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Kits de isolamento de organelas celulares

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A F-actina é visível nas células como longas linhas retas que cobrem as células. Essas linhas se estendem por toda a imagem, uma vez que as células cobrem a imagem.

F-actina conjugada com TRITC em células tratadas com o Kit de enriquecimento e coloração do citoesqueleto ProteoExtract.

Pequenos pontos cobrem a superfície das células, de modo que nenhum ponto é totalmente visível. As células cobrem a parte superior da imagem e se expandem para a parte inferior central da imagem.

Contatos de ponto focal visualizados usando o anticorpo Vinculin e o anticorpo secundário conjugado com FITC em células não tratadas com o Kit de enriquecimento e coloração do citoesqueleto ProteoExtract.

Pequenos pontos cobrem a superfície das células, de modo que nenhum ponto é totalmente visível. A F-actina é visível nas células como longas linhas retas que cobrem a célula. O núcleo é visível como uma forma oval no meio de cada uma das células. Essas células cobrem a parte superior da imagem e se estendem até a parte inferior central da imagem.

F-actina, contatos de ponto focal e o núcleo são visualizados e sobrepostos em células não tratadas com o Kit de enriquecimento e coloração do citoesqueleto ProteoExtract.

A F-actina é visível nas células como longas linhas retas que cobrem as células. Essas linhas cobrem a parte superior da imagem e se expandem para a parte inferior central da imagem.

F-actina conjugada com TRITC em células não tratadas com o Kit de enriquecimento e coloração do citoesqueleto ProteoExtract.

Pequenos pontos cobrem a superfície das células, e cada ponto é visível a partir de outro. As células cobrem a totalidade da imagem.

Contatos de ponto focal visualizados usando o anticorpo Vinculin e o anticorpo secundário conjugado com FITC em células tratadas com o Kit de enriquecimento e coloração do citoesqueleto ProteoExtract.

Pequenos pontos cobrem a superfície das células, e cada ponto é visível a partir de outro. A F-actina é visível nas células como longas linhas retas que cobrem as células. O núcleo é visível como uma forma oval no meio de cada uma das células. Essas células cobrem a totalidade da imagem.

F-actina, contatos de ponto focal e o núcleo são visualizados e sobrepostos em células tratadas com o Kit de enriquecimento e coloração do citoesqueleto ProteoExtract.

Embora o estudo de células derivadas de tecidos in vivo seja mais preditivo da biologia e função celular, a complexidade biológica pode confundir os resultados a menos que as populações de células-alvo sejam isoladas. Para estudar os fenótipos celulares, diversos métodos evoluíram para isolar populações celulares com base nas características definitivas. O isolamento de populações celulares não apenas ajuda na pesquisa biológica, como também facilita testes diagnósticos clínicos. Os métodos de isolamento mais eficazes demonstram rendimento, pureza e viabilidade aprimorados. O enriquecimento ou a purificação de populações-alvo pode ser obtido por seleção positiva, frequentemente com o emprego de anticorpos que se ligam a marcadores específicos para células, ou por seleção negativa, que pode usar propriedades biofísicas para remover células indesejadas para enriquecer a população-alvo.

Há bastante tempo, o fracionamento de células em componentes subcelulares é essencial para estudos de biologia celular. Técnicas de fracionamento subcelular foram amplamente usadas para estudar a estrutura e a função de organelas e compartimentos subcelulares, bem como entender o local, processamento e tráfego de biomoléculas. O objetivo da maioria das técnicas de fracionamento é obter organelas e macromoléculas celulares em um estado funcional, em que podem reter suas propriedades bioquímicas intrínsecas. Muitas vezes, isso é obtido por lise celular empregando meios mecânicos brandos ou com detergentes suaves, seguida frequentemente pelo fracionamento de componentes celulares por centrifugação diferencial.

As células são preenchidas com círculos de vários tamanhos, indicando gotículas de lipídios. As gotículas de lipídios e as células visíveis estão no primeiro plano da imagem.

Gotículas de lipídios visíveis confirmam o isolamento de pré-adipócitos 7 dias após a diferenciação usando o kit de diferenciação 3T3-L1.

Kits de isolamento de organelas e complexos subcelulares

A derivação de componentes subcelulares promove o entendimento da função de organelas e pode levar a novas biotecnologias. Por exemplo, núcleos isolados de células de mamíferos podem ser usados posteriormente para a síntese de transcritos primários de RNA endógeno. O kit de preparo de núcleos de alto rendimento EZ (NUC101, NUC201) foi desenvolvido para o rápido isolamento de núcleos da maioria das células de mamíferos.

Para a detecção de integridade mitocondrial e potencial de membrana, nosso kit de coloração mitocondrial (CS0390, CS0760) usa o corante JC-1 (420200, T4069), que se concentra na matriz mitocondrial para formar agregados vermelhos fluorescentes. Eventos como apoptose que dissipam o potencial da membrana mitocondrial impedem o acúmulo do corante JC-1 nas mitocôndrias e um microscópio fluorescente pode ser usado em seguida para distinguir as mitocôndrias viáveis das danificadas.

Complexos subcelulares que não são organelas, como proteassomas, também podem ser isolados para uso em ensaios proteolíticos. Nosso método usa esferas de matriz de afinidade contendo uma proteína de fusão GST com um domínio semelhante à ubiquitina ligado a GST-agarose.

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