)

Farbe

colorless

Löslichkeit

water: miscible

Lagertemp.

−20°C

Allgemeine Beschreibung

Markierungseffizienz: Etwa 10μg digoxigeninmarkierte RNA voller Länge wird aus 1μg linearer Template-DNA transkribiert.
Testzeit: 135 Minuten
Probenmaterialien
Linearisierte Plasmid-DNA:
Die zu transkribierende DNA wird in die Polylinkerstelle eines geeigneten Transkriptionsvektors kloniert, der neben dem Polylinker einen Promoter für SP6, T7 oder T3 RNA-Polymerase enthält. Für die Synthese von „Run-off-Transkripten“ wird das Plasmid durch ein Restriktionsenzym linearisiert. Es sollten Restriktionsenzyme verwendet werden, die 5′-Überhänge erzeugen; 3′-Überhänge sollten vermieden werden. Die linearisierte Template-DNA sollte durch Phenolchloroform-Extraktion und Ethanol-Ausfällung aufgereinigt werden, um eine RNase-Kontamination zu vermeiden. Für ′Run-around′-Transkription wird zirkuläre Plasmid-DNA verwendet.
PCR-Produkt:
PCR-Fragmente, die RNA-Polymerase-Promotersequenzen enthalten, können ebenfalls als Templates für die Transkription verwendet werden. Die Aufreinigung des PCR-Fragments mithilfe einer HighPure-Säule vor der Transkription wird empfohlen.
DIG-markierte, einzelsträngige RNA-Sonden definierter Länge werden durch In-vitro-Transkription erzeugt. Unter Standardbedingungen wird DIG-11-UTP durch SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen bei etwa jedem 20. bis 25. Nukleotid des Transkripts eingebaut. Der DIG RNA-Markierungsmix wurde spezifisch zur Verwendung mit SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen entwickelt, die mit einem optimierten Transkriptionspuffer geliefert werden.
Praktische Nukleotidmischung zur Markierung von RNA mit Digoxigenin-11-UTP.

Inhalt
10x-Lösung mit: 10 mM ATP, CTP, GTP (jeweils), 6,5 mM UTP, 3,5 mM DIG-11-UTP.

Spezifität

Hitzeinaktivierung: Die Reaktion wird durch Zugabe von 2 μl 0,2 M EDTA (pH 8,0) gestoppt.

Anwendung

RNA-Markierung mit Digoxigenin-11-UTP durch In-vitro-Transkription mit SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen. DIG-markierte RNA werden in verschiedenen Hybridisierungsmethoden eingesetzt:
  • Northern Blots
  • Northern Blots
  • Dotblots
  • Plaque- oder Kolonie-Lifts
  • RNase-Schutzversuche
  • Chromosomen, Zellen und Gewebeschnitte in situ

Leistungsmerkmale und Vorteile

Der DIG RNA-Markierungsmix wurde spezifisch zur Verwendung mit SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen von Roche entwickelt, die mit einem optimierten Transkriptionspuffer geliefert werden.

Qualität

Funktionsgetestet im DIG RNA-Markierungskit und im DIG Nukleinsäure-Detektionskit.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Piktogramme

Exclamation mark
GHS07

Signalwort

Warning

H-Sätze

H302

Gefahreneinstufungen

Acute Tox. 4 Oral

Lagerklassenschlüssel

12 - Non Combustible Liquids

WGK

WGK 1

Flammpunkt (°F)

does not flash

Flammpunkt (°C)

does not flash

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Unser Team von Wissenschaftlern verfügt über Erfahrung in allen Forschungsbereichen einschließlich Life Science, Materialwissenschaften, chemischer Synthese, Chromatographie, Analytik und vielen mehr..

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