662200
Kit zur Anreicherung ubiquitärer Proteine
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About This Item
UNSPSC-Code:
41116133
Empfohlene Produkte
Verwendung
kit sufficient for 12.5-25 mg process (lysate)
Qualitätsniveau
Hersteller/Markenname
Calbiochem®
Lagerbedingungen
do not freeze
Lagertemp.
2-8°C
Allgemeine Beschreibung
Eine große Mehrheit kurzlebiger Proteine wird über den Ubiquitin-Proteasom-Signalweg abgebaut. Ein für den Abbau markiertes Protein wird durch ein multienzymatisches System, das aus Ubiquitin-aktivierenden (E1), Ubiquitin-konjugierenden (E2) und Ubiquitin-ligierenden (E3) Enzymen besteht, kovalent an mehrere Moleküle von Ubiquitin, einem hochkonservierten Protein mit 76 Aminosäuren (8,6 kDa), gebunden. Das E1 aktiviert ein Ubiquitin-Monomer an seinem C-terminalen Cystein-Rest zu einer energiereichen Thiolester-Bindung, die dann auf einen reaktiven Cystein-Rest des E2-Enzyms übertragen wird. Die endgültige Übertragung von Ubiquitin auf die E-Aminogruppe eines reaktiven Lysinrestes von Substratproteinen wird durch das E3-Enzym bewirkt. Ubiquitinierte Proteine werden dann zum 26S-Proteasom eskortiert, wo sie endgültig abgebaut werden und das Ubiquitin freigesetzt und recycelt wird. Eine Familie von Proteinen, zu der auch Rad23 gehört, enthält zwei Ubiquitin-assoziierte Domänen, die ubiquitinierte zelluläre Proteine binden und sie zum Proteasom transportieren. Ubiquitinierte Proteine können mit Affinitätsperlen angereichert werden, die aus einem GST-Fusionsprotein bestehen, das diese Ubiquitin-assoziierte Sequenz enthält und mit Glutathion-Agarose konjugiert ist.
Eine schnelle Methode zur Isolierung ubiquitinierter Proteine unter Verwendung von Affinitätsperlen, die aus einem GST-Fusionsprotein bestehen, das eine Ubiquitin-assoziierte Sequenz enthält, die an Glutathion-Agarose gebunden ist. Nützlich für die Anreicherung von polyubiquitinierten Proteinen aus Zell- und Gewebelysaten einer breiten Palette von Spezies, einschließlich Hund, Mensch, Maus und Hefe. Die ubiquitinierten Proteine können identifiziert werden, indem die Perlen direkt auf SDS-PAGE geladen und dann mittels Immunblotting mit dem Antikörper der Wahl oder Anti-Ubiquitin (Best.-Nr. 662099) identifiziert werden. Alternativ ist es möglich, die Perlen mit Isopeptidase T (Best.-Nr. 419700) zu behandeln, um die Proteine von den Ubiquitinketten zu lösen.
Komponenten
Polyubiquitin-Affinitätsperlen, Kontroll-Glutathion-Agarose-Perlen, Kontroll-Lysat und ein Benutzerprotokoll.
Warnhinweis
Toxizität: Mehrere Toxizitätswerte, siehe MSDS (O)
Lagerung und Haltbarkeit
Nach Eingang den gesamten Inhalt des Kits bei 4 °C lagern.
Sonstige Hinweise
Chen, L. and Madura, K. 2002. Mol. Cell Biol. 22, 4902.
Chen, L., et al. 2001. EMBO Rep.2, 933.
Chen, L., et al. 2001. EMBO Rep.2, 933.
Rechtliche Hinweise
Verkauft unter Lizenz der PCT-Anmeldung wo 03/049,602.
CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Signalwort
Danger
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Acute Tox. 4 Dermal - Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Repr. 2 - Skin Sens. 1
Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
Analysenzertifikate (COA)
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