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  • Evaluation of the sensitivity, responsiveness and reproducibility of primary rainbow trout hepatocyte vitellogenin expression as a screening assay for estrogen mimics.

Evaluation of the sensitivity, responsiveness and reproducibility of primary rainbow trout hepatocyte vitellogenin expression as a screening assay for estrogen mimics.

Aquatic toxicology (Amsterdam, Netherlands) (2015-01-07)
Maria T Hultman, Jan Thomas Rundberget, Knut Erik Tollefsen
RESUMO

Vitellogenin (Vtg) induction in primary fish hepatocytes has been proposed as an in vitro screening assay for ER agonists and antagonists, but has not yet been used extensively as a high-throughput screening tool due to poor reproducibility, sensitivity and overall feasibility. The present work has evaluated the role of seasonal variation, normalization, optimal culture and assay conditions on the sensitivity, responsiveness and reproducibility of in vitro vtg gene mRNA and protein expression in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) primary hepatocytes using the xenoestrogen 17α-ethynylestradiol (EE2) as a test chemical. The results show that primary hepatocytes display a relatively high individual and seasonal variation in both Vtg mRNA and protein induction potential, although less variance was observed in assay sensitivity. Data normalization of assay response to maximum (3 nM EE2) and minimum (DMSO) Vtg production dramatically reduced this variance and led to improved assay reproducibility. A time-dependent response was observed both for mRNA and protein expression, reaching maximum Vtg induction after 96 h of exposure, although reproducible concentration response curves for both Vtg mRNA and protein could be obtained already after 48 h. A need for chemical re-exposure of the hepatocytes was identified to be important for sustaining exposure concentrations in extended studies (>48 h), whereas different plate formats (96, 24 or 6 wells) did not affect the bioassay performance. In conclusion, standardization of hepatocyte bioassay and test conditions as well as data-normalization procedures are proposed to be instrumental for more consistent and comparable results in future use of this in vitro assay.

MATERIAIS
Número do produto
Marca
Descrição do produto

Sigma-Aldrich
Metanol, suitable for HPLC, ≥99.9%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Acetona, ACS reagent, ≥99.5%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Metanol, ACS reagent, ≥99.8%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Acetona, suitable for HPLC, ≥99.9%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Metanol, suitable for HPLC, gradient grade, ≥99.9%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Acetona, HPLC Plus, for HPLC, GC, and residue analysis, ≥99.9%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Tolueno, ACS reagent, ≥99.5%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Bicarbonato de sódio, ACS reagent, ≥99.7%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Metanol, HPLC Plus, ≥99.9%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Carbonato de sódio, powder, ≥99.5%, ACS reagent
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Tolueno, suitable for HPLC, 99.9%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Tolueno, HPLC Plus, for HPLC, GC, and residue analysis, ≥99.9%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Bicarbonato de sódio, powder, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Acetona, Laboratory Reagent, ≥99.5%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, ACS reagent, ≥97%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Carbonato de sódio, ACS reagent, anhydrous, ≥99.5%, powder or granules
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Bicarbonato de sódio, ReagentPlus®, ≥99.5%, powder
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, ≥99.99% trace metals basis
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Copper(II) sulfate, ReagentPlus®, ≥99%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Metanol, suitable for HPLC, gradient grade, suitable as ACS-grade LC reagent, ≥99.9%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Metanol, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.8% (GC)
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Tolueno, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.7% (GC)
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Acetona, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.5% (GC)
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Carbonato de sódio, ACS reagent (primary standard), anhydrous, 99.95-100.05% dry basis
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Metanol, Laboratory Reagent, ≥99.6%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Cloreto de dansila, BioReagent, suitable for amino acid labeling, powder and chunks, ≥99% (HPLC)
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Bicarbonato de sódio, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ACS reagent, ≥99.7%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Carbonato de sódio, ReagentPlus®, ≥99.5%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Acetona, suitable for HPLC, ≥99.8%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.
Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, for molecular biology, ≥98%
Preço e disponibilidade não estão disponíveis no momento.